1、 第四章第四章 中藥制劑的含量測(cè)定中藥制劑的含量測(cè)定本章重點(diǎn)：本章重點(diǎn)：1 1、掌握中藥制劑含量測(cè)定的樣品前處理方法及測(cè)定方、掌握中藥制劑含量測(cè)定的樣品前處理方法及測(cè)定方法的效能指標(biāo)。法的效能指標(biāo)。2 2、掌握可見(jiàn)、掌握可見(jiàn)- -紫外分光光度法、薄層掃描法、高效液紫外分光光度法、薄層掃描法、高效液相色譜法和氣相色譜法在中藥制劑分析中的應(yīng)用。相色譜法和氣相色譜法在中藥制劑分析中的應(yīng)用。3 3、了解熒光分析法和原子吸收分光光度法在中藥制劑、了解熒光分析法和原子吸收分光光度法在中藥制劑分析中的應(yīng)用。分析中的應(yīng)用。含量測(cè)定：含量測(cè)定：是中藥制劑質(zhì)量控制的重要指標(biāo)。是中藥制劑質(zhì)量控制的重要指標(biāo)。含量測(cè)定

2、目的：含量測(cè)定目的：通過(guò)研究制劑中某種成分的通過(guò)研究制劑中某種成分的含量高低來(lái)判定藥物的優(yōu)劣，保證臨床用藥含量高低來(lái)判定藥物的優(yōu)劣，保證臨床用藥的安全、有效。的安全、有效。 含量測(cè)定對(duì)象：含量測(cè)定對(duì)象：有效成分、指標(biāo)成分、毒性有效成分、指標(biāo)成分、毒性成分成分、貴重藥材成分、貴重藥材成分。中藥制劑中藥制劑與化學(xué)藥品含量測(cè)定的區(qū)別：與化學(xué)藥品含量測(cè)定的區(qū)別：1 1、對(duì)象不同：、對(duì)象不同：化學(xué)藥品化學(xué)藥品成分明確組成單一；成分明確組成單一；中藥制劑中藥制劑組成及成分復(fù)雜。組成及成分復(fù)雜。2 2、供試品溶液制備不同：、供試品溶液制備不同：化學(xué)藥品化學(xué)藥品方法簡(jiǎn)單；方法簡(jiǎn)單；中藥制劑中藥制劑方法繁瑣，大

3、多需要凈化分離。方法繁瑣，大多需要凈化分離。3 3、待測(cè)成分確定不同：、待測(cè)成分確定不同：化學(xué)藥品化學(xué)藥品待測(cè)成分明待測(cè)成分明確，多為主要成分；確，多為主要成分；中藥制劑中藥制劑需先根據(jù)中醫(yī)藥需先根據(jù)中醫(yī)藥理論選定藥味，再綜合考慮各方面因素選定待理論選定藥味，再綜合考慮各方面因素選定待測(cè)成分。測(cè)成分。含量測(cè)定的步驟：含量測(cè)定的步驟：藥味的選定、測(cè)定成分的選藥味的選定、測(cè)定成分的選定、測(cè)定方法及條件的選定、方法學(xué)考察。定、測(cè)定方法及條件的選定、方法學(xué)考察。 第一節(jié)第一節(jié) 含量測(cè)定樣品的處理含量測(cè)定樣品的處理樣品處理的作用：樣品處理的作用：充分釋放被測(cè)成分充分釋放被測(cè)成分除雜純化除雜純化富集濃縮或

4、衍生化，以測(cè)定低含量被測(cè)成分富集濃縮或衍生化，以測(cè)定低含量被測(cè)成分所用溶劑符合測(cè)定要求所用溶劑符合測(cè)定要求一、樣品的粉碎一、樣品的粉碎: :樣品粉碎的目的：樣品粉碎的目的：保證所取樣品均勻且有代表性保證所取樣品均勻且有代表性較快且完全地提取被測(cè)成分較快且完全地提取被測(cè)成分粉碎設(shè)備：粉碎設(shè)備：粉碎機(jī)、研缽、食品處理機(jī)等粉碎機(jī)、研缽、食品處理機(jī)等生物組織樣品用高速勻漿機(jī)或玻璃勻漿器。生物組織樣品用高速勻漿機(jī)或玻璃勻漿器。粉碎的注意事項(xiàng)：粉碎的注意事項(xiàng)：粉碎度按實(shí)際情況進(jìn)行，不可太粗或太細(xì)。太粗影響粉碎度按實(shí)際情況進(jìn)行，不可太粗或太細(xì)。太粗影響提取效果，太細(xì)一方面造成粘性成分附著，妨礙進(jìn)一步提取效果

5、，太細(xì)一方面造成粘性成分附著，妨礙進(jìn)一步提取，另一方面造成過(guò)濾困難。提取，另一方面造成過(guò)濾困難。避免由于設(shè)備的磨損或不干凈等原因而污染樣品。避免由于設(shè)備的磨損或不干凈等原因而污染樣品。防止粉塵飛散或揮發(fā)性成分損失。防止粉塵飛散或揮發(fā)性成分損失。不能丟棄不宜粉碎的大顆粒物質(zhì)，要反復(fù)粉碎后使其不能丟棄不宜粉碎的大顆粒物質(zhì)，要反復(fù)粉碎后使其全部過(guò)篩網(wǎng)。全部過(guò)篩網(wǎng)。二、樣品的提取：二、樣品的提取：常見(jiàn)提取方法：冷浸法、回流提取法、連續(xù)回流提取常見(jiàn)提取方法：冷浸法、回流提取法、連續(xù)回流提取法、超聲波提取法、超臨界流體萃取法。法、超聲波提取法、超臨界流體萃取法。冷浸法：冷浸法：浸泡后溶液的兩種測(cè)定方法。浸

