1、免疫學(xué)PBL-2 實(shí)驗(yàn)室檢查紅細(xì)胞沉降率檢查l紅細(xì)胞沉降率檢查ESR反映了紅細(xì)胞的懸浮穩(wěn)定性，通常以紅細(xì)胞在第一小時(shí)末下沉的間隔表示。lNORM：成年男性：015mm/hl 成年女性：0-20mm/hl紅細(xì)胞的懸浮穩(wěn)定性來自于紅細(xì)胞與血漿之間的摩擦妨礙RBC下沉。在某些疾病中RBC彼此能較快地以凹面相貼，稱紅細(xì)胞疊連。使總外表積減小因此摩擦力減小，故下沉加快。l血沉決議于血漿性質(zhì)，血漿中纖維蛋白原、球蛋白和膽固醇增多時(shí)，血沉加快；血漿中白蛋白、卵磷脂含量增多時(shí)血沉降低。抗中性粒細(xì)胞胞漿抗體測(cè)定l抗中性粒細(xì)胞胞漿抗體Antineutrophil Cytoplasmic Autoantibodie

2、s，ANCA是一種以人類中性粒細(xì)胞和單核細(xì)胞胞漿成分為靶抗原的本身抗體，與臨床多種小血管炎性疾病親密相關(guān)。對(duì)系統(tǒng)性血管炎、炎癥性腸病等多種疾病的診斷與鑒別診斷具有重要意義，已成為本身免疫性疾病的一項(xiàng)非常重要的常規(guī)檢測(cè)工程。lANCA的檢測(cè)可分為總ANCA和特異ANCA兩種。總ANCA多用間接免疫熒光IIF，特異ANCA多用ELISA。lIIF：酒精或甲醛固定人中性粒細(xì)胞與載玻板上作為抗原，待測(cè)血清中ANCA與其結(jié)合后，熒光標(biāo)志的抗人IgG抗體孵育。l cANCA：在中性粒細(xì)胞的整個(gè)胞漿呈現(xiàn)出彌散的細(xì)顆粒熒光。l pANCA: 核周染色的熒光圖像，是由于pANCA對(duì)應(yīng)抗原在細(xì)胞乙醇固定時(shí)導(dǎo)致顆粒

3、膜破裂，其中的MPO等堿性蛋白被釋放出來遷徙至負(fù)電荷的細(xì)胞膜上所致.l ELISA:用純化的特異性中性粒細(xì)胞胞漿抗原包被反響板，檢測(cè)待測(cè)血清中的特異ANCA。ANCA意義lANCA被以為是原發(fā)性小血管炎的特異性血清標(biāo)志物。lcANCA針對(duì)的是蛋白酶3PR3，即中性粒細(xì)胞中嗜天青顆粒的主要成分；pANCA針對(duì)的主要是顆粒中的另一種物質(zhì)MPO中性粒細(xì)胞殺傷系統(tǒng)的主要成分。lPR3和MPO抗體在參與小血管炎的發(fā)病中起重要作用，它們激活中性粒細(xì)胞導(dǎo)致脫顆粒反響，使大量的蛋白水解酶活化，作用于小血管壁，在其他的炎性物質(zhì)的參與下導(dǎo)致小血管的炎癥。ANCA的臨床意義l 韋格納肉芽腫WG、顯微多動(dòng)脈炎MPA、

4、壞死性新月體性腎小球腎炎NCGN和變應(yīng)性肉芽腫性血管炎Churg-Strauss Syndrome，CSS等原發(fā)性系統(tǒng)性小血管炎的發(fā)病與ANCA親密相關(guān)，臨床上將上述疾病統(tǒng)稱為ANCA相關(guān)小血管炎。ANCAIIF、特異性抗PR3抗體和抗MPO抗體的檢測(cè)已成為原發(fā)性小血管炎的敏感、特異血清學(xué)檢測(cè)工程。l除了原發(fā)性血管炎外，在其它一些疾病中也可出現(xiàn)ANCA陽性見表，主要以pANCA為主，其靶抗原并非PR3和MPO，LF、Cath G、PBI、LYS、HEL等均有報(bào)道。l1998年，Targar等首先發(fā)現(xiàn)pANCA與慢性炎癥性腸病Chronic lnflammatory Bowel Disease，

