1、85/85驗證文件類不：驗證方案 編號：015-7-046部門：質量保證部 頁碼：共 頁土霉素生產工藝驗證方案版 次：第1版 起 草：年 月 日審 核：年 月 日驗證小組會簽：年 月 日批 準：年 月 日實施日期: 年 月 復印數：分發至：1 概述： 本生產廠房為1991年改建廠房，精分間、干燥間、包裝間等于1999年7月份按非無菌原料藥30萬級生產條件進行改建。 為證明土霉素生產過程的穩定性及生產系統的可靠性，我公司按 GMP要求對生產工藝進行驗證，通過工藝過程驗證證明按已建立的操作規程進行，能夠連續地生產出符合預期質量標準及質量特性的產品。本驗證方案從發酵過程開始，以38000L計料體積驗

2、證15批，以36000L計料體積驗證3批。 在進行生產工藝驗證之 前，所有的生產設備、設施、檢驗方法及公用系統進行了全面的驗證，儀器、儀表均進行了校驗。1.1 生產過程描述1.1.1 生產過程流程圖一級種子液斜面孢子砂土孢子 孢子培養 一級種子培養一級種子液斜面孢子砂土孢子發酵液二級種子液二級種子培養 發酵培養 酸化發酵液二級種子液脫色液濾液酸化液 凈化、稀釋、過濾 脫色 結晶脫色液濾液酸化液土霉素成品濕晶體結晶液 離心分離、洗滌 氣流干燥土霉素成品濕晶體結晶液1.1.2 生產過程關鍵工藝參數描述1.1.2.1 配料過程：原料的配料比、計料體積。1.1.2.2 滅菌過程：滅菌溫度、滅菌時刻、罐

3、壓（一、二、三級培養基）。1/191.1.2.3 發酵過程：一、二級種子培養液培養時刻（包括移種時刻）、培養溫度、罐壓。1.1.2.4 提取過程（包括酸化、凈化過濾）：板框進液量、凈化劑比例。1.1.2.5 脫色過程：濾液流量。1.1.2.6 精分過程：進結晶液時刻、脫色液流量、結晶溫度、分離量、水洗次數。1.1.2.7 干燥、篩分過程：干燥系統進口溫度、出口溫度、汽壓、風壓、篩網的目數、分裝量。1.2 生產設備描述土霉素生產過程中應用的要緊設備有：配料罐、一級種子罐、二級種子罐、發酵罐、補料罐、氨水計量罐、消沫劑罐、酸化罐、鹽酸計量罐、板框過濾機、樹脂罐、結晶罐、離心機、顆粒搖擺機、干燥系統

4、(擴大罐、一級旋風干燥器、二級旋風干燥器、脈沖袋濾器)、旋振篩。要緊設備一覽表：詳見“附件一至附件五”。2 目的：通過對土霉素生產過程中關鍵工藝參數的評價，證明在已建立的操作規程下操作，能夠生產出符合USP和企業內控標準的產品。3 職責：3.1 驗證小組:3.1.1 起草驗證方案。3.1.2 組織協調生產部、設備部、技術中心、QC化驗室、生產車間對驗 證方案進行實施。3.1.3 起草驗證報告，確定再驗證項目周期，對驗證結果進行評價，報質量保證部門審核。3.2 質量保證部3.2.1 依照驗證對象成立驗證小組。3.2.2 質量保證部QC化驗室負責所需的標準品、對比品、試液等預備。2/193.2.3

5、 質量保證部QC化驗室負責工藝驗證過程中的取樣及化驗,并依照檢驗結果出具檢驗報告單。3.2.4 負責驗證方案及驗證報告的審核，報總工程師批準。3.2.5 負責所有驗證文件的治理。3.2.6 負責再驗證周期的確認。3.2.7 負責發放驗證合格證。3.2.8 負責組織驗證小組人員對參與驗證工作的相關人員進行培訓。3.2.9 負責組織對驗證方案及報告的會簽。3.3 技術中心：3.3.1 參與驗證的實施，協調收集驗證資料、數據。3.3.2 對驗證方案及報告進行評價。3.3.3 組織編寫及審核工藝規程、崗位SOP及其它有關規程。3.4 設備部：3.4.1 負責建立設備操作規程，維護保養規程及清潔規程，并

6、對事實上施的有效性負責。3.4.2 負責對儀器、儀表的校正。3.4.3 參與驗證的實施，保證設備的正常運行。3.5 生產車間：負責驗證工作具體實施。4 驗證所需文件：驗證所需的文件，其名稱、編號及存放地點，詳見附件六，驗證所需的文件目錄。5 驗證步驟：5.1 配料制備過程：本制備過程是將各物料按配料指令分不以38000L和36000L計料稱重,并投入到配料罐中，攪拌。本產品生產過程中需要操縱的工藝條件是原料配比。3/195.1.1 驗證方法：將稱量、復核好的各原料投入配料罐,按“一級種子培養基配制操作規程”、“二級種子培養基配制操作規程”、“三級種子培養基配制操作規程”、“三級發酵補料用培養基

