5S9.11.220B41NY中華人民共和國農業行業標準NY/T538—2002雞傳染性鼻炎診斷技術Diagnostictechniquesforinfectiouscoryza2002-08-27發布2002-12-01實施中華人民共和國農業部發布

NY/T538-2002三雞傳染性鼻炎(IC)是由副雞曙血桿菌(hpg)引起的一種雞的急性上呼吸道傳染病，本病在世界各地均有發生.主要引起蛋雞產蛋率下降、生長發育雞群的生長受阻及淘汰率增加，造成很大的經濟損失。副雞暗血桿菌通常分為A、B、C三個血清型，在我國能引起傳染性鼻炎的菌型目前為A型和C型，它們具有共同抗原和各自的型特異性抗原，可以通過檢測這些型特異性抗原來鑒定hpg的血清型。本標準提供了多種診斷雞傳染性鼻炎的方法，在使用中應根據雞群發病后至診斷時的間隔時間長短及使用單位的具體情況選擇使用。建議在雞群發病早期采用病原的分離鑒定或聚合酶鏈反應(PCR）方法進行診斷.感染一周以后可以采用血清平板凝集試驗進行診斷,兩周后可以采用瓊脂擴散試驗、間接醇聯免疫吸附試驗(EL.ISA)和阻斷EI.SIA進行診斷，三周后以上各種檢查抗體的方法均可使用。本標準的附錄A、附錄B、附錄C、附錄D、附錄E、附錄F為規范性附錄。本標準由農業部畜牧善醫局提出。本標準由全國動物檢疫標準化技術委員會歸口。本標準起草單位：北京市農林科學院畜牧獸醫研究所本標準主要起草人：苗得園、陳小玲、張培君、陳費、宋程、龔玉梅。

NY/T538-2002雞傳染性鼻炎診斷技術1范圍本標準規定了檢測副雞哺血桿菌的細菌分離鑒定方法、PCR技術以及檢測副雞暗血桿菌特異性抗體的血清平板凝集試驗、血凝抑制試驗、間接酶聯免疫吸附試驗、阻斷酶聯免疫吸附試驗的操作方法。本標準適用于雞和其他易感動物的傳染性鼻炎的診斷。菌的分離鑒定2.1材料準備2.1.1無菌棉拔子、鮮血瓊脂平板培養基.2.1.2產煙酰胺腺鏢嶺二核替酸(或輔酶」,NAD)表皮葡萄球菌。2.2操作程摩2.2.1無菌打開可疑病雞的眶下突，用滅菌棉技子髓取其中粘液或漿液。2.2.2用棉執子在鮮血瓊脂平血上橫向劃線5～7條，然后取產NAD表皮葡萄球菌從橫線中間劃-縱線。2.2.3將劃種好的平血置于5%的二氧化碳(CO.)培養箱中37℃培養18h～24h。2.2.4觀家菌落特點。2.2.5取分離物做過氧化氫酶試驗·必要時通過進-一步的生化反應做詳細的特征鑒定。副雞暗血桿菌的生化反應特點及過氧化氫酶試驗方法見附錄A。2.2.6也可采用PCR鑒定可疑菌落，同時取病料或可疑菌落進行動物試驗，方法見附錄B.。2.3結果判定與表示方法若鮮血瓊脂培養基上出現"衛星樣"生長的露滴狀、針頭大小的小菌落，即靠近產NAD表皮葡萄球菌線處菌落較大，直徑可達0.3mm,離產NAD表皮葡萄球菌線越遠，菌落越小，過氧化氫酶陰性，結果判為陽性，記為"十"，若無衛星現象，但有蟹滴狀、針頭大小的小菌落出現且過氧化氫酶陰性，則仍需采用PCR或動物試驗鑒定，以避免漏檢不需NAD的副雞暗血桿菌。若無上述現象，則判為陰性，記為3聚合酶鏈反應（PCR）技術3.1材料準備3.1.1.PCR反應液、消化液、陰、陽性對照物，按說明書保存和使用。3.1.2石蠟油、生理鹽水、蒸館水、1.5ml.及0.5mL小離心管、吸頭若干，均經滅菌處理3.1.3PCR儀、56℃水浴鍋、微量加樣器、小型高速離心機、冰塊等。3.1.4！瓊脂糖、電泳儀、水平電球槽、紫外檢測儀。3.1.510mg/mL溴化乙鍵，加樣綬沖液,TAE電泳緩沖液，配制方法見附錄C。3.2操作程序3.2.1PCR臨床樣品的采集無菌打開可疑病雞的眶下