5、CIBD有關(guān)。在結(jié)締組織病中，ANCA陽性主要見于SLE和RA，文獻(xiàn)報(bào)道的陽性率差別很大16-69%，與所用的方法及抗原基質(zhì)有很大的關(guān)系，在其它結(jié)締組織病中很少見。抗MPO抗體在SLE中的陽性率大約為10-15% ，這些疾病中特異性ANCA的檢測(cè)更有意義。抗核抗體l 抗核抗體是一組對(duì)細(xì)胞核內(nèi)的DNA，RNA，蛋白或這些物質(zhì)的分子復(fù)合物的本身抗體。l 按其核內(nèi)各個(gè)分子的性能不同可將各ANA區(qū)分開來，如抗DNA抗體，抗組蛋白抗體，抗非組蛋白抗體，抗核仁抗體等。每一大類又因不同抗原特性而再分為許多種類。l 因此ANA在廣義上是一組各有不同臨床意義的本身抗體，更確切的稱號(hào)應(yīng)為抗核抗體譜。ANA 主要存

6、在于IgG，也見于IgM、IgA，甚至IgD及IgE中。 抗DNA抗體l抗DNA抗體有抗雙鏈DNAds DNA和抗單鏈(ss DNA)抗體之分。抗ds DNA抗體與SLE的關(guān)系親密，且隨疾病的活動(dòng)度而升降，病情好轉(zhuǎn)者其滴度多下降甚或轉(zhuǎn)陰。抗ss DNA抗體那么與抗ds DNA不同，可在多種疾病出現(xiàn)，包括一些非本身免疫性疾病，如細(xì)菌和病毒感染。故在臨床上無適用價(jià)值。而抗ds DNA抗體被以為是SLE所特有。 抗著絲點(diǎn)抗體l其抗原為緊附于染色體著絲點(diǎn)的DNA蛋白質(zhì)。因此需求選擇分裂相活潑的細(xì)胞作為底物，這種細(xì)胞的著絲點(diǎn)較易被暴露。多項(xiàng)選擇用人喉癌上皮細(xì)胞HEP-2，其優(yōu)點(diǎn)是核大，分裂相多。國(guó)外報(bào)道

7、本抗體多見于CREST綜合征。陽性率達(dá)90以上，稱之為CREST的標(biāo)志抗體。根據(jù)協(xié)和醫(yī)院察看測(cè)定結(jié)果，我國(guó)系統(tǒng)性硬化絕大部分是彌散型，CREST型極少見；抗著絲點(diǎn)抗體的陽性率在系統(tǒng)性硬化為20，CREST型38，彌散型10，闡明它不一定是CREST型的標(biāo)志抗體 。lCREST：系統(tǒng)性硬化癥的變異型，是針對(duì)軟組織的AID。臨床表現(xiàn)為軟組織鈣化(calcinosis, C)、雷諾景象(Raynaud, R)、食道功能妨礙(esophagus dismotality, E)、指端硬化(sclerodactyly, S)、毛細(xì)血管擴(kuò)張(telangiectasis, T)。 抗增殖細(xì)胞核抗原抗體l 系