7、配制操作規程”執行。5. 1.2 配料制備過程工藝變量的評價：本工序需操縱以下工藝變量，其評價按下表所列內容進行，并記錄。工藝過程監測變量評價方法可同意標準配料過程配料比檢查各物料的投料量是否按SOP、工藝規程正確配比投料量準確無誤，各稱量均進行了復核計料體積檢查計料體積是否符合工藝要求36000L38000L后附“配料工序工藝變量評價驗證記錄”見附表一：。5.2 滅菌過程：本生產過程是將基礎料經蒸汽滅菌，保證滅菌后無微生物存活。需操縱的工藝條件是：滅菌溫度、滅菌時刻、罐壓。本工序采納4個1.5m3的一級種子罐、4個8m3的二級種子罐、12個56m3的發酵罐、4個8m3的補料罐。每生產一批用一

8、個一級種子罐移入一個二級種子罐，再移入一個發酵罐進行，并用補料罐進行補料。5.2.1 驗證方法：將一級基礎料投入到一級種子罐中，將二級基礎料由配料罐中壓入二級種子罐中，將三級基礎料由配料罐中壓入到發酵罐，按“一級種子培養基滅菌操作規程、二級種子培養基滅菌操作規程、三級發酵培養基滅菌操作規程”進行操作。5.2.2 取樣方法：用無菌試管在一級種子培養基、二級種子培養基、三級發酵培養基罐的取樣管處各取滅菌后料液約20ml，進行無菌檢查。用取樣缸在檢驗方法：車間QC化驗室按“土霉素中間體、半成品檢驗操作規程”進行檢驗。4/19驗證標準：一級種子培養基滅菌后:項目檢驗方法合格標準PH電位法6.06.4糖

9、斐林試劑法3.03.6（W/V）氨基氮甲醛法0.120.15（W/V）溶磷鉬蘭法115200g/ml無菌度肉湯法，顯微鏡檢查（一）二級種子培養基滅菌后:項目檢驗方法合格標準PH電位法6.06.5糖斐林試劑法5.87.5（W/V）氨基氮甲醛法0.140.21（W/V）溶磷鉬蘭法120215g/ml無菌度肉湯法，顯微鏡檢查（一）發酵培養基滅菌后：項目檢驗方法合格標準PH電位法5.86.6糖斐林試劑法8.09.8（W/V）氨基氮甲醛法0.220.28（W/V）溶磷鉬蘭法120215g/ml無菌度肉湯法，顯微鏡檢查（一）后附“滅菌工藝驗證記錄”見附表二：（一）（二）（三）。5/195.2.3 滅菌過程

10、工藝變量的評價（包括一級培養基、二級培養基、三級發酵培養基）:本工序需操縱以下工藝變量，其評價按下表所列內容進行，并記錄。工藝過程監測變量評價方法可同意標準滅菌過程滅菌溫度檢查滅菌罐溫度是否與工藝要求相符合121128罐壓檢查滅菌罐壓力是否與工藝要求相符合0.100.15MPa滅菌時刻檢查滅菌罐時刻是否與工藝要求相符合35-45分鐘后附“滅菌工序工藝變量評價驗證記錄”，見附表三：（一）（二）（三）。5.3 發酵過程：本生產過程包括：一級種子液培養、二級種子液培養、三級發酵液培養。將滅菌的各培養液經冷水降溫至312，接種(或移種)后進行培養。本工序要緊設備：一級種子罐、二級種子罐、三級發酵罐、氨

11、水計量罐、消沫劑罐。本工序需操縱的工藝條件有：培養溫度、一、二級種子培養液培養時刻（包括移種時刻）罐壓。5.3.1 驗證方法將一級種子培養液用溫水升溫培養，二級種子培養液、三級發酵液用冷水降溫培養，并對三級發酵液定期通氨水，通補料、通消沫劑。操作按“一級種子液培養操作規程、二級種子液培養操作規程、三級發酵6/19液培養操作規程”進行操作。5.3.2 取樣方法：培養過程中，定時在一、二級種子罐、發酵罐的取樣管處取樣。(1)用無菌試管各取培養液約20ml，進行無菌檢查。(2)取一級種子培養液、二級種子培養液、三級發酵培養液各約20ml測PH。(3)取一、二級種子培養液各約200ml測糖含量、氨基氮

