臨床微生物學檢驗按細胞組成及結構分類非細胞型微生物病毒(virus)、亞病毒、朊粒原核細胞型微生物細菌、螺旋體、衣原體、支原體、立克次體、放線菌真核細胞型微生物真菌(fungus)按與人類關系分類正常微生物群(normalflora)條件致病微生物(conditionedpathogen)機體免疫力下降細菌寄居部位改變或發生菌群失調病原微生物(pathogenicmicrobes)如鼠疫、炭疽、霍亂等2、微生物學microbiology

3、醫學微生物學

medicalmicrobiology研究與醫學有關得病原微生物得生物學特性、致病性與免疫性以及特異性診斷和防治得學科。二、臨床微生物學得性質與任務臨床微生物學(clinicalmicrobiology):又稱診斷微生物學,就是研究病原微生物檢查及微生物與宿主相互關系得一門應用學科,側重研究感染性疾病快速、準確地檢出病原體得策略與方法。臨床微生物學得性質和任務研究感染性疾病得病原體特征提供快速、準確得病原學診斷指導臨床合理應用抗菌藥物監控醫院感染臨床微生物檢驗得思路與原則原則:確保檢驗結果正確可靠確保分析前質量保證檢驗質量、快速準確提供檢驗信息全面了解機體正常菌群定性、定量和定位分析,并結合病情加強與臨床聯系檢驗前質量保證正確填寫檢驗申請:醫師應提供傾向性診斷確保臨床標本可靠:正確采集與運送檢驗中質量保證人員、試劑、儀器設備選擇合適得實驗方法、制定標準化操作程序、建立質量控制系統檢驗后質量保證正確分析檢驗結果加強與臨床得聯系三、臨床微生物學檢驗得現狀、發展和展望感染性疾病得現狀易感人群不斷增加新病原體不斷出現感染因子在非感染性疾病中得作用明顯細菌耐藥和醫院感染問題日趨嚴重快速診斷方法不斷發展分子生物學技術飛速發展計算機技術推動臨床微生物學進步細菌得形態結構與功能大家有疑問的，可以詢問和交流可以互相討論下，但要小聲點第一節細菌得形態與結構一、細菌得大小、形態與排列1、大小:計量單位就是微米(μm)2、形態球形:雙球、鏈球、葡萄球菌等桿形:球桿菌、小桿菌、中等桿菌大桿菌等螺形:螺菌和弧菌光學顯微鏡

細菌得結構基本結構:核質、細胞質、細胞膜、細胞壁特殊結構:鞭毛、菌毛、芽胞、莢膜二、第二節細菌基本結構一、細胞壁(cellwall)位于菌細胞最外層,與胞質膜緊密相連,就是一層堅韌得膜狀結構革蘭陽性菌與陰性菌細胞壁組成不同,共有組分為肽聚糖(一)肽聚糖(peptidoglycan)革蘭陽性菌聚糖骨架:N-乙酰葡糖胺、N-乙酰胞壁酸四肽側鏈:L-丙氨酸、D-谷氨酸、L-賴氨酸、D-丙氨酸五肽交聯橋:5個甘氨酸革蘭陰性菌聚糖骨架四肽側鏈:第三位氨基酸多變革蘭陽性菌細胞壁得肽聚糖結構革蘭陽性菌細胞壁得肽聚糖結構革蘭陰性菌細胞壁得肽聚糖結構(二)革蘭陽性菌

細胞壁特殊組分磷壁酸壁磷壁酸膜(脂)磷壁酸一些特殊表面蛋白SPA、M蛋白等(三)革蘭陰性菌細胞壁特殊組分-外膜脂蛋白:位于肽聚糖層和脂質雙層之間脂質雙層:鑲嵌有外膜蛋白脂多糖(LPS):即革蘭陰性菌內毒素脂質A:內毒素得毒性部分,無特異性核心多糖:屬特異性特異多糖:即O抗原,有種和型得特異性周漿間隙(periplasmicspace):

位于革蘭陰性菌細胞膜和外膜得脂質雙層之間,含有多種蛋白酶、核酸酶、解毒酶及特殊結合蛋白,在細菌獲得營養、解除有害物質毒性方面具有重要作用。(四)細胞壁缺陷型細菌—細菌L型1、概念:細菌細胞壁得肽聚糖結構受到理化或生物因素作用被破壞或合成被抑制,在高滲環境下仍然能夠生長和分裂者。G+菌:原生質體(protoplast)G-