8、統(tǒng)性紅斑狼瘡特異性抗體。能夠與系統(tǒng)性紅斑狼瘡發(fā)生彌散性增殖性腎小球腎炎相關(guān)，其靶抗原為DNA聚合酶輔助蛋白，能夠在控制細(xì)胞周期中起關(guān)鍵作用。 類風(fēng)濕檢查lRF時(shí)以本身變形IgG為靶抗原的本身抗體。RF主要為IgM,也有IgG和IgA。與天然IgG結(jié)合才干差，易與人和動(dòng)物的變性IgG及IC中的IgG結(jié)合，經(jīng)過激活補(bǔ)體和巨噬細(xì)胞呵斥組織炎癥，主要表現(xiàn)為骨關(guān)節(jié)炎和血管炎。lRF檢測(cè)多用速率散射比濁法測(cè)定，但是只能反映IgM含量，特異性RF測(cè)定目前多用ELISA。RF的臨床意義lRF在RA患者中陽性檢出率高，可達(dá)79.6%。RF的滴度與患者的臨床表現(xiàn)呈正相關(guān)。lIgM型：RF-IgM80U/ml并伴嚴(yán)

9、重關(guān)節(jié)妨礙提示患者預(yù)后不良。lIgG型：RF-IgG的出現(xiàn)與患者滑膜炎、血管炎和關(guān)節(jié)的病癥親密相關(guān)，常伴高滴度RF-IgM出現(xiàn)。滑膜液中的IgG比IgM更具病理意義。lIgA型：10%RA患者可檢出RF-IgA,是RA臨床活動(dòng)期的一項(xiàng)目的。lIgE型：在關(guān)節(jié)液和胸水中的含量高于同一患者的血清含量。lRA陰性不能排除RA,部分疾病如SLE等AID也有RF檢出，故RF對(duì)于RA無嚴(yán)厲特異性。免疫球蛋白檢測(cè)lAID患者由于體內(nèi)免疫功能紊亂，產(chǎn)生了大量本身抗體，故血清中的免疫球蛋白含量往往高于正常。其中IgG升高明顯，IgM和IgA也有升高。免疫球蛋白含量的動(dòng)搖，與疾病的活動(dòng)性呈一定的相關(guān)性，故可檢測(cè)病

10、情的開展。如SLE和RA患者的免疫球蛋白程度明顯高于正常人。補(bǔ)體C3 C4lC3，C4的在血漿中的含量較高，故臨床用C3 C4反映補(bǔ)體程度。常用的方法是投射比濁法和散射比濁法。l1免疫相關(guān)疾病：SLE，強(qiáng)直性脊柱炎和RA等AID患者血清補(bǔ)體程度隨病情變化，表現(xiàn)為疾病活動(dòng)期補(bǔ)體活化過度，血清中補(bǔ)體因耗費(fèi)過度而程度降低；病情穩(wěn)定后補(bǔ)體程度反響性增高。l2激發(fā)性補(bǔ)體含量降低：耗費(fèi)過度 喪失過度 合成缺乏l3高補(bǔ)體血癥：偶見與感染性疾病恢復(fù)期和某些惡性腫瘤。冷激發(fā)實(shí)驗(yàn)l l 心血管疾病中常用檢測(cè)，患者將雙手放于冷水中一段時(shí)間后檢測(cè)相應(yīng)目的。也可用于嗜鉻細(xì)胞瘤的診斷。其他檢查lAPF：抗核周因子的靶抗原

11、存在于頰粘膜上皮細(xì)胞核周胞漿內(nèi)，是上皮細(xì)胞的中等纖維結(jié)合蛋白或其前體，它是一種不溶性蛋白質(zhì)。抗核周因子主要為IgG，也含有IgM及IgA成分。 lAKA:抗角蛋白抗體(AKA)，1979年Young等發(fā)現(xiàn)RA血清中有一種能與鼠食管角質(zhì)層反響的抗體，并對(duì)RA具有特異性，命名為AKA。 lAKA和APF主要見于RA患者。lCRP是人類急性反響蛋白，沒有特異性，目前曾經(jīng)作為醫(yī)院常規(guī)檢測(cè)工程，可以在很多疾病診斷上作為輔助判別根據(jù)。l正常參考值10mg/Ll類風(fēng)濕早期和急性風(fēng)濕時(shí)，血清中可達(dá)50mg/L，其陽性率為80%90%。lCRP的臨床意義與血沉一樣，但不受紅細(xì)胞、HB、脂質(zhì)和年齡等要素的影響，是