12、、效價。一級種子培養液效價為監測指標。(4)取三級發酵培養液約200ml測糖含量及放罐殘糖、濾速。 檢驗方法：車間QC化驗室按“土霉素中間體、半成品檢驗操作規程”進行操作。檢驗標準：一級種子培養液項目檢驗方法合格標準糖含量斐林試劑法2.53.5（W/V）氨基氮甲醛法0.040.12（W/V）效價（g/ml）比色法監測PH電位法5.66.2無菌度肉湯法，顯微鏡檢查（一）7/19二級種子培養液項目檢驗方法合格標準糖含量斐林試劑法3.04.5（W/V）氨基氮甲醛法0.040.12（W/V）效價（g/ml）比色法11001800（g/ml）PH電位法5.76.5 無菌度肉湯法，顯微鏡檢查（一） 發酵培

13、養液項目檢驗方法合格標準PH50hr往常51100hr101150hr151170hr放罐酸度計測定6.36.66.36.56.26.46.06.25.46.0糖含量待總糖下降至4.5-2.5開始補料斐林試劑法監測放罐殘糖斐林試劑法2.0濾速2ml/5分鐘無菌度肉湯法，顯微鏡檢查（一）后附“發酵過程生產工藝驗證記錄”，附表四：（一）（二）（三）。8/195.3.3 一級種子培養過程工藝變量評價：本工序需操縱以下工藝變量，其評價按下表所列內容進行，并記錄。工藝過程監測變量評價方法可同意標準一級種子培養過程培養溫度一級種子培養溫度是否與工藝要求相符311培養時刻(包括移種時刻)一級種子培養時刻是否

14、與工藝要求相符2632小時罐壓一級種子罐罐壓是否與工藝要求相符0.040.07MPa5.3.4 二級種子培養過程工藝變量評價：本工序需操縱以下工藝變量，其評價按下表所列內容進行，并記錄。工藝過程監測變量評價方法可同意標準二級種子培養過程培養溫度二級種子培養溫度是否與工藝要求相符311培養時刻(包括移種時刻)二級種子培養時刻是否與工藝要求相符2632小時罐壓二級種子罐罐壓是否與工藝要求相符0.030.06MPa5.3.5 發酵過程工藝變量評價：本工序需操縱以下工藝變量，其評價按下表所列內容進行，并記錄。工藝過程監測變量評價方法可同意標準發酵過程培養溫度發酵罐培養溫度是否與工藝要求相符050hr

15、31151150hr 301151放罐 311培養時刻發酵罐培養時刻是否與工藝要求相符150190hr罐壓發酵罐罐壓是否與工藝要求相符0.010.03MPa 后附“發酵過程工藝變量評價驗證記錄”附表五：（一）、（二）、（三）。9/195.4 提取過程:將發酵液由草酸和鹽酸混酸酸化后，取酸化液化驗，加入黃血鹽，用稀釋液( 低單位溶液或草酸溶液)進行稀釋，再加入硫酸鋅，靜置，取凈化液化驗。第一批號使用二個或三個酸化罐，十一個至十四個板框壓濾機。提取工藝操縱條件：5.4.1 驗證方法：將發酵液酸化后，加入黃血鹽，稀釋，再加入硫酸鋅，取凈化液過濾。按“發酵液的酸化、凈化操作規程，凈化液過濾操作規程”進

16、行操作。5.4.2 取樣方法及檢驗：用取樣缸在酸化罐取樣口處接取酸化液約250ml；用取樣缸在凈化罐取樣口處接取凈化液約250ml，按“土霉素中間體、半成品檢驗操作規程”進行檢驗。驗證標準：提取過程（一）項目檢驗方法合格標準酸化液PH酸度計法1.701.85濾速 漏斗測試法2ml/5分鐘凈化液PH酸度計法1.751.95凈化液效價比色法15000-18500（g/ml）透光度比色法80凈化液濾速漏斗測試法15ml/5分鐘10/19提取過程（二）項目檢驗方法合格標準板框過濾渣子效價(g/ml)比色法6000以下濾液正批效價（g/ml）比色法監測透光度比色法監測終止高單位(效價)效價（g/ml）比

17、色法4000-4700 PH酸度計法監測草酸溶液PH酸度計法1.802.00終點洗液效價（g/ml）比色法900以下PH酸度計法監測后附“提取過程生產工藝驗證記錄”，見附表六：（一）（二）。5.4.3 提取過程工藝變量評價：本工序需操縱以下工藝變量，其評價按下表所列內容進行，并記錄。工藝過程監測變量評價方法可同意標準提取過程板框進液量板框進液量是否與工藝要求相符3.54.5m3/臺凈化劑比例凈化劑比例是否與工藝要求相符黃血鹽鈉0.45-0.55%(W/V)硫酸鋅0.25-0.35(W/V) 后附“提取過程程工藝變量評價驗證記錄”附表七。5.5 脫色過程：將濾液用流量計操縱流量，經樹脂罐進行脫色