6、泡后溶液的兩種測(cè)定方法。部分測(cè)定法（等量法）：浸泡后的溶液過(guò)濾，精密部分測(cè)定法（等量法）：浸泡后的溶液過(guò)濾，精密量取與一定重量的樣品相當(dāng)?shù)臑V液進(jìn)行測(cè)定。量取與一定重量的樣品相當(dāng)?shù)臑V液進(jìn)行測(cè)定。（此法（此法不適合揮發(fā)性較大的提取溶劑）不適合揮發(fā)性較大的提取溶劑）全部測(cè)定法（總量測(cè)定法）：浸泡后的溶液過(guò)濾，全部測(cè)定法（總量測(cè)定法）：浸泡后的溶液過(guò)濾，濾渣充分用溶劑洗滌至提取完全，合并濾液及洗液，濾渣充分用溶劑洗滌至提取完全，合并濾液及洗液，濃縮或蒸干，殘留物用另一溶劑溶解，定量轉(zhuǎn)入量瓶濃縮或蒸干，殘留物用另一溶劑溶解，定量轉(zhuǎn)入量瓶中，稀釋至刻度，搖勻，進(jìn)行測(cè)定。中，稀釋至刻度，搖勻，進(jìn)行測(cè)定。（此

7、法克服了部（此法克服了部分測(cè)定法的缺陷，且提取溶劑不必精密加入）分測(cè)定法的缺陷，且提取溶劑不必精密加入）三、樣品的分離凈化：三、樣品的分離凈化：常見(jiàn)凈化方法：沉淀法、蒸餾法、液常見(jiàn)凈化方法：沉淀法、蒸餾法、液- -液萃取法、色液萃取法、色譜法、固相微萃取法、消化法。譜法、固相微萃取法、消化法。沉淀法：沉淀法：利用某些試劑與被測(cè)成分或雜質(zhì)生成沉淀，利用某些試劑與被測(cè)成分或雜質(zhì)生成沉淀，分離沉淀或保留溶液的精制方法。分離沉淀或保留溶液的精制方法。注意事項(xiàng)：注意事項(xiàng)：過(guò)量試劑若干擾被測(cè)組分的測(cè)定，應(yīng)設(shè)法除去。過(guò)量試劑若干擾被測(cè)組分的測(cè)定，應(yīng)設(shè)法除去。大量雜質(zhì)以沉淀形式除去時(shí)，被測(cè)成分應(yīng)不能產(chǎn)大量雜質(zhì)

8、以沉淀形式除去時(shí)，被測(cè)成分應(yīng)不能產(chǎn)生共沉淀而損失。生共沉淀而損失。被測(cè)成分生成沉淀時(shí)，其沉淀經(jīng)分離后可重新溶被測(cè)成分生成沉淀時(shí)，其沉淀經(jīng)分離后可重新溶解或直接用重量法測(cè)定。解或直接用重量法測(cè)定。蒸餾法：蒸餾法：利用某些被測(cè)成分具有揮發(fā)性，采用蒸餾利用某些被測(cè)成分具有揮發(fā)性，采用蒸餾法，收集餾出液進(jìn)行含量測(cè)定；或某些成分經(jīng)蒸餾法，收集餾出液進(jìn)行含量測(cè)定；或某些成分經(jīng)蒸餾分解成揮發(fā)性成分，利用分解產(chǎn)物（要求結(jié)構(gòu)明確）分解成揮發(fā)性成分，利用分解產(chǎn)物（要求結(jié)構(gòu)明確）進(jìn)行測(cè)定。進(jìn)行測(cè)定。注意事項(xiàng)：注意事項(xiàng)：最常用水蒸氣蒸餾法。最常用水蒸氣蒸餾法。適用于揮發(fā)油，小分子生物堿的分離。適用于揮發(fā)油，小分子生物

9、堿的分離。優(yōu)化：蒸餾液中加入一定量無(wú)機(jī)鹽（鹽析作用），優(yōu)化：蒸餾液中加入一定量無(wú)機(jī)鹽（鹽析作用），使揮發(fā)性成分更完全地蒸餾出來(lái)。使揮發(fā)性成分更完全地蒸餾出來(lái)。 液一液萃取法：液一液萃取法：1 1、直接萃取法：利用被測(cè)成分與干擾成分在有機(jī)溶劑、直接萃取法：利用被測(cè)成分與干擾成分在有機(jī)溶劑（萃取劑）中的溶解度不同，通過(guò)多次萃取達(dá)到分離凈（萃取劑）中的溶解度不同，通過(guò)多次萃取達(dá)到分離凈化的目的?；哪康摹］腿〈螖?shù)：萃取次數(shù)：實(shí)驗(yàn)考察（符合樣品回收率的要求）實(shí)驗(yàn)考察（符合樣品回收率的要求）溶劑的選擇：溶劑的選擇：根據(jù)被測(cè)組分疏水性的相對(duì)強(qiáng)弱選擇極性根據(jù)被測(cè)組分疏水性的相對(duì)強(qiáng)弱選擇極性適當(dāng)?shù)娜軇?。適當(dāng)?shù)?/p>

10、溶劑。 水相水相pHpH的控制：的控制：對(duì)弱酸性成分對(duì)弱酸性成分 pHpKa-2pHpKa-2對(duì)弱堿性成分對(duì)弱堿性成分 pHpKa+2(pHpKa+2(此處為其共軛酸的此處為其共軛酸的pKa) pKa) 鹽析作用：鹽析作用：水相用水相用NaClNaCl飽和，提高提取率。飽和，提高提取率。2 2、離子對(duì)萃取法：在適當(dāng)、離子對(duì)萃取法：在適當(dāng)pHpH介質(zhì)中，某些有機(jī)酸、有機(jī)介質(zhì)中，某些有機(jī)酸、有機(jī)堿形成的離子與帶相反電荷的離子定量的結(jié)合成為弱極堿形成的離子與帶相反電荷的離子定量的結(jié)合成為弱極性的離子對(duì)，而易溶于有機(jī)溶劑，使之萃取分離。性的離子對(duì)，而易溶于有機(jī)溶劑，使之萃取分離。適用于高度離解的有機(jī)酸

