1、專題2 微生物的培養和應用1特點：結構都相當簡單,個體多數十分微小.通常要用光學顯微鏡或電子顯微鏡才能看到.微生物包括哪幾類：病毒細菌放線菌真菌原生動物 原核生物界 原生生物界真菌界病毒界微生物：是一切肉眼看不見或看不清楚的微小生物的總稱2細菌的外形與大小圖1-1 常見的三種細菌典型形態A.球菌 B.桿菌 C.弧菌3芽孢 有些細菌在一定的條件下，細胞里面形成一個橢圓形的休眠體，叫做芽孢。芽孢的壁很厚，對干旱、低溫、高溫等惡劣的環境有很強的抵抗力。例如，有的細菌的芽孢，煮沸3小時以后才死亡。芽孢又小又輕，可以隨風飄散。當環境適宜（如溫度、水分適宜）的時候，芽孢又可以萌發，形成一個細菌.4菌落：單

2、個或少數微生物在固體培養基上大量繁殖時，就會形成一個肉眼可見的，具有一定形態結構的子細胞群體，叫做菌落。菌落是鑒定菌種的重要依據。5菌落菌落特征因種而異 6細菌的營養類型 根據細菌所利用的能源和碳源的不同，將細菌分為兩大營養類型。光能自養型:光合細菌化能自養型:硝化細菌,鐵細菌,硫細菌自養菌:異養菌:腐生菌 例如枯草桿菌寄生菌 例如寄生在腸道內的痢疾桿菌 (大部分病原菌)7真菌8如圖是酵母菌電子顯微鏡下的形態結構酵母菌和霉菌青霉9生殖直立菌絲 營養菌絲腐生生活孢子生殖1011課題1 微生物的實驗室培養專題2 :微生物的培養與應用12（一）培養基 培養基（培養液）是由人工方法配制而成的，專供微生

3、物生長繁殖使用的營養基質。1.培養基的類型及用途基礎知識13按物理性質分是是否分離、計數、增菌等觀察微生物的運動、鑒定菌種等增菌、工業生產14固體培養基：菌落15半固體培養基：無動力 有動力(彌散)16液體培養基：表面生長均勻混濁生長沉淀生長17按化學成分分否是主要用于工業生產分類、鑒定18按培養基功能分19總結：（1）按物理狀態分：（2）按功能分：（3）按成分分：培養基的類型固體培養基液體培養基半固體培養基選擇培養基鑒別培養基天然培養基合成培養基202.不同的微生物往往需要采用不同的培養基配方不管哪種培養基，一般都含有水、無機鹽、碳源和氮源等營養物質，另外還需要滿足微生物生長對pH、特殊營養

4、物質以及氧氣的要求3.培養基的成分21（二）無菌技術概念 ：無菌操作泛指在培養微生物的操作中，所有防止雜菌污染的方法。成功地培養微生物的關鍵。 22閱讀“無菌技術”，討論回答下列問題： 1、獲得純凈培養物的關鍵是 ，具體操作如下： 防止外來雜菌的入侵（1）對實驗操作的 、操作者的 和 進行 。 （2）將用于微生物培養的 、 和 等器具進行 。 （3）為避免周圍環境中微生物的污染，實驗操作應在 附近進行。 （4）實驗操作時應避免已經滅菌處理的材料用具與 相接觸。空間衣著手清潔和消毒器皿接種用具培養基滅菌酒精燈火焰周圍的物品23閱讀“無菌技術”，討論回答下列問題： 2、消毒和滅菌（1）消毒是指 。

5、 。常用的方法有 、 、 消毒法。使用較為溫和的物理或化學方法殺死煮沸消毒法巴氏消毒法化學藥劑物體表面或內部的部分微生物（不包括芽孢和孢子）（2）滅菌是指 。 。常用的方法有 、 、 滅菌。使用強烈的理化因素殺死物體內外所有灼燒滅菌干熱滅菌高壓蒸汽微生物（包括芽孢和孢子）24消毒與滅菌兩者的區別 3.常用的消毒與滅菌的方法比較項目理化因素的作用強度消滅微生物的程度芽孢和孢子能否被消滅消毒較為溫和部分生活狀態的微生物不能滅菌強烈全部微生物能251、煮沸消毒法:100煮沸56min2、巴氏消毒法：7075 下煮30min或 80 下煮15min3、化學藥劑消毒法:用75%酒精、新潔爾滅等進行皮膚消

6、毒；用氯氣消毒水源4、紫外線消毒(1)消毒的方法：261、灼燒滅菌(2)滅菌的方法：272、干熱滅菌：160-170 下加熱1-2h。3、高壓蒸氣滅菌：100kPa、121 下維持15-30min.281.無菌技術除了用來防止實驗室的培養物被其他外來微生物污染外，還有什么目的？2.請你判斷以下材料或用具是否需要消毒或滅菌。如果需要，請選擇合適的方法。（1） 培養細菌用的培養基與培養皿（2） 玻棒、試管、燒瓶和吸管（3） 實驗操作者的雙手答：無菌技術還能有效避免操作者自身被微生物感染。答：（1）、（2）需要滅菌；（3）需要消毒。旁欄思考29微生物實驗室培養的基本操作程序1、器具的滅菌2、培養基的

