1、兔瘟組織滅活苗的制作詳解演示文稿第一頁，共二十三頁。優選兔瘟組織滅活苗的制作第二頁，共二十三頁。 微生物(Microorganism) 形體微小、結構簡單，須借助于光學顯微鏡或電子顯微鏡進行觀察。 病毒(包括噬菌體)； 細菌、放線菌、立克次氏體、支原體、衣原體、螺旋體等； 真菌：包括酵母菌（單細胞）、霉菌（多細胞）； 單細胞的藻類以及原生動物等。非細胞型微生物單細胞原核微生物真核微生物第三頁，共二十三頁。 細菌(bacteria)的細胞形態 1、球菌 單獨存在時為圓球形，幾個細菌聯在一起時其接觸面稍為扁平。按其分裂方向和分裂后排列狀態，可以分為：單球菌、雙球菌、四聯球菌、八疊球菌、鏈球菌、葡萄

2、球菌。2、桿菌 細胞呈桿狀或圓柱狀，各種桿菌的長度與直徑比例差異很大，有的粗短，有的細長，短桿菌近似球狀，長桿菌近似絲狀。一般來說，同一種桿菌其粗細比較穩定，而長度則經常因培養時間、培養條件不同而有較大變化。有的桿菌很直，有的稍彎，有的兩端截平如炭疽芽孢桿菌，有的略尖，有的半圓。 第四頁，共二十三頁。 （三）革蘭氏染色 革蘭氏染色法于1884年由丹麥醫生Gram創立，是延用至今的經典染色法。 經革蘭氏染色后可以把全部細菌分為G+和G-兩大類。 染色機制：與細菌細胞壁的結構和組成有很大關系。 G+細菌：肽聚糖層厚，含量多，經乙醇處理后使之發生脫水作用而使孔徑縮小，結晶紫與碘的復合物保留在細胞內而

3、不被脫色，復染后不著色，保持結晶紫的顏色； G-細菌：肽聚糖層很薄，含量少，脂肪含量高，經乙醇處理后部分細胞壁脂類可能被溶解并改變其組織狀態，細胞壁孔徑變大或通透性增加，不能阻止溶劑透入，酒精將結晶紫與碘的復合物洗脫，細菌被脫色，經復染后染成紅色。 第五頁，共二十三頁。細胞壁革蘭氏陽性菌 (G+)革蘭氏陰性菌 (G-)厚度與強度厚、致密、堅韌薄、疏松肽聚糖數量、含量多層、含量高、占細胞干重4090%單層、含量低、占細胞干重510%脂類含量少、占細胞干重1-4%多、占細胞干重11-22%磷壁酸（垣酸）+-脂多糖、磷脂、脂蛋白-+肽聚糖脂蛋白磷壁酸外膜第六頁，共二十三頁。染色操作步驟涂片固定滴生理

4、鹽水挑取菌苔一環涂片熱固定干燥取菌液一環涂片干燥第七頁，共二十三頁。革蘭氏染色法1. 涂片、干燥及固定2. 初染：在做好的涂面上滴加草酸銨結晶紫染液，染1-2分鐘，傾去染液，流水沖洗至無紫色。3. 媒染：先用新配的路哥氏碘液沖去殘水，而后用其覆蓋涂面1分鐘，后水洗。4. 脫色：除去殘水后，滴加95%酒精進行脫色約25秒，后立即用流水沖洗。5. 復染：滴加番紅染色液，染2分鐘，水洗后用吸水紙吸干。 6. 鏡檢：觀察染色結果圖。第八頁，共二十三頁。細水沖洗結晶紫初染2min碘液媒染1min95%酒精脫色 20s蕃紅復染 12min細水沖洗細水沖洗第九頁，共二十三頁。 革蘭氏染色成敗關鍵： 酒精脫色

