第一節

細胞培養是動物細胞工程的基礎在治療大面積燒傷時，通常采用的方法是取燒傷病人的健康皮膚移植到傷處，使皮膚愈合。但大面積燒傷患者缺乏足夠的自體皮膚，使用他人皮膚來源又不足，而且會產生免疫排斥反應。那么，怎樣才能獲得大量的自體健康皮膚？通過細胞培養構建人造皮膚從動物體中獲得相關組織，分散成單個細胞，在適宜的培養基下讓細胞生長和增殖的技術。動物細胞培養原理：細胞增殖培育的終點：細胞通過植物細胞培養技術，我們可以直接克隆植物，那我們能通過動物細胞培養克隆出動物嗎？動物細胞培養需要哪些條件？動物細胞培養的條件營養物質其他條件<<糖類氨基酸無機鹽維生素無菌、無毒的環境適宜的溫度、濕度、pH適宜的氣體環境水生長因子體外培養動物細胞需要提供哪些營養物質？水、無機鹽、糖類、氨基酸、無機鹽、維生素、生長因子等合成培養基根據細胞生存所需的物質種類和含量嚴格配置而成的培養基液體培養基動物血清：含有多種未知的促細胞生長因子及其他活性物質，可以補充合成培養基中缺乏的物質天然培養基主要來自動物體液或動物組織分離提取液，成分復雜，來源受限實際培養時，在合成培養基中添加一定比例的動物血清動物細胞培養最好選擇固體培養基還是液體培養基？動物細胞培養的條件無菌、無毒的環境無菌①對培養液和所有培養用具進行滅菌處理②在無菌環境下進行操作定期更換培養液，以便清除代謝物無毒超凈工作臺在培養基中添加抗生素動物細胞培養的條件適宜的溫度、pH多以37℃，溫差一般不超過±0.5℃溫度：pH：多數細胞生存的適宜pH在7.2-7.4氣體環境O2:細胞代謝所必需的CO2：維持培養液的pH（95%空氣和5%CO2）CO2培養箱動物細胞培養的過程選擇什么樣的細胞進行細胞培養？幼齡動物的細胞和分化程度低的細胞更容易培養，原因是這些細胞分裂能力強。用胰蛋白酶、膠原蛋白酶處理組織塊，使組織塊分散成單個細胞的目的是什么？①使細胞與培養液充分接觸，一方面保證細胞所需的O2和營養物質的供應，另一方面保證細胞內代謝廢物的及時排出；②使得在細胞水平操作的其它技術得以實現。動物細胞以組織的形式存在，取材后對其進行怎樣的處理？機械法、胰蛋白酶處理胰蛋白酶能將細胞消化掉嗎？那將動物組織分散成單個細胞時要注意什么問題呢？能，應注意時間的控制。因為胰蛋白酶不僅能分解細胞間的蛋白質，長時間還會分解膜蛋白，對細胞造成損傷。能夠用胃蛋白酶代替胰蛋白酶嗎？為什么？不能，因為動物細胞培養適宜的PH為7.2—7.4，此環境下胃蛋白酶（2.0）沒有活性，而胰蛋白酶(7.2-8.4)的活性較高。動物細胞培養的過程動物組織塊用機械法或用胰蛋白酶、膠原蛋白酶處理分散成單個細胞制成細胞懸液原代培養原代培養：細胞或組織離開機體后的首次培養體外培養的細胞表現為哪些特點？細胞貼壁：在培養瓶

懸液中分散的細胞很快就貼附在瓶壁上。培養瓶或培養皿壁要求：表面光滑、無毒、易于貼附。培養皿培養瓶所有的動物細胞都會貼壁生長嗎？瓶壁上的細胞層數是：一層（或單層）貼壁細胞分裂生長到表面相互接觸時，細胞通常會停止分裂增殖。接觸抑制分瓶培養解除方法癌變細胞沒有接觸抑制現象，可以在培養瓶中形成多層細胞將原培養瓶內的細胞分離并稀釋后轉移到多個培養瓶中，在的培養基中進行傳代培養。傳代培養:在進行傳代培養時，懸浮培養的細胞直接用離心法收集；貼壁細胞需要重新用胰蛋白酶等處理，使之分散成單個細胞，然后再用離心法收集。之后，將收集的細胞制成細胞懸液，分瓶培養。用胰蛋白酶兩次處理：第一次處理的目的是使組織細胞分散開；第二次處理的目的是使細胞從瓶壁上脫離下來，便于分瓶后繼續培養。動物細胞培養的過程動物組織塊用機械法或用胰蛋白酶、膠原蛋白酶處理分散成單個細胞制成細胞懸液原代培養問題細胞分裂受阻懸浮生長貼壁生長密度過大、有害代謝物積累和營養物質缺乏等接觸抑制解決傳代培養分瓶原代培養：細胞或組織離開機體后的首次培養原代培養視頻演示傳代培養視頻演示動物細胞培養與植物組織培養有什么相同和不同之處？培養結果動物血清植物激素常用液體培養基常用固體培養基培養基性質細胞的全能性原理動物細胞培養植物組織培養比較項目新的細胞群，不形成個體完整植株培養基特有成分細胞增殖動物細胞培養時，培養細胞能否無限制存活下去？原代培養物經首次傳代成功后即成細胞系。能連續培養下去的稱連續細胞系或無限細胞系。不能連續培養下去的細胞稱有限細胞系。如何獲得純的細胞系？將單個細胞從群體中分離出來單獨培養，使之成為一個新的細胞群體的技術稱細胞克隆。通過一定選擇或純化的方法，從原代培養物或細胞系中獲得具有特殊性質的細胞，稱細胞株。（2021·1月浙江選考）下圖為動物成纖維細胞的培養過程示意圖。下列敘述正確的是