7、配制3、培養基的滅菌4、倒平板5、微生物接種6、恒溫箱中培養7、菌種的保存30二、實驗操作 （一）制備牛肉膏蛋白胨培養基（用于培養微生物）311計算、稱量（P16）2溶化（P17）3調pH：pH764過濾：這一步可以省去。5分裝：分裝過程中注意不要使培養基沾在管口或瓶口上，以免沾污棉塞而引起污染。分裝三角燒瓶的量以不超過三角燒瓶容積的一半為宜。6加塞7包扎制備培養基的操作步驟32 8滅菌: 將50ml培養基用玻棒轉移至三角錐瓶中，塞上棉花塞，包上牛皮紙，再放入高壓蒸氣滅菌鍋，在壓力為100kPa、溫度為121，滅菌1530min。將培養皿用舊報紙包裹，放入干熱滅菌箱內，在160170 下滅菌2

8、h。 9倒平板: 待培養基冷卻到50 左右時，在酒精燈附近倒平板。（倒平板操作見課本）2d后觀察平板，無雜菌污染才可用來接種. 10無菌檢查： 將滅菌的培養基放入37的溫室中培養2448小時，以檢查滅菌是否徹底。33倒平板操作 在火焰旁右手拿錐形瓶，左手拔出棉塞； 右手拿錐形瓶，使錐形瓶的瓶口迅速通過火焰；左手將培養皿打開一條縫隙，右手將培養基倒入培養皿，立刻蓋上皿蓋。 待平板冷卻凝固后，將平板倒過來放置。341.培養基滅菌后，需要冷卻到50 左右時，才能用來倒平板。你用什么辦法來估計培養基的溫度？問題討論 答：可以用手觸摸盛有培養基的錐形瓶，感覺錐形瓶的溫度下降到剛剛不燙手時，就可以進行倒平

9、板了。2.為什么需要使錐形瓶的瓶口通過火焰？ 答：通過灼燒滅菌，防止瓶口的微生物污染培養基。353.平板冷凝后，為什么要將平板倒置？4.在倒平板的過程中，如果不小心將培養基濺在皿蓋與皿底之間的部位，這個平板還能用來培養微生物嗎？為什么？ 答：平板冷凝后，皿蓋上會凝結水珠，將平板倒置，既可以避免培養基表面中水分過快的揮發，又可以防止皿蓋上的水珠落入培養基，造成污染。 答：空氣中的微生物可能在皿蓋與皿底之間的培養基上滋生，因此最好不要用這個平板培養微生物。36（二）純化大腸桿菌接種方法有：平板劃線法和稀釋涂布平板法微生物的接種技術：37 1、平板劃線法:通過接種環在瓊脂固體培養基表面連續畫線的操作

10、,將聚集的菌鐘逐步稀釋分散到培養基的表面. 在數次畫線后,可以分離到由一個細胞繁殖而來的肉眼可見的子細胞群體,這就是菌落.38平板劃線的操作3940一旦劃破，會造成劃線不均勻，難以達到分離單菌落的目的；二是存留在劃破處的單個細胞無法形成規矩的菌落，菌落會沿著劃破處生長，會形成一個條狀的菌落。4142平板劃線接種第一區域第二區域第三區域第四區域第五區域43問題討論 1.為什么在操作的第一步以及每次劃線之前都要灼燒接種環？在劃線操作結束時，仍然需要灼燒接種環嗎？為什么？ 答：操作的第一步灼燒接種環是為了避免接種環上可能存在的微生物污染培養物；每次劃線前灼燒接種環是為了殺死上次劃線結束后，接種環上殘

11、留的菌種，使下一次劃線時，接種環上的菌種直接來源于上次劃線的末端，從而通過劃線次數的增加，使每次劃線時菌種的數目逐漸減少，以便得到菌落。劃線結束后灼燒接種環，能及時殺死接種環上殘留的菌種，避免細菌污染環境和感染操作者。44 2.在灼燒接種環之后，為什么要等其冷卻后再進行劃線？答：以免接種環溫度太高，殺死菌種。 3.在作第二次以及其后的劃線操作時，為什么總是從上一次劃線的末端開始劃線？ 答：劃線后，線條末端細菌的數目比線條起始處要少，每次從上一次劃線的末端開始，能使細菌的數目隨著劃線次數的增加而逐步減少，最終能得到由單個細菌繁殖而來的菌落。45 2.稀釋涂布平板法:是將菌液進行一系列的梯度稀釋，

12、然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養基的表面，進行培養。 在稀釋度足夠高的菌液里，聚集在一起的微生物將被分散成單個細胞，從而能在培養基表面形成單個的菌落。微生物的接種技術46稀釋涂布平板法47涂布平板操作1.將涂布器浸在盛有酒精的燒杯中。1.取少量菌液（不超過0.1mL），滴加到培養基表面。483.將沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃，待酒精燃盡后，冷卻810s中。4.用涂布器將菌液均勻地涂布在培養基表面。涂布時可轉動培養皿，使涂布均勻。49問題討論 涂布平板的所有操作都應在火焰附近進行。結合平板劃線與系列稀釋的無菌操作要求，想一想，第2步（取少量菌液，滴加到培養基表面）應如何進行無菌操作？ 應從操作的各個細節保證“無菌”。例如，酒精燈與培養皿的距離要合適、吸管頭不要接觸任何其他物體、吸管要在酒精燈火焰周圍等等。50微生物的恒溫培養微生物的恒溫培養51微生物的恒溫培養52菌種的保存 1、臨時保藏：接種到固體斜面培養基，菌落長成后置于4冰箱保存。 2、長期保存：甘油冷凍管藏法53四、課題成果評價 （一）培養基的制作是否合格 如果未接種的培養基在恒溫箱中保溫12 d后無菌落生長，說明培養基的制備是成功的，否則需要重新制備。 （二）接種操作是否符合無菌要求 如果培養基上生長的菌落的