18、。每一生產批號用6 個樹脂罐。工藝操縱條件：濾液流量。5.5.1 驗證方法：每批濾液用3組，每組2個，共6個樹脂罐脫色， 操作過程按“板框過濾液樹脂脫色操作規程”進行。11/195.5.2 取樣方法：用試管在脫色液過濾器取樣口處取脫色液20ml。檢驗方法：驗證標準：檢驗項目檢驗方法操縱標準脫色液PH酸度計1.90.1脫色液透光度比色法90后附“脫色過程生產工藝驗證記錄”，見附表八。5.5.3 脫色過程工藝變量的評價：本工序需操縱以下工藝變量，其評價按下表所列內容進行，并記錄。工藝過程監測變量評價方法可同意的標準脫色過程濾液流量檢查濾液流量是否符合工藝要求共3組，3組濾液流量為12-13m3/小

19、時后附“脫色工序生產工藝變量評價驗證記錄”，見附表九。5.6 精分過程：本生產過程包括結晶、分離二部分：結晶過程系將脫色液用堿化劑調PH混合后進入結晶罐內，結晶液析出土霉素。分離過程是將結晶液放入離心機中進行分離，甩干母液，用純水洗兩次，得土霉素濕晶體。精分工序的環境為30萬級潔凈區。本工序需操縱的工藝條件有：結晶溫度、脫色液流量、進結晶液時刻、分離量、水洗次數、PH。5.6.1 驗證方法：將脫色液用流量計操縱，在堿化劑作用下調PH，結晶液經分離、水洗后，得土霉素濕晶體。操作按“樹脂脫色液結晶操作規程、結晶液的精分操作規程”進行。5.6.2 取樣方法：用小燒杯在離心機排液口處取母液50ml。1

20、2/19檢驗方法：按“土霉素中間體、半成品檢驗操作規程”進行檢驗。檢驗標準：檢驗項目檢驗方法操縱標準結晶PH電位法4.54.8母液效價比色法1100g/mlPH電位法（監測）后附“精分工序生產工藝驗證記錄”見附表十。5.6.3 精分過程工藝變量評價：本工序需操縱以下工藝變量，其評價按下表所列內容進行，并記錄。工藝過程監測變量評價方法可同意的標準結晶脫色液流量檢查脫色液流量是否符合工藝要求1213m3/hr結晶溫度檢查結晶溫度是否符合工藝要求25-32結晶分離進結晶液時刻檢查進結晶液時刻是否符合工藝要求第一輪若吸附，23 hr，其余1.5hr分離量檢查分離量是否符合工藝要求45kg（濕）臺水洗次

21、數檢查水洗次數是否符合工藝要求2次后附“精分工序工藝變量評價驗證記錄”見附表十一：（一）、（二）。5.7 干燥、篩分過程：干燥：將離心后所得濕晶體通過12目尼龍篩網過篩后，進行氣流干燥。每一生產批號干燥一次。工藝操縱條件為：干燥系統進口溫度、出口溫度、氣壓、風壓。篩分：將干燥完的成品用50目篩過篩，分裝。干燥、篩分工序的環境為30萬級潔凈區。 所需操縱工藝條件：篩網目數、分裝量。在工藝驗證之前，已對空氣介質進行驗證。5.7.1 驗證方法：每批濕晶體用搖擺機磨細，過12目篩后進入氣流干燥系統進行干燥，將干燥出的成品經旋振篩篩分后，裝入周轉袋中。操作過程按“土霉素干燥操作規程”進行。13/195.

22、7.2 取樣方法：由質量保證部QC化驗室按“成品原料藥取樣操作規程”進行取樣。檢驗方法：由質量保證部QC化驗室按“土霉素檢驗操作規程(USP版) ”進行檢驗。驗證標準：項目檢驗方法標準含量HPLC法845g/mg鑒不A紫外測定外符合規定B比色法呈正反應結晶性偏光顯微鏡檢測符合規定PH酸度計法4.57.0水分卡爾費休法6.08.5松密度量筒法0.650.79g/ml顆粒度篩分法40目100通過雜質4-差向土霉素HPLC0.5四環素2.0尾部峰（2-乙酰-2-去酰氨基土霉素）2.0含量RSD3.0后附“干燥、篩分生產工藝驗證記錄”見附表十二：（一）（二）。5.7.3 干燥、篩分過程工序工藝變量評價

23、：本工序需操縱以下工藝變量，其評價按下表所列內容進行，并記錄。工藝過程監測變量評價方法可同意的標準干燥、篩分干燥系統進口溫度155195 出口溫度5595 汽壓檢查汽壓是否符合工藝要求0.20.4Mpa風壓檢查風壓是否符合工藝要求0.030.06MPa篩網目數50目分裝量檢查分裝量是否符合工藝要求25kg/桶 后附“干燥、篩分過程工藝變量評價驗證記錄”見附表十三。14/195.8 包裝過程 本工序是將QA放行的產品進行包裝、入庫過程，包裝過程將按照“土霉素包裝操作規程”進行。通過驗證提供文字依據以保證包裝質量，符合GMP要求。包裝過程操縱：塑料袋扎口、牛皮紙袋折口、合格證、 紙桶鉛封、標簽、貼