11、、有機(jī)堿的萃取（不能用直接適用于高度離解的有機(jī)酸、有機(jī)堿的萃取（不能用直接萃取法）。萃取法）。中藥制劑分析主要用于生物堿（中藥制劑分析主要用于生物堿（B B）的分離。）的分離。離子對(duì)試劑：離子對(duì)試劑：常為酸性染料（常為酸性染料（In-In-） 如：溴百里酚藍(lán)（如：溴百里酚藍(lán)（BTBBTB）和溴甲酚綠（）和溴甲酚綠（BCGBCG）注意：注意：水相水相pHpH值的控制值的控制 離子對(duì)試劑的選擇離子對(duì)試劑的選擇色譜法：色譜法：分類：分類：1 1、按分離原理分類：吸附色譜、分配色譜、離子交換、按分離原理分類：吸附色譜、分配色譜、離子交換色譜、凝膠色譜色譜、凝膠色譜2 2、按操作方式分類：柱色譜、薄層色

12、譜、紙色譜、按操作方式分類：柱色譜、薄層色譜、紙色譜 3 3、按裝柱方法分類：濕法裝柱、干法裝柱、按裝柱方法分類：濕法裝柱、干法裝柱方法：方法：分離時(shí)常用柱色譜法。將樣品溶液加到裝有合適分離時(shí)常用柱色譜法。將樣品溶液加到裝有合適固定相的色譜柱中固定相的色譜柱中. .或者或者將被測(cè)成分保留于柱上，洗去將被測(cè)成分保留于柱上，洗去雜質(zhì)后，再洗脫被測(cè)成分進(jìn)行測(cè)定雜質(zhì)后，再洗脫被測(cè)成分進(jìn)行測(cè)定; ;或者使雜質(zhì)強(qiáng)烈?；蛘呤闺s質(zhì)強(qiáng)烈保留于柱上，直接洗脫被測(cè)成分進(jìn)行測(cè)定。留于柱上，直接洗脫被測(cè)成分進(jìn)行測(cè)定。適用于：適用于：最適合總類成分的含量測(cè)定。最適合總類成分的含量測(cè)定。 1 1、氧化鋁：用于、氧化鋁：用于

13、生物堿、苷類等堿性、中性成分生物堿、苷類等堿性、中性成分的的測(cè)定，吸附酸性成分測(cè)定，吸附酸性成分. .硅膠：適合于分離硅膠：適合于分離中性或酸性化合物，中性或酸性化合物，強(qiáng)烈保留堿性強(qiáng)烈保留堿性化合物。化合物。 2 2、鍵合相硅膠：、鍵合相硅膠：十八烷基鍵合相硅膠（十八烷基鍵合相硅膠（C C1818，ODSODS）、）、 C C8 8（反向色譜）（反向色譜） 分離脂溶性成分分離脂溶性成分苯基、氰基鍵合相硅膠苯基、氰基鍵合相硅膠（正向色譜）（正向色譜） 分離水溶性成分分離水溶性成分 3 3、大孔樹脂：分為極性和非極性型、大孔樹脂：分為極性和非極性型 ，D D101101最常用。最常用。 4 4、

14、聚酰胺：與溶質(zhì)形成氫鍵而產(chǎn)生吸附作用，常用、聚酰胺：與溶質(zhì)形成氫鍵而產(chǎn)生吸附作用，常用于含酚、酸、醌類于含酚、酸、醌類、黃酮類、黃酮類藥物樣品液的凈化分離。藥物樣品液的凈化分離。5 5、硅藻土、纖維素：親水型填料，原理為分配作用、硅藻土、纖維素：親水型填料，原理為分配作用 流動(dòng)相：與水不混溶的有機(jī)溶劑流動(dòng)相：與水不混溶的有機(jī)溶劑 洗脫：親脂性的成分洗脫：親脂性的成分6 6、離子交換樹脂：用于除去樣品中的離子或萃取可、離子交換樹脂：用于除去樣品中的離子或萃取可離解化合物離解化合物( (弱酸、弱堿藥物弱酸、弱堿藥物) )。 第二節(jié)第二節(jié) 含量測(cè)定方法的驗(yàn)證含量測(cè)定方法的驗(yàn)證方法驗(yàn)證：方法驗(yàn)證：又稱

15、效能指標(biāo)，是方法學(xué)論證的重要指標(biāo)，又稱效能指標(biāo)，是方法學(xué)論證的重要指標(biāo)，也是藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中方法學(xué)考察的主要內(nèi)容。也是藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中方法學(xué)考察的主要內(nèi)容。含量測(cè)定方法學(xué)考察的目的：含量測(cè)定方法學(xué)考察的目的：是證明采用的分析方法是是證明采用的分析方法是否適合于相應(yīng)的檢測(cè)要求。在建立中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)時(shí)，方否適合于相應(yīng)的檢測(cè)要求。在建立中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)時(shí)，方法驗(yàn)證的過(guò)程和結(jié)果均應(yīng)記載在藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)起草說(shuō)明法驗(yàn)證的過(guò)程和結(jié)果均應(yīng)記載在藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)起草說(shuō)明中。中。驗(yàn)證的內(nèi)容：驗(yàn)證的內(nèi)容：準(zhǔn)確度、精密度（包括重復(fù)性、中間精密準(zhǔn)確度、精密度（包括重復(fù)性、中間精密度和重現(xiàn)性）、專屬性、線性、范圍和耐用性。度和重現(xiàn)性）、