5、，脫色不夠將G-轉變為G+，脫色過度將G+變成G-； 涂片要均勻、薄； 菌齡影響染色，菌齡老、陳舊的細菌培養物，往往G+轉變成G-，一般做革蘭氏染色用18小時左右的細菌培養物，不要超過24小時，以免影響染色性。第十頁，共二十三頁。油鏡操作規程1. 先用低倍鏡和高倍鏡觀察涂片，待看到目的物后，將其移到視野中央。2. 在涂片上滴一滴香柏油，轉動換轉器使油鏡針對通光孔。3. 使油鏡與香柏油接觸，這時油鏡頭幾乎與載玻片相接觸，切記不能使用粗調，以免壓碎載玻片。4. 用細調旋鈕慢慢提升鏡頭高度，直至物像清晰。切勿擰反方向。5. 觀察完畢后，使鏡筒遠離載物臺。取下載玻片。用擦鏡紙擦去鏡頭上的香柏油：先用干

6、的擦鏡紙擦12次，把大部分油去掉，再用二甲苯滴濕的擦鏡紙擦2次，最后再用干擦鏡紙擦1次。擦拭時要順鏡頭的直徑方向，不要沿鏡頭的圓周擦。擦拭要細心，動作要輕 。 第十一頁，共二十三頁。五、結果： 繪模式種、自選種鏡檢油鏡視野圖（比例、形狀準確，注放大倍數，染色特性）G+ (金黃色葡萄球菌)G-（枯草芽孢桿菌）G-（大腸桿菌）第十二頁，共二十三頁。Gram Stain of Staphylococcus aureusGram Stain of Escherichia coliA Gram Stain of a Mixture of Gram-Positive and Gram-Negative B

7、acteria.第十三頁，共二十三頁。 兔病毒性出血癥的診斷及其組織滅活苗的制造王海榮第十四頁，共二十三頁。 兔的病毒性出血癥（rabbit viral hemorrhagic diseaze）是兔的一種急性敗血性傳染病，RHDV抗原性強，組織滅活苗效果極佳，安全可靠，目前廣泛使用的是肝組織甲醛滅活苗，聯苗兔瘟、巴氏桿菌二聯苗也已使用。第十五頁，共二十三頁。 組織滅活苗可分加佐劑和不加佐劑兩種。含佐劑苗所產生的抗體水平較高于無佐劑苗，但產生免疫力的時間遲于無佐劑苗，而且生產程序較為復雜，成本也高。 當發生免瘟時，作為緊急接種，選用無佐劑苗更為理想，因產生免疫力較快，可提早控制疫情，即使平時預防

8、接種，無佐劑苗也極為有效。第十六頁，共二十三頁。一 材料 （1）種毒 強毒株組織毒1:10懸液感染成兔肌注1ml，4872小時引起發病死亡。（2）制苗動物 3月齡以上未感染本病和未接種本病疫苗的健康免。 組織搗碎機等第十七頁，共二十三頁。二、操作方法1、攻毒取種毒2-5g制成1:10組織懸液，每毫升各加青鏈霉素1000IU單位,在4處理46小時，取上清液皮下或肌肉注射兔子，1ml/只，實驗免接毒后的觀察。第十八頁，共二十三頁。（1）抗生素可先配制成高濃度的原液， -20保存。（2）抗生素的最高使用濃度。 青霉素鉀1萬單位/ml 鏈霉毒鉀：20mg/ml即 1mg=1000Iu 2萬Iu/ml。

9、 抗生素的配置： 1先配濃溶液20萬/ml，25萬/ml第十九頁，共二十三頁。2、RHD的臨床診斷及實驗室診斷臨床上，RHD以神經癥狀為主，在免疫壓力可表現出非典型變化。剖檢以呼吸系統的嚴重出血和內臟實質器官的淤血腫大為特征。人工感染后的發病高峰時間 接種后3672小時。第二十頁，共二十三頁。RHDV可凝集人的O型紅細胞，溫度對血凝無顯著影響，PH4.4-7.2時血凝穩定，血凝具有特異性，能被高免血清所抑制。 第二十一頁，共二十三頁。 10%肝懸液4000rpm，10-15分鐘離心后取上清，1%人O型紅細胞做HA，放置20-30分鐘出結果，血凝現象的觀察時間不超過45分鐘。 HA1160即為陽性 陽性病料無論是自然死亡還是人工感染致死，其血凝價一般不低于25。 健康兔只有2