ICS11220

B41.

中華人民共和國國家標準

GB/T27538—2011

動物流感檢測A型H1N1流感病毒中

HANA的焦磷酸測序檢測方法

、

Animalinfluenzadetection—MethodofpyrosequencingforHAandNAin

influenzavirusAH1N1

()

2011-11-21發布2012-03-01實施

中華人民共和國國家質量監督檢驗檢疫總局發布

中國國家標準化管理委員會

GB/T27538—2011

前言

本標準按照給出的規則起草

GB/T1.1—2009。

本標準由中華人民共和國農業部提出

。

本標準由全國動物防疫標準化技術委員會歸口

(SAC/TC181)。

本標準起草單位中華人民共和國山東出入境檢驗檢疫局中國檢驗檢疫科學研究院

:、。

本標準主要起草人徐彪梁成珠凌宗帥張太翔岳志芹高宏偉孫濤方紹慶林祥梅韓雪清

:、、、、、、、、、、

朱來華張鶴曉單虎

、、。

Ⅰ

GB/T27538—2011

動物流感檢測A型H1N1流感病毒中

HANA的焦磷酸測序檢測方法

、

1范圍

本標準規定了焦磷酸測序技術用于型流感病毒及其墨西哥變異株中的和核酸

AH1N1HANA

序列檢測方法

。

本標準適用于型流感病毒通用及型流感病毒墨西哥變異株的核酸檢測

AH1N1AH1N1。

2規范性引用文件

下列文件對于本文件的應用是必不可少的凡是注日期的引用文件僅注日期的版本適用于本文

。,

件凡是不注日期的引用文件其最新版本包括所有的修改單適用于本文件

。,()。

分析實驗室用水規格和試驗方法

GB/T6682

出入境動物檢疫采樣

GB/T18088

實驗室生物安全通用要求

GB19489

動物疫病實驗室檢驗采樣方法

NY/T541

基因檢驗實驗室技術要求

SN/T1193

3縮略語

下列縮略語適用于本文件

。

三磷酸腺苷

ATP:(adenosinetriphosphate)

脫氧核糖核酸

DNA:(deoxyribonucleicacid)

焦碳酸二乙酯

DEPC:(diethylpyrocarbonate)

磷酸鹽緩沖生理鹽水

PBS:(phosphatebelancedsolution)

焦磷酸測序

Pyrosequencing:

反轉錄聚合酶鏈式反應

RT-PCR:(reversetranscriptionpolymerasechainreaction)

核糖核酸

RNA:(ribonucleicacid)

Taq酶Taq聚合酶

:DNA

4原理

焦磷酸測序是通過測序引物和擴增單鏈模板雜交與聚合酶硫酸化酶熒

PCRDNA,DNA、ATP、

光素酶三磷酸腺苷雙磷酸酶和底物熒光素孵育逐一加入四種

、(APS)、,dNTPs(dATP,dTTP,dCTP,

如與模板配對此與引物的末端形成共價鍵釋放焦磷酸基團硫酸化酶在

dGTP),,dNTP,(PPi);ATP

存在的情況下催化焦磷酸形成驅動熒光素酶介導的熒光素向氧化熒光素轉化氧化熒

APSATP,ATP,

光素發出與量成正比的可見光信號光信號由電荷耦合檢測器收集并由軟件轉化為峰

ATP;(CCD)。

每個光信號的峰高與反應中摻入的核苷酸數目成正比和未摻入的由三磷酸腺苷雙磷酸