16、專屬性、線性、范圍和耐用性。一、準(zhǔn)確度：系指用該方法測(cè)定的結(jié)果與真實(shí)值或參考一、準(zhǔn)確度：系指用該方法測(cè)定的結(jié)果與真實(shí)值或參考值接近的程度，一般以回收率（值接近的程度，一般以回收率（% %）表示。中藥制劑分）表示。中藥制劑分析常用加樣回收率來(lái)考查。準(zhǔn)確度應(yīng)在規(guī)定范圍內(nèi)測(cè)試。析常用加樣回收率來(lái)考查。準(zhǔn)確度應(yīng)在規(guī)定范圍內(nèi)測(cè)試。（一）含量測(cè)定的準(zhǔn)確度：（一）含量測(cè)定的準(zhǔn)確度： 用已知純度的對(duì)照品做加樣回收測(cè)定，即已知被測(cè)用已知純度的對(duì)照品做加樣回收測(cè)定，即已知被測(cè)成分含量的供試品中再精密加入一定量的已知純度的被成分含量的供試品中再精密加入一定量的已知純度的被測(cè)成分對(duì)照品進(jìn)行測(cè)定，得總量（測(cè)成分對(duì)照品進(jìn)

17、行測(cè)定，得總量（C C）。）。 加樣回收率加樣回收率(%)=(%)=（C CA A）B B100%100%， n5n5A A為供試品加樣前被測(cè)成分含量，為供試品加樣前被測(cè)成分含量，C C加樣后實(shí)測(cè)總量，加樣后實(shí)測(cè)總量，B B為加入對(duì)照品量為加入對(duì)照品量,n,n為實(shí)驗(yàn)次數(shù)。為實(shí)驗(yàn)次數(shù)。（二）數(shù)據(jù)要求：（二）數(shù)據(jù)要求： 加樣回收率試驗(yàn)中，加入對(duì)照品后，亦應(yīng)在規(guī)定的加樣回收率試驗(yàn)中，加入對(duì)照品后，亦應(yīng)在規(guī)定的 標(biāo)準(zhǔn)曲線線性范圍內(nèi)。加樣回收率試驗(yàn)至少做五次。常標(biāo)準(zhǔn)曲線線性范圍內(nèi)。加樣回收率試驗(yàn)至少做五次。常用測(cè)定方法有兩個(gè)：用測(cè)定方法有兩個(gè)：取同一濃度的供試品取同一濃度的供試品6 6份，分別加份，分別

18、加入等量的對(duì)照品，做六次平行試驗(yàn)，用入等量的對(duì)照品，做六次平行試驗(yàn)，用6 6個(gè)測(cè)定結(jié)果進(jìn)行個(gè)測(cè)定結(jié)果進(jìn)行評(píng)價(jià)，對(duì)照品加入量與所取的供試品被測(cè)成分含量控制評(píng)價(jià)，對(duì)照品加入量與所取的供試品被測(cè)成分含量控制在在1 1：1 1左右。左右。取同一濃度的供試品取同一濃度的供試品9 9份，每三份加入等份，每三份加入等量的對(duì)照品一定量，制成有量的對(duì)照品一定量，制成有3 3個(gè)不同濃度，每個(gè)濃度有個(gè)不同濃度，每個(gè)濃度有3 3份的供試品溶液進(jìn)行測(cè)定，用份的供試品溶液進(jìn)行測(cè)定，用9 9個(gè)測(cè)定結(jié)果進(jìn)行評(píng)價(jià)。一個(gè)測(cè)定結(jié)果進(jìn)行評(píng)價(jià)。一般中間濃度溶液的對(duì)照品加入量與所取的供試品被測(cè)成般中間濃度溶液的對(duì)照品加入量與所取的供試品

19、被測(cè)成分含量控制在分含量控制在1 1：1 1左右為宜。左右為宜。中藥制劑含量測(cè)定所得的中藥制劑含量測(cè)定所得的單份供試品回收率及所有供試單份供試品回收率及所有供試品平均回收率均在品平均回收率均在95%95%105%105%之間，特殊操作繁復(fù)的可略之間，特殊操作繁復(fù)的可略低（但不可小于低（但不可小于90%90%或大于或大于110%110% ）?；厥章实模??；厥章实腞SDRSD不大于不大于3% 3% （RSD=S/XRSD=S/X平均平均100%100%）。）。加樣回收率試驗(yàn)舉例：加樣回收率試驗(yàn)舉例： 取已知含量的樣品取已知含量的樣品6 6份，每份約份，每份約0.05g0.05g，每份含有效，每份含

20、有效成分黃芩苷成分黃芩苷4.79%4.79%，精密稱定，置，精密稱定，置25mL25mL量瓶中，分別精密量瓶中，分別精密加入加入黃芩苷黃芩苷標(biāo)準(zhǔn)品貯備溶液標(biāo)準(zhǔn)品貯備溶液5.0mL5.0mL（0.3884mg/ml0.3884mg/ml），按），按供試品溶液制備方法制備供試品溶液，用高效液相色譜供試品溶液制備方法制備供試品溶液，用高效液相色譜儀檢測(cè)，進(jìn)樣儀檢測(cè)，進(jìn)樣10L10L，測(cè)定并計(jì)算回收率，測(cè)定并計(jì)算回收率，結(jié)果表明該方結(jié)果表明該方法準(zhǔn)確度好。法準(zhǔn)確度好。黃芩苷黃芩苷加樣回收試驗(yàn)結(jié)果加樣回收試驗(yàn)結(jié)果 取樣取樣量量(g)(g)原有量原有量(mg)(mg)加入量加入量(mg)(mg)測(cè)得量測(cè)得

21、量(mg)(mg)回收率回收率(%)(%)平均平均值值(%)(%)RSDRSD(%)(%)0.04430.04432.1262.1261.9421.9423.9963.99696.2896.2895.8095.800.840.840.04440.04442.1282.1281.9421.9423.9733.97395.0195.010.05300.05302.5432.5431.9421.9424.3934.39395.2595.250.04700.04702.2552.2551.9421.9424.1094.10995.4695.460.04430.04432.1232.1231.9421.