12、反響炎癥感染和療效的良好目的。類風(fēng)濕活動(dòng)期明顯增多，與血沉增快相平行，但比血沉增快出現(xiàn)的早、消逝也快。因此主要反映的是急性期炎癥。此外CRP目前被以為是心血管病危險(xiǎn)評(píng)價(jià)的重要目的，多次測(cè)血CRP高提示有AS危險(xiǎn)。對(duì)于本例患者的檢查分析l1998年：行腦垂體瘤切除術(shù)。l1999年：患者入住骨科并行相應(yīng)手術(shù)。術(shù)后2周出現(xiàn)不良反響。醫(yī)生在不良病癥之后對(duì)其進(jìn)展血常規(guī)和血沉檢查，結(jié)果均為正常。l l 患者在術(shù)后出現(xiàn)不良反響，涉及全身，皮膚的出血點(diǎn)，肢端小血管異常，肌肉疼痛和發(fā)熱等提示能夠是全身的小血管的炎癥反響或血液系統(tǒng)疾病。血常規(guī)正常提示病人的這些反響能夠與感染，血液系統(tǒng)疾病等要素關(guān)系不大；病人的血沉

13、在正常范圍內(nèi)，闡明至少目前階段病人的血漿成分還是正常的。l2000年：患者先后進(jìn)展了如下檢查：l ANCA檢查：ANCA IgM 陽性。l RF檢查：RF-IgM RF-IgGAPF AKA陰性 CRP不高。l l 由于患者主要是表現(xiàn)為小血管的炎性反響，綜合病人之前進(jìn)展了異體骨的植入術(shù)，能夠?yàn)楫愇飳?dǎo)致的排斥反響，由于移植骨經(jīng)去抗原處置，故不能夠?yàn)橐浦参锟顾拗鞣错懀送膺€能夠是病人本來就有SLE，系統(tǒng)性硬化，RA等本身免疫病，或者是病人對(duì)移植物的超敏反響等，此外還能夠是病人原有的心血管疾病。l ANCA是系統(tǒng)性小血管炎的重要目的，RA時(shí)也有明顯的全身血管反響，故病人先后進(jìn)展了這兩工程的檢查。l

14、患者的CRP不高提示患者的心血管疾病如AS等能夠性不大。檢查提示ANCA陽性，闡明病人的不良反響是由于AID導(dǎo)致的系統(tǒng)性小血管炎，綜合RF陽性，目前階段以為病人能夠是原發(fā)的或者術(shù)后導(dǎo)致的本身免疫引發(fā)的不良反響，由于RA特異的AKA和APF陰性，故不能確定為RA。l2001年：病人進(jìn)展尿常規(guī)檢查，提示尿中出現(xiàn)RBC WBC以及尿蛋白。l l 患者的尿常規(guī)顯示病人的腎臟病變，假設(shè)病人無原發(fā)病變，對(duì)于本例最有能夠的解釋是AID導(dǎo)致的腎小球腎炎循環(huán)免疫復(fù)合物型或原位免疫復(fù)合物型。l2005年：病人先后進(jìn)展如下檢查：l免疫球蛋白檢測(cè)和ANCA檢查：IgG IgM接近正常上限。l冷激發(fā)實(shí)驗(yàn)：雷諾癥陽性，復(fù)查冷激發(fā)實(shí)驗(yàn)陰性。l血常規(guī)：正常。l l 患者換院進(jìn)展治療，山東齊魯醫(yī)院復(fù)查ANCA并進(jìn)展免疫球蛋白檢測(cè)。兩項(xiàng)檢查的結(jié)果均支持病人為AID表現(xiàn)。l 患者出現(xiàn)雷諾綜合征，并且冷激發(fā)實(shí)驗(yàn)陰性，闡明患者的雷諾癥不是由于血管痙攣導(dǎo)致的，綜合之前ANCA和RF的檢測(cè)，本例患者應(yīng)該是由于肢體末端小血管炎導(dǎo)致的雷諾征。l2006：患者與解放軍總