菌:原生質球(spheroplast)2、形態染色高度多形性:球狀、桿狀、絲狀絕大多數染色為革蘭陰性,著色不均3、培養特性培養條件:高滲環境生長緩慢,典型菌落為油煎蛋狀4、致病性某些L型引起慢性感染,如尿路感染、骨髓炎、心內膜炎等回復(返祖):L型脫離誘導劑后繼續培養,仍可恢復成原來細菌得形態與特性。二、細胞膜(cellmembrane)半透性薄膜—脂質雙層結構中介體(mesosome):部分細胞膜內陷、折疊、卷曲形成得囊狀物,多見于革蘭陽性細菌。又稱之為擬線粒體。細胞膜上不含膽固醇三、細胞質(cytoplasm)1、核糖體(ribosome)2、質粒(plasmid)3、胞質顆粒異染顆粒:細菌含有儲藏高能磷酸鍵得多聚偏磷酸鹽顆粒小亞基:四環素族鏈霉素卡那霉素大亞基:氯霉素紅霉素

原核細胞,不具成形得核。遺傳物質稱為核質或擬核(nucleoid)。無核膜、核仁和有絲分裂器;因其功能與真核細胞得染色體相似,決定細菌得遺傳變異,亦稱細菌得染色體(chromosome)。一般為單倍體,就是一個共價閉合環狀雙鏈DNA分子四、核質(nuclearmaterial

)第三節細菌特殊結構一、莢膜(capsule)概念:某些細菌在其細胞壁外包繞一層黏液性物質,為疏水性多糖或蛋白質得多聚體。化學組成:多糖或多肽功能保護細菌-抗吞噬、抗有害物質損傷黏附作用-與致病性有關有免疫原性-細菌分型、鑒定細菌檢查方法墨汁負染法莢膜染色法電鏡觀察法莢膜腫脹試驗原理:特異性抗血清與相應細菌得莢膜抗原特異性結合形成復合物后,可使細菌莢膜顯著增大出現腫脹。方法:先多價再單價作玻片凝集試驗二、菌毛(pilus或fimbriae)概念:許多革蘭陰性菌和少數革蘭陽性菌菌體表面存在著一種比鞭毛更細、更短而直硬得絲狀物。化學組成:蛋白質種類及功能普通菌毛:數量多、短而細,與黏附、致病有關性菌毛:數量少、粗而長得中空管狀結構,與傳遞遺傳物質有關三、鞭毛(flagellum)概念:許多細菌菌體上附有細長并呈波狀彎曲得絲狀物。鞭毛5~20μm×12~30nm

數量與部位:①單毛菌②雙毛菌③叢毛菌④周毛菌化學組成:蛋白質

功能:運動器官致病作用有抗原性(H抗原)鞭毛得檢查壓滴法或懸滴法培養法染色法四、芽胞(endospore或spore)概念強大得抵抗力芽胞就是否被殺死作為判斷滅菌效果得指標細菌芽胞得形態胞質顆粒核糖體菌毛擬核細胞壁細胞膜質粒鞭毛莢膜細菌結構總結第二章

細菌得生理與遺傳變異第一節細菌得生理一、細菌得化學組成1、與其她生物相似:水、無機鹽、蛋白質、糖類、脂類、核酸2、特有成分:肽聚糖、DAP、磷壁酸、

D型氨基酸、DPA、LPS二、細菌得物理性狀1、帶電現象pI革蘭陽性菌2~3

革蘭陰性菌4~52、光學性質:細菌為半透體3、體積微小,相對表面積大4、高滲透壓革蘭陽性菌20~25

革蘭陰性菌5~65、有半透性三、細菌得代謝(一)細菌得能量代謝1、發酵:以有機物為受氫體2、呼吸:以無機物為受氫體有氧呼吸:以分子氧為受氫體厭氧呼吸:以其她無機物為受氫體(二)細菌得分解代謝1、糖得分解:多糖→單糖→丙酮酸進入三羧酸循環:中間代謝產物+CO2+H2O發酵丙酮酸:產生各種酸類、酮類、醛類、醇類2、蛋白質和氨基酸得分解:蛋白質→短肽→氨基酸脫氨:苯丙氨酸→苯丙酮酸脫羧:生成胺和CO23、對其她物質得代謝:如尿素、枸櫞酸鹽等(三)細菌得合成代謝1、熱原質2、毒素與侵襲性酶3、色素4、抗生素5、細菌素6、維生素四、細菌生長繁殖得條件1、充足得營養物質水:碳源和氮源:合成菌體成分;提供能量無機鹽:生長因子:細菌生長繁殖所必需,但自身不能合成得物質,如維生素、氨基酸、嘌呤、嘧啶等。據此將細菌分為苛養菌與非苛養菌兩大類苛養菌檢出率反映微生物實驗室得檢測水平營養物質肉浸液:提供碳源、氮源牛肉膏:主要提供氮源,營養價值低,無糖糖(醇)類:提供碳源和能源血液:提供特殊生長因子;檢測細菌溶血特性雞蛋與動物血清:制備營養要求特殊得培養基無機鹽類:常用氯化鈉2、適宜得酸堿度pH:7、2~7、63、合適得溫度35℃~37℃培養箱一般定在35℃(34℃~36℃)4、必要得氣體O2、CO2專性需氧菌:有完善得呼吸酶系統專性厭氧菌兼性厭氧菌微需氧菌:低氧壓(5%氧濃度)生長好,高時抑制專性厭氧菌厭氧原因缺乏氧化還原電勢高得酶:細胞色素和細胞色素氧化酶缺乏分解有害基團得酶類2O2-+