24、簽等項目。5.8.1 包裝質量評價 后附“包裝工序生產工藝驗證記錄”見附表十四。5.9 驗證批數：38000l 15批；36000L 3批5.10 穩定性：取工藝驗證3個批號的產品進行穩定性試驗。5.10.1 穩定性加速試驗研究： 加速穩定性試驗研究的條件： 樣品的包裝情況：仿市售包裝，即紙桶內襯一層牛皮紙袋及兩層塑料袋。溫度：402；相對濕度：755。 檢驗間隔： 1、2、3、6個月。 檢驗項目： pH、水分、含量及雜質。 檢驗方法： pH及含量檢驗依據USP版進行，雜質檢驗依據BP版進行。 室溫對比樣品的檢驗情況：貯存條件為室溫，濕度為自然濕度，檢測間隔6個月內同加速穩定性試驗，6個月以后

25、同長期穩定性試驗。 后附“加速穩定性試驗檢驗結果記錄”，見附表十五。 后附“穩定性加速實驗室溫對比樣品的檢驗結果記錄”見附表十六。5.10.2 長期穩定性試驗研究： 長期穩定性試驗研究的條件： 樣品的包裝情況：仿市售包裝，即紙桶內襯一層牛皮紙袋及兩層塑料袋。溫度：25.52.5；相對濕度：605。 15/19檢驗間隔： 0、3、6、9、12、18、24、36、48、60個月。 檢驗項目： pH、含量、水分、雜質。 pH及含量檢驗依據USP版進行，雜質檢驗依據BP版進行。后附“長期穩定性試驗檢驗結果記錄”，見附表十七。5.11 驗證周期及再驗證:5.11.1 驗證小組負責依照驗證結果確定驗證周期

26、，報質量保證部審核。5.11.2 在以下情況下，應進行再驗證:5.11.2.1 工藝過程改變 5.11.2.2 設備變更5.11.2.3 起始原料改變5.11.2.4 質量標準發生變更5.12 驗證報告審核：5.12.1 驗證小組應及時收集驗證資料，并進行摘要分析，并與USP版比較，分析產品質量是否穩定，工藝是否可靠，形成驗證報告（附表十八），報質量保證部。5.12.2 質量保證部負責對驗證報告進行審核，報總工程師批準，并發放驗證合格證書（附表十九）。5.12.3 審核內容包括：5.12.3.1 驗證試驗是否有遺漏？5.12.3.2 驗證實施過程中對驗證方案有無修改？修改緣故、依據是否通過批準

27、？5.12.3.3 驗證結果是否符合標準要求？偏差及對偏差的講明是否合理？是否按“生產過程偏差調查處理程序”進行調查，通過調查找出失敗的緣故，確定是否需要進一步補充試驗？16/19附件一：配料工序設備一覽表序號代號描述容積/規格1F001二級配料罐18162825mm/A32F002發酵配料罐20184250mm/A33F003補料配料罐20164180mm/A3附件二：發酵工序設備一覽表序號代號描述容積/規格1101-104一級種子罐9122700mm/不銹鋼2201-204二級種子罐16284300mm/A33401-404補料罐16284300mm/A34301-304發酵罐302885

28、00mm/A35501-504泡敵貯罐6121600mm/A36601-604氨水計量罐6121600mm/A317/19附件三：提取工序設備一覽表序號代號描述容積/材質1T101-108酸化罐24169000mm/A3內襯樹脂2T201-214板框壓濾機BMY70/810/鑄鋼3T301濾液貯池90m3/水泥涂樹脂4T302高單位頂洗液貯池90m3/水泥涂樹脂5T303低單位頂洗液貯池90m3/水泥涂樹脂附件四：脫色、結晶、分離工序設備一覽表序號代號描述容積/材質1T401-409樹脂罐12164000mm/A3內襯樹脂2T501-506結晶罐3000升/搪瓷3T507-508結晶罐500升

29、/搪瓷4T601-618離心機SS-800/1Cr18Ni9Ti附件五：干燥工序設備一覽表序號代號描述容積/材質1G601氣流干燥器DMC36/1Cr18Ni9Ti18/19附件六：驗證所需文件文件名稱編碼存放地點土霉素工藝規程010-8-001107車間一級種子培養基配制操作規程107-3-011107車間二級種子培養基配制操作規程107-3-012107車間三級發酵培養基配制操作規程107-3-013107車間三級發酵補料用培養基配制操作規程107-3-014107車間一級種子培養基滅菌操作規程107-3-020107車間二級種子培養基滅菌操作規程107-3-021107車間三級發酵培養基