22、9424.0064.00696.9796.970.04450.04452.1262.1261.9421.9423.8763.87695.8095.80二、精密度：系指在規(guī)定的測(cè)定條件下，同一個(gè)均勻樣二、精密度：系指在規(guī)定的測(cè)定條件下，同一個(gè)均勻樣品，經(jīng)過(guò)多次取樣測(cè)定所得的結(jié)果之間的接近程度。品，經(jīng)過(guò)多次取樣測(cè)定所得的結(jié)果之間的接近程度。( (一一) )精密度表示方法：精密度表示方法：1 1、偏差（、偏差（d d）: :單項(xiàng)測(cè)定單項(xiàng)測(cè)定值值與平均值的差值與平均值的差值 2 2、標(biāo)準(zhǔn)偏差：、標(biāo)準(zhǔn)偏差：S=S=3 3、相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差：相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差： RSDRSD（% %）=S/X=S/X平均平均100

23、%100%（最常用）（最常用）(二二) 重復(fù)性、中間精密度及重現(xiàn)性重復(fù)性、中間精密度及重現(xiàn)性S=（XiX）2n1( (二二) )重復(fù)性、中間精密度及重現(xiàn)性：重復(fù)性、中間精密度及重現(xiàn)性：1. 1. 重復(fù)性：在相同的條件下，由一個(gè)分析人員測(cè)定所得結(jié)重復(fù)性：在相同的條件下，由一個(gè)分析人員測(cè)定所得結(jié)果的精密度稱為重復(fù)性。果的精密度稱為重復(fù)性。測(cè)定方法為測(cè)定方法為在規(guī)定的范圍內(nèi)，在規(guī)定的范圍內(nèi)，取同一濃度的供試品，取同一濃度的供試品，用用6 6個(gè)測(cè)定結(jié)果進(jìn)行評(píng)價(jià)個(gè)測(cè)定結(jié)果進(jìn)行評(píng)價(jià)（六點(diǎn)測(cè)（六點(diǎn)測(cè)定）定）；或設(shè)計(jì)；或設(shè)計(jì)3 3個(gè)不同濃度，每個(gè)濃度各分別制備個(gè)不同濃度，每個(gè)濃度各分別制備3 3份供試份供試品

24、溶液進(jìn)行測(cè)定，用品溶液進(jìn)行測(cè)定，用9 9個(gè)測(cè)定結(jié)果進(jìn)行評(píng)價(jià)個(gè)測(cè)定結(jié)果進(jìn)行評(píng)價(jià)（九點(diǎn)測(cè)定）（九點(diǎn)測(cè)定）。畢業(yè)論文水平的實(shí)驗(yàn)只做到畢業(yè)論文水平的實(shí)驗(yàn)只做到重復(fù)性即可。重復(fù)性即可。2 2中間精密度：同一個(gè)實(shí)驗(yàn)室，不同時(shí)間由不同分析人員中間精密度：同一個(gè)實(shí)驗(yàn)室，不同時(shí)間由不同分析人員用不同設(shè)備測(cè)定結(jié)果的精密度，稱為中間精密度。用不同設(shè)備測(cè)定結(jié)果的精密度，稱為中間精密度。測(cè)定方測(cè)定方法同前重復(fù)性實(shí)驗(yàn)，為考察隨機(jī)變動(dòng)因素對(duì)精密度的影響，法同前重復(fù)性實(shí)驗(yàn)，為考察隨機(jī)變動(dòng)因素對(duì)精密度的影響，申報(bào)新藥做到中間精密度。申報(bào)新藥做到中間精密度。3 3重現(xiàn)性：在不同實(shí)驗(yàn)室由不同分析人員測(cè)定結(jié)果的精密重現(xiàn)性：在不同實(shí)驗(yàn)

25、室由不同分析人員測(cè)定結(jié)果的精密度，稱為重現(xiàn)性。度，稱為重現(xiàn)性。測(cè)定方法同前重復(fù)性實(shí)驗(yàn)，當(dāng)分析方法測(cè)定方法同前重復(fù)性實(shí)驗(yàn)，當(dāng)分析方法將被法定標(biāo)準(zhǔn)采用時(shí)（如建立藥典分析方法），應(yīng)進(jìn)行將被法定標(biāo)準(zhǔn)采用時(shí)（如建立藥典分析方法），應(yīng)進(jìn)行重現(xiàn)性實(shí)驗(yàn)。重現(xiàn)性實(shí)驗(yàn)。( (三三) )數(shù)據(jù)要求：常用數(shù)據(jù)要求：常用RSDRSD表示，應(yīng)不大于表示，應(yīng)不大于3%3%。重復(fù)性試驗(yàn)舉例：重復(fù)性試驗(yàn)舉例： 精取六份五味子浸膏，每份精取六份五味子浸膏，每份168mg168mg，按供試品溶，按供試品溶液的制備方法制備六份液相供試品溶液液的制備方法制備六份液相供試品溶液, ,按高效液相按高效液相色譜條件進(jìn)樣測(cè)定色譜條件進(jìn)樣測(cè)定,