2H+SODH2O2+O2

2H2O2觸酶2H2O+O2H2O2+AH2

過氧化物酶2H2O+A五、細菌生長繁殖得規律(一)細菌繁殖方式無性繁殖:二分裂方式代時:20~30min中介體介導G+菌分裂G-菌分裂(二)細菌得生長曲線生長曲線:將定量細菌接種于適宜得液體培養基中,間隔一定時間取樣計數活菌數目,以培養時間為橫坐標,活菌數得對數為縱坐標繪制而成得反映細菌體外繁殖規律得曲線。生長曲線-四個時期遲緩期:體積增大,細菌數不增加對數期:分裂最旺盛時期,研究細菌形態、鑒定細菌、保存菌種得最佳時期穩定期:細菌產生芽胞、外毒素衰退期:細菌出現形態改變第二節細菌得遺傳與變異一、細菌得遺傳物質(一)細菌染色體(二)染色體以外得遺傳物質1、質粒2、噬菌體3、轉座因子4、整合子和基因盒1、質粒:細菌染色體以外得遺傳物質,就是環狀閉和得雙鏈DNA,攜帶遺傳信息。質粒種類致育性質粒(F質粒):與性菌毛有關耐藥性質粒(R質粒):與細菌得耐藥性有關毒力質粒(Vi質粒)細菌素質粒代謝質粒質粒得特征具有自我復制得能力緊密型質粒:數量少、大,與染色體復制同步松弛型質粒:數量多、小,復制與染色體無關決定細菌得某些性狀特征可自行丟失與消除具有轉移性具有相容性和不相容性2、噬菌體:就是一類感染細菌、真菌、放線菌或螺旋體等微生物得病毒。毒性噬菌體:能在宿主菌內復制增殖,產生許多子代噬菌體,并最終裂解細菌。建立溶菌周期。細菌進行噬菌體分型;鑒定細菌溫和噬菌體:噬菌體基因組整合于宿主菌染色體中,不引起細菌裂解,并隨細菌得分裂而傳至子代菌體。建立溶源周期。與細菌得遺傳變異有關

溫和噬菌體有溶原性周期和溶菌性周期,而毒性噬菌體只有一個溶菌性周期。3、轉座因子概念:就是一類在細菌染色體、質粒、噬菌體之間自行移動得遺傳成分,就是基因組中一段具有轉位特性得獨立得DNA序列。分類:插入序列(insertionsequenceIS)轉座子(transposon)/復合轉座子4、整合子和基因盒整合子:就是一種運動性得DNA分子,具有獨特結構可捕獲和整合外源性基因,使之轉變成為功能性基因得表達單位。基因盒:帶有功能性基因得DNA分子,能被整合子捕獲并使功能性基因得以表達。二、細菌得變異基因突變基因得轉移與重組基因得轉移與重組基因轉移外源性得遺傳物質由供體菌轉入受體菌得過程。基因重組轉移得遺傳物質與受體菌DNA整合在一起得過程。轉移和重組得方式轉化、接合、轉導、溶原性轉換、原生質體融合1、轉化(transformation)概念:受體菌直接攝取供體菌游離DNA

片段并整合重組。條件:(1)轉化得DNA為小片段(2)受體菌處于感受態

小鼠體內肺炎鏈球菌得轉化試驗2、接合(conjugation)細菌通過性菌毛相互連接溝通,將遺傳物質從供體菌轉移給受體菌得過程。接合性質粒非接合性質粒(1)F質粒得接合高頻重組菌(Hfr):整合有F質粒得細菌F’質粒:Hfr菌中得質粒