30、滅菌操作規程107-3-022107車間一級種子液培養操作規程107-3-023107車間二級種子液培養操作規程107-3-024107車間三級發酵液培養操作規程107-3-025107車間三級發酵液培養基補料操作規程107-3-017107車間發酵液酸化、凈化操作規程107-3-026107車間凈化液過濾操作規程107-3-027107車間板框過濾液樹脂脫色操作規程107-3-028107車間樹脂脫色液結晶操作規程107-3-030107車間土霉素干燥操作規程107-3-036107車間土霉素包裝操作規程107-3-037107車間土霉素中間體、半成品檢驗操作規程015-2-081質量保證部

31、成品原料藥取樣操作規程015-2-009質量保證部土霉素檢驗操作規程015-2-086質量保證部土霉素中間體、半成品質量標準015-8-004質量保證部土霉素內控標準及等級品標準015-8-005質量保證部其它文件詳見文件目錄19/19附表一：配料工序工藝變量評價驗證記錄批號罐號項目及標準是否合格檢查人復核人檢查日期配料比：按SOP、工藝規程正確配比計料體積：38000L或36000L檢查結果附表二：滅菌工藝驗證記錄（一）批號罐號項目及標準是否合格檢查人復核人檢查日期PH:6.0-6.4氨基氮：0.12-0.15%溶磷：115-200g/ml無菌度：（一）檢查結果一級種子培養基：附表二：滅菌工

32、藝驗證記錄（二）批號罐號項目及標準是否合格檢查人復核人檢查日期PH:6.0-6.5氨基氮：0.14-0.21%溶磷：120-215g/ml無菌度：（一）檢查結果二級種子培養基：附表二：滅菌工藝驗證記錄（三）批號罐號項目及標準是否合格檢查人復核人檢查日期PH:5.8-6.6氨基氮：0.22-0.28%溶磷：120-215g/ml無菌度：（一）檢查結果發酵培養基：附表三：滅菌工序工藝變量評價驗證記錄（一）一級培養基：批號罐號項目及標準是否合格檢查人復核人檢查日期罐壓：0.10-0.15MPa滅菌時刻：35-45分鐘檢查結果附表三：滅菌工序工藝變量評價驗證記錄（二）二級培養基：批號罐號項目及標準是否

33、合格檢查人復核人檢查日期罐壓：0.10-0.15MPa滅菌時刻：35-45分鐘檢查結果附表三：滅菌工序工藝變量評價驗證記錄（三）三級培養基：批號罐號項目及標準是否合格檢查人復核人檢查日期罐壓：0.10-0.15MPa滅菌時刻：35-45分鐘檢查結果附表四：發酵培養過程生產工藝驗證記錄（一）批號罐號項目及標準是否合格檢查人復核人檢查日期糖含量：2.5-3.5%（W/V）效價(g/ml)：（監測）氨基氮：0.04-0.12%(W/V)無菌度：（一）檢查結果一級種子培養液：附表四：發酵培養過程生產工藝驗證記錄（二）批號罐號項目及標準是否合格檢查人復核人檢查日期糖含量：3.0-4.5%(W/V)效價：

34、1100-1800(g/ml)氨基氮：0.04-0.12%(W/V)無菌度：（一）檢查結果二級種子培養液:附表四：發酵培養過程生產工藝驗證記錄（三）批號罐號項目及標準是否合格檢查人復核人檢查日期糖含量：（監測）放罐殘糖：2.0濾速：2ml/5分鐘無菌度:（一）檢查結果發酵培養液附表五：發酵培養過程工藝變量評價驗證記錄（一）一級種子培養液：批號罐號項目及標準是否合格檢查人復核人檢查日期罐壓：0.04-0.07MPa培養時刻（包括移種時刻）：26-32小時檢查結果附表五：發酵培養過程工藝變量評價驗證記錄（二）二級種子培養液：批號罐號項目及標準是否合格檢查人復核人檢查日期罐壓：0.03-0.06MP

35、a培養時刻（包括移種時刻）：26-32小時檢查結果附表五：發酵培養過程工藝變量評價驗證記錄（三）三級發酵培養液：批號罐號項目及標準是否合格檢查人復核人檢查日期罐壓：0.01-0.03MPa培養時刻：150-190hr檢查結果附表六：提取過程生產工藝驗證記錄（一）項目及標準凈化罐號項目及標準酸化液PH：1.70-1.85濾速：2ml/5分鐘凈化液PH：1.75-1.95凈化液效價：15000-18500g/ml透光度：80%濾速：15ml/5分鐘 項目及標準項目及標準附表六：提取過程生產工藝驗證記錄（二）批號項目及標準是否合格檢查人復核人檢查日期終止高單位草酸溶液終點洗液透光度：（監測）效價PH