26、,每份進(jìn)每份進(jìn)10l,10l,記錄峰面積，計(jì)算記錄峰面積，計(jì)算五味子五味子醇甲含量醇甲含量(mg/g)(mg/g)，結(jié)果見(jiàn)下表，結(jié)果見(jiàn)下表，表明該方法表明該方法重復(fù)性良好。重復(fù)性良好。重復(fù)性測(cè)定數(shù)據(jù)表重復(fù)性測(cè)定數(shù)據(jù)表 進(jìn)樣序號(hào)進(jìn)樣序號(hào) 1 2 3 4 5 6 1 2 3 4 5 6 取樣量取樣量(mg) 167.3 169.7 165.1 165.3 168.1 169.3(mg) 167.3 169.7 165.1 165.3 168.1 169.3 峰面積峰面積 8165427 8269117 7793747 7891571 8245381 8225956 8165427 8269117

27、7793747 7891571 8245381 8225956 醇甲含量醇甲含量 203.00 202.64 196.45 198.65 203.99 202.07 203.00 202.64 196.45 198.65 203.99 202.07 平均值平均值 201.33 201.33 標(biāo)準(zhǔn)偏差標(biāo)準(zhǔn)偏差S 2.93 S 2.93 RSD% 1.46 RSD% 1.46 三、專屬性：又叫選擇性，系指在其他成分（如雜質(zhì)、三、專屬性：又叫選擇性，系指在其他成分（如雜質(zhì)、輔料等）可能存在下，采用的方法能正確測(cè)定出被測(cè)輔料等）可能存在下，采用的方法能正確測(cè)定出被測(cè)成分的特性。成分的特性?？疾斓氖欠治?/p>

28、方法對(duì)被測(cè)成分是否有準(zhǔn)考察的是分析方法對(duì)被測(cè)成分是否有準(zhǔn)確而專屬的測(cè)定能力。確而專屬的測(cè)定能力?？疾旆椒ǔＳ藐幮詫?duì)照法，即考察方法常用陰性對(duì)照法，即以被測(cè)成分與除去該成分或除去該藥材的成藥進(jìn)行對(duì)以被測(cè)成分與除去該成分或除去該藥材的成藥進(jìn)行對(duì)照，考察被測(cè)成分的測(cè)定是否受到干擾組分的影響。照，考察被測(cè)成分的測(cè)定是否受到干擾組分的影響。 如用色譜法、光譜法等應(yīng)附代表性譜圖，例子見(jiàn)如用色譜法、光譜法等應(yīng)附代表性譜圖，例子見(jiàn)書書P P7272. .四、線性：系指在設(shè)計(jì)的范圍內(nèi)，測(cè)試結(jié)果與試樣中被四、線性：系指在設(shè)計(jì)的范圍內(nèi)，測(cè)試結(jié)果與試樣中被測(cè)物濃度或質(zhì)量直接呈正比關(guān)系的程度。測(cè)物濃度或質(zhì)量直接呈正比關(guān)

29、系的程度。（一）測(cè)定方法：為在規(guī)定的范圍內(nèi)制備至少（一）測(cè)定方法：為在規(guī)定的范圍內(nèi)制備至少6 6個(gè)濃度個(gè)濃度的樣品，以測(cè)得的響應(yīng)信號(hào)作為被測(cè)物濃度或質(zhì)量的函的樣品，以測(cè)得的響應(yīng)信號(hào)作為被測(cè)物濃度或質(zhì)量的函數(shù)作圖，觀察是否呈線性。必要時(shí)，響應(yīng)信號(hào)可經(jīng)數(shù)學(xué)數(shù)作圖，觀察是否呈線性。必要時(shí)，響應(yīng)信號(hào)可經(jīng)數(shù)學(xué)轉(zhuǎn)換，再進(jìn)行線性回歸計(jì)算。轉(zhuǎn)換，再進(jìn)行線性回歸計(jì)算。（二）數(shù)據(jù)要求：應(yīng)列出回歸方程，相關(guān)系數(shù)（二）數(shù)據(jù)要求：應(yīng)列出回歸方程，相關(guān)系數(shù)（r r）和）和線性圖。相關(guān)系數(shù)一般要求線性圖。相關(guān)系數(shù)一般要求r0.999r0.999，在，在TLCSTLCS定量中要定量中要求求r0.995r0.995。線性關(guān)系舉

30、例：線性關(guān)系舉例：標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備：標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備： 精密量取精密量取五味子乙素五味子乙素對(duì)照品溶液（對(duì)照品溶液（0.208mg/ml 0.208mg/ml ）0.20.2、0.40.4、0.60.6、0.80.8、1.01.0、1.21.2、1.4ml1.4ml，分別置具塞試，分別置具塞試管中，蒸干，各精密加管中，蒸干，各精密加1010變色酸溶液變色酸溶液1ml1ml，加硫酸溶液，加硫酸溶液( (水水1 1份，濃硫酸份，濃硫酸2 2份份) 9ml) 9ml，搖勻，置水浴上加熱，搖勻，置水浴上加熱3030分鐘，分鐘，放冷，用分光光度儀在放冷，用分光光度儀在570nm570nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸收度，繪

31、制標(biāo)波長(zhǎng)處測(cè)定吸收度，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，結(jié)果如下表（結(jié)果表明，在繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線的濃準(zhǔn)曲線，結(jié)果如下表（結(jié)果表明，在繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線的濃度范圍內(nèi)度范圍內(nèi)4.164.1629.12 g/ml 29.12 g/ml 線性關(guān)系良好）。線性關(guān)系良好）。 五味子乙素標(biāo)準(zhǔn)曲線數(shù)據(jù)表五味子乙素標(biāo)準(zhǔn)曲線數(shù)據(jù)表序號(hào)序號(hào) 1 2 3 4 5 6 71 2 3 4 5 6 7濃度濃度 g/mlg/ml 吸光度吸光度 4.16 8.32 12.48 16.64 20.8 24.96 29.12 4.16 8.32 12.48 16.64 20.8 24.96 29.12 0.137 0.272 0.405 0.545 0.687

32、 0.822 0.9580.137 0.272 0.405 0.545 0.687 0.822 0.958 五、范圍：范圍是指能到達(dá)一定精密度、準(zhǔn)確度和線性，五、范圍：范圍是指能到達(dá)一定精密度、準(zhǔn)確度和線性，測(cè)試方法適用的高低限濃度或量的區(qū)間。如上例，線性范測(cè)試方法適用的高低限濃度或量的區(qū)間。如上例，線性范圍為：圍為： 4.164.1629.12 g/ml29.12 g/ml 六、耐用性：六、耐用性：系指在測(cè)定條件有小的變動(dòng)時(shí)，測(cè)定結(jié)果不系指在測(cè)定條件有小的變動(dòng)時(shí)，測(cè)定結(jié)果不受影響的承受程度，為使方法用于常規(guī)檢驗(yàn)提供依據(jù)。典受影響的承受程度，為使方法用于常規(guī)檢驗(yàn)提供依據(jù)。典型的變動(dòng)因素有：被測(cè)

33、溶液的穩(wěn)定性，樣品提取次數(shù)、時(shí)型的變動(dòng)因素有：被測(cè)溶液的穩(wěn)定性，樣品提取次數(shù)、時(shí)間等。間等。耐用性試驗(yàn)舉例（變動(dòng)的為時(shí)間）：耐用性試驗(yàn)舉例（變動(dòng)的為時(shí)間）： 精取五味子浸膏精取五味子浸膏175.3g175.3g，按供試品溶液的制備方法制，按供試品溶液的制備方法制備一份液相供試品溶液備一份液相供試品溶液, ,室溫放置室溫放置2424小時(shí)小時(shí), ,分別在分別在0 0、2 2、4 4、8 8、1212、2424小時(shí)按小時(shí)按HPLCHPLC色譜條件進(jìn)樣測(cè)定色譜條件進(jìn)樣測(cè)定, ,每次每次10l,10l,記錄峰記錄峰面積，計(jì)算五味子醇甲含量面積，計(jì)算五味子醇甲含量(mg/g)(mg/g)，結(jié)果見(jiàn)下表。，結(jié)

34、果見(jiàn)下表。 耐用性測(cè)定數(shù)據(jù)表耐用性測(cè)定數(shù)據(jù)表進(jìn)樣時(shí)間（進(jìn)樣時(shí)間（h h）0 2 4 8 12 240 2 4 8 12 24 峰面積峰面積 8201938 8538544 8653974 8607893 8370618 8560207 8201938 8538544 8653974 8607893 8370618 8560207 醇甲含量醇甲含量 198.55 203.00 205.20 204.12 202.49 194.59198.55 203.00 205.20 204.12 202.49 194.59 平均值平均值 201.33 201.33 標(biāo)準(zhǔn)偏差標(biāo)準(zhǔn)偏差S S 4.00 4.00

35、 RSD%RSD% 1.991.99從上表可見(jiàn)，六個(gè)樣相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差從上表可見(jiàn)，六個(gè)樣相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差1.99%1.99%，小于，小于3%3%。說(shuō)明用。說(shuō)明用此測(cè)定方法測(cè)定樣品中被測(cè)成分含量此測(cè)定方法測(cè)定樣品中被測(cè)成分含量, ,在在2424小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定，因小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定，因此本測(cè)定方法對(duì)時(shí)間有一定耐用性。此本測(cè)定方法對(duì)時(shí)間有一定耐用性。1 1、評(píng)價(jià)中藥制劑含量測(cè)定方法的回收試驗(yàn)結(jié)果時(shí)，一般要、評(píng)價(jià)中藥制劑含量測(cè)定方法的回收試驗(yàn)結(jié)果時(shí)，一般要求（求（ ） A.A.回收率在回收率在8585115115、RSD5RSD5 （n5n5）B.B.回收率在回收率在9595105105、RSD3RSD3 （n5n5）

36、C.C.回收率在回收率在8080100100、RSD10RSD10 （n9n9） D.D.回收率回收率8080、RSD5RSD5 （n5n5）E.E.回收率在回收率在9999101101、RSD0.2RSD0.2 （n3n3）2 2、下列關(guān)于分析方法效能指標(biāo)的概念描述正確的有、下列關(guān)于分析方法效能指標(biāo)的概念描述正確的有( ( ) )( (多選多選) )A.A.在大多數(shù)情況下我們研究分析方法的精密度是指重現(xiàn)性在大多數(shù)情況下我們研究分析方法的精密度是指重現(xiàn)性. .B.B.被法定標(biāo)準(zhǔn)采用的分析方法是進(jìn)行過(guò)重現(xiàn)性試驗(yàn)的被法定標(biāo)準(zhǔn)采用的分析方法是進(jìn)行過(guò)重現(xiàn)性試驗(yàn)的. .C.C.選擇性是指在樣品中有其他組

37、分共存時(shí)，該分析方法對(duì)被選擇性是指在樣品中有其他組分共存時(shí)，該分析方法對(duì)被測(cè)物準(zhǔn)確而專屬的測(cè)定能力測(cè)物準(zhǔn)確而專屬的測(cè)定能力. .D.D.耐用性是指在測(cè)定條件有小的變動(dòng)時(shí)，測(cè)定結(jié)果耐用性是指在測(cè)定條件有小的變動(dòng)時(shí)，測(cè)定結(jié)果不不受影響受影響的承受能力的承受能力. .E.E.準(zhǔn)確度實(shí)驗(yàn)常用準(zhǔn)確度實(shí)驗(yàn)常用9 9點(diǎn)測(cè)定法點(diǎn)測(cè)定法. . 第三節(jié)第三節(jié) 常用定量分析方法常用定量分析方法常用測(cè)定方法：化學(xué)分析法常用測(cè)定方法：化學(xué)分析法 光譜法（光譜法（UV-VisUV-Vis等）等） 色色譜譜法（法（HPLCHPLC、GC GC 、TLCSTLCS等）等） 一、化學(xué)分析法：一、化學(xué)分析法：1 1、包括重量分析