36、：(監測)罐號PH：1.80-2.00效價PH：(監測南北南北南北南北南北檢查結果附表七：提取過程工藝變量評價驗證記錄批號項目及標準是否合格檢查人復核人檢查日期進液量：凈化劑比例南北黃血鹽鈉:0.45-0.55%(W/V)硫酸鋅：0.25-0.35%(W/V)檢查結果附表八：脫色過程生產工藝驗證記錄批號時刻項目及標準是否合格檢查人復核人檢查日期脫色液PH1.90.1脫色液透光度：90檢查結果附表九：脫色工序生產工藝變量評價驗證記錄批號樹脂柱罐號項目及標準是否合格檢查人復核人檢查日期濾液流量：12-13m3/hr使用使用次數檢查結果號樹脂罐串 號樹脂罐號樹脂罐使用第 次號樹脂罐使用第 次號樹脂罐

37、串 號樹脂罐號樹脂罐使用第 次號樹脂罐使用第 次號樹脂罐串 號樹脂罐號樹脂罐使用第 次號樹脂罐使用第 次號樹脂罐串 號樹脂罐號樹脂罐使用第 次號樹脂罐使用第 次號樹脂罐串 號樹脂罐號樹脂罐使用第 次號樹脂罐使用第 次號樹脂罐串 號樹脂罐號樹脂罐使用第 次號樹脂罐使用第 次附表十：精分工序（脫色液結晶）生產工藝驗證記錄批號結晶罐號時刻項目及標準是否合格檢查人復核人檢查日期結晶PH：4.5-4.8母液效價：1100g/mlPH：（監測）檢查結果附表十一：精分工序（結晶）工藝變量評價驗證記錄（一）批號結晶罐號項目及標準是否合格檢查人復核人檢查日期脫色液流量：12-13m3/hr結晶溫度25-32檢查

38、結果附表十一：精分工序（結晶分離）工藝變量評價驗證記錄（二）批號： 結晶罐號：離心機號進料時刻與停料時刻項目及標準是否合格檢查人復核人檢查日期進結晶液時刻：第一輪若吸附2-3hr，其余1.5hr分離量：45kg(濕)臺水洗次數：2次檢查結果附表十三：干燥、篩分過程工藝變量評價驗證記錄批號時刻項目及標準是否合格檢查人復核人檢查日期進口溫度：155-195汽壓：0.2-0.4MPa風壓：0.03-0.06MPa目數：50目 分裝量：25kg/桶檢查結果附表十二：干燥篩分生產工藝驗證記錄項目標準生產批號平均值RSD產品批號含量（g/mg）845水分（）6.0-8.5PH4.5-7.0松密度(g/ml

39、)0.65-0.79雜質4-差向土霉素0.5四環素2.0尾部峰（2-乙酰-2-去酰氨基-土霉素）2.0鑒不A符合規定B呈正反應結晶性符合規定顆粒度40目100通過結果分析與評價：檢查人： 復核人： 檢查日期：附表十四：包裝工序生產工藝驗證記錄 生產批號：監測變量檢查結果合格不合格備注稱量毛重凈重扎口縫隙批號打印生產日期標準標簽端正、牢固、無翹邊檢查人： 復核人： 檢查日期：附表十五：批號檢驗日期周期(月)含量(g/mg)845PH4.5-7.0水分6.0-8.5雜 質4-差向土霉素0.5四環素2.0尾部峰（2-乙酰-2-去酰氨基土霉素）2.0原檢1236原檢1236原檢1236加速穩定性試驗檢

40、驗結果附表十六：批號檢驗日期周期(月)含量(g/mg)845PH4.5-7.0水分6.0-8.5雜 質4-差向土霉素0.5四環素2.0尾部峰（2-乙酰-2-去酰氨基土霉素）2.0原檢1236原檢1236原檢1236穩定性加速實驗室溫對比樣品的檢驗結果記錄附表十七：批號檢驗日期周期(月)含量(g/mg)845PH4.5-7.0水分6.0-8.5雜 質4-差向土霉素0.5四環素2.0尾部峰（2-乙酰-2-去酰氨基土霉素）2.0原檢3691224364860原檢3691224364860長期穩定性試驗檢驗結果附表十八：驗證名稱土霉素生產工藝驗證驗證目的驗證時刻年 月 日 至 年 月 日參 加 人結果

41、與評價 驗證小組： (可加附頁)年 月 日 審核 質量保證部（QA）： 年 月 日批準 總工程師： 年 月 日土霉素生產工藝驗證報告 編號：附表十九：驗證合格證書驗證方案名稱：土霉素生產工藝驗證方案驗證方案編號：015-7-046 土霉素生產工藝差不多過驗證，各項驗證結果符合驗證標準要求，批準土霉素生產工藝生效。驗證報告名稱：土霉素生產工藝驗證報告驗證報告編號：有 效 期：批準： 年 月 日 備注：1、鹽酸土霉素生產工藝嚴格按驗證方案進行驗證。2、在以下情況，應進行再驗證：工藝過程改變； 設備變更；起始原料改變； 質量標準發生變更。驗證方案修改申請及批準書驗證方案名稱驗證方案編號修改緣故及依據

42、修改內容修改后方案起草人: 審核人（QA）： 年 月 日批準 總工程師: 年 月 日驗證文件類不：驗證報告 編號：015-7-046部門：質量保證部 頁碼：共 頁土霉素生產工藝驗證報告版 次：第1版 起 草：年 月 日審 核：年 月 日驗證小組會簽：年 月 日批 準：年 月 日 土霉素生產工藝驗證報告 編號：015-7-046驗證名稱土霉素生產工藝驗證驗證目的通過對土霉素生產過程中關鍵工藝參數的評價，能夠證明在已建立的操作規程下操作，生產出符合USP和企業內控標準的產品。驗證時刻年 月 日 至 年 月 日參 加 人結果與評價本次工藝驗證實施于8月中旬至9月份結束，驗證實施過程中嚴格按方案進行。

43、本次進行的工藝驗證，其計料體積38000L 15批（010821-4010835-4批）、36000L 3批（010938-4來源010939、010939-4來源010940批、010940-4來源010941批）。驗證過程包括：配料、滅菌、發酵、提取、脫色、精分、干燥、篩分、包裝。整個驗證過程各工藝操縱點、質量操縱點均符合標準要求。最終產品質量均符合USP及內控標準，達到了預期效果。本次驗證產品010938-4、010939-4、010940-4批正在做穩定性實驗研究。土霉素生產工藝驗證報告詳細內容見附頁。 驗證小組： 年 月 日 審核 質量保證部（QA）： 年 月 日批準 總工程師： 年

44、 月 日驗證合格證書驗證方案名稱：土霉素生產工藝驗證方案驗證方案編號：015-7-046 土霉素生產工藝差不多過驗證，各項驗證結果符合驗證標準要求，批準土霉素生產工藝生效。驗證報告名稱：土霉素生產工藝驗證報告驗證報告編號：有 效 期：批準： 年 月 日 備注：1、鹽酸土霉素生產工藝嚴格按驗證方案進行驗證。2、在以下情況，應進行再驗證：工藝過程改變； 設備變更；起始原料改變； 質量標準發生變更。土霉素生產工藝驗證報告1 配料過程：本次驗證采納不同的計料體積，即38000L和36000L。配料過程監測的結果表明：各計料體積配料比及各步投料量準確無誤，檢查結果詳見“配料工序工藝變量評價驗證記錄”。2

45、 滅菌過程：2.1 滅菌過程中一級種子培養基滅菌后；二級種子基培養基滅菌后；發酵培養基滅菌后的PH、糖、氨基氮、溶磷、無菌度等驗證結果均符合驗證標準的要求，結果詳見“培養基滅菌工藝驗證記錄”，附表二各（一）（二）、（三）。2.2 滅菌過程工藝各參數監測的結果表明：各參數均符合驗證方案中驗證標準的要求，表明工藝穩定。結果詳見“滅菌工序工藝變量評價驗證記錄”附表三各（一）（二）（三）。3 發酵過程：3.1 發酵（培養）過程中一級種子培養液的效價為監測指標外，其PH、糖含量、氨基氮、無菌度；二級種子培養液的PH、糖含量、效價、氨基氮、無菌度；三級發酵培養液的糖含量為監測指標外，其PH、放罐殘糖、無菌

46、度、濾速等項目驗證結果均符合驗證標準的要求，結果詳見“發酵過程生產工藝驗證記錄”附表四各（一）（二）（三）。3.2 一級種子培養液、二級種子培養液、三級發酵培養液的培養過程工藝各參數監測的結果表明：各參數均符合驗證方案中驗證標準的要求，表明工藝穩定。結果詳見“發酵過程工藝變量評價驗證記錄”附表五各（一）（二）（三）。4 提取過程：4.1 提取過程酸化液的PH、濾速；凈化液的PH、效價、透光度、濾速及板框過濾渣子效價、終止高單位（效價）、草酸溶液PH、終點洗液效價等項目驗證結果均符合驗證標準的要求。結果詳見“提取過程生產工藝驗證記錄”附表六各（一）（二）。4.2 提取過程工藝各參數監測的結果表明：各參數均符合驗證方案中驗證標準的要求，表明工藝穩定。結果詳見“提取過程工藝變量評價驗證記錄”附表七。5 脫色過程：5.1 脫色過程的脫色液PH、透光度等驗證結果均符合驗證標準的要求，結果詳見“脫色過程生產工藝驗證記錄”附表八。5.2 脫色過程序工藝各參數監測的結果表明：各參數均符合驗證方案中驗證標準的要求，表明工藝穩定。結果詳見“脫色工序生產工藝變量評價驗證記錄”附表九。6 精分過程：6.1 精分過程脫色液用流量計操縱，其結晶PH、母液效價（