38、、包括重量分析法法和滴定分析和滴定分析法法. .2 2、適用范圍：主要用于測(cè)定制劑中、適用范圍：主要用于測(cè)定制劑中含量較高的含量較高的一些有一些有機(jī)機(jī)成分成分及含及含礦物藥制劑中的無(wú)機(jī)成分。礦物藥制劑中的無(wú)機(jī)成分。 如：總生物堿類、總酸類、總皂苷及礦物藥成分如：總生物堿類、總酸類、總皂苷及礦物藥成分3 3、特點(diǎn)：所用儀器簡(jiǎn)單。、特點(diǎn)：所用儀器簡(jiǎn)單。 但有一定的局限性，靈敏度低，操作繁瑣、耗時(shí)長(zhǎng)，但有一定的局限性，靈敏度低，操作繁瑣、耗時(shí)長(zhǎng)，專屬性不高，不適宜微量成分測(cè)定。專屬性不高，不適宜微量成分測(cè)定。4 4、儀器：儀器：重量分析常用儀器：分析天平、稱瓶、干燥器、濾器重量分析常用儀器：分析天平

39、、稱瓶、干燥器、濾器（濾紙、垂熔玻璃漏斗）；（濾紙、垂熔玻璃漏斗）；滴定分析常用儀器：滴定管、容量瓶、移液管。滴定分析常用儀器：滴定管、容量瓶、移液管。 （一）重量分析法：包括揮發(fā)法、萃取法、沉淀法。（一）重量分析法：包括揮發(fā)法、萃取法、沉淀法。揮發(fā)法：揮發(fā)法：測(cè)定具有揮發(fā)性或能定量轉(zhuǎn)化為揮發(fā)性物質(zhì)的測(cè)定具有揮發(fā)性或能定量轉(zhuǎn)化為揮發(fā)性物質(zhì)的組分含量。組分含量。 如：干燥失重、水分測(cè)定如：干燥失重、水分測(cè)定 總灰分及熾灼殘?jiān)臏y(cè)定總灰分及熾灼殘?jiān)臏y(cè)定萃取法：萃取法：根據(jù)被測(cè)組分在互不相溶的兩相中溶解度的不根據(jù)被測(cè)組分在互不相溶的兩相中溶解度的不同，達(dá)到分離的目的。同，達(dá)到分離的目的。適用：適用

40、：總皂苷、總有機(jī)酸、總生物堿總皂苷、總有機(jī)酸、總生物堿如：冰硼散中冰片的含量測(cè)定、地奧心血康膠囊中甾體如：冰硼散中冰片的含量測(cè)定、地奧心血康膠囊中甾體總皂苷含量測(cè)定、昆明山海棠片中總生物堿的含量測(cè)定、總皂苷含量測(cè)定、昆明山海棠片中總生物堿的含量測(cè)定、甘草浸膏中甘草酸的含量測(cè)定。甘草浸膏中甘草酸的含量測(cè)定。沉淀法：沉淀法：將被測(cè)組分定量轉(zhuǎn)化為難溶化合物，測(cè)定其含將被測(cè)組分定量轉(zhuǎn)化為難溶化合物，測(cè)定其含量。適用于：量。適用于：制劑中純度較高的成分。制劑中純度較高的成分。如：西瓜霜潤(rùn)喉片中西瓜霜的含量測(cè)定如：西瓜霜潤(rùn)喉片中西瓜霜的含量測(cè)定 苦參片中苦參總堿的含量測(cè)定苦參片中苦參總堿的含量測(cè)定 復(fù)方元

41、胡注射液總堿的測(cè)定復(fù)方元胡注射液總堿的測(cè)定（二）滴定分析法：是容量分析法。（二）滴定分析法：是容量分析法。適用：適用：常量組分的分析常量組分的分析. .特點(diǎn)：特點(diǎn)：操作簡(jiǎn)便、快速，結(jié)果準(zhǔn)確操作簡(jiǎn)便、快速，結(jié)果準(zhǔn)確, ,一般相對(duì)誤差一般相對(duì)誤差0.2%, TCD TCD），死體積小，線性范圍寬，但易破壞），死體積小，線性范圍寬，但易破壞樣品。載氣多用樣品。載氣多用N N2 2。（3 3）氮）氮- -磷檢測(cè)器（磷檢測(cè)器（NPD):NPD):專屬性檢測(cè)器，可用于中藥專屬性檢測(cè)器，可用于中藥及其制劑中農(nóng)藥殘留量的檢測(cè)。及其制劑中農(nóng)藥殘留量的檢測(cè)。（4 4）電子捕捉檢測(cè)器（）電子捕捉檢測(cè)器（ECDECD

42、）：專屬性檢測(cè)器，適用于）：專屬性檢測(cè)器，適用于痕量電負(fù)性有機(jī)物，如含鹵素、硫、氧等化合物的分析。痕量電負(fù)性有機(jī)物，如含鹵素、硫、氧等化合物的分析。電負(fù)性越強(qiáng)電負(fù)性越強(qiáng), ,檢測(cè)器靈敏度越高檢測(cè)器靈敏度越高. .（七）定量分析方法：常用的定量方法有內(nèi)標(biāo)法、外標(biāo)法、（七）定量分析方法：常用的定量方法有內(nèi)標(biāo)法、外標(biāo)法、歸一化法和標(biāo)準(zhǔn)溶液加入法，以峰高或峰面積定量歸一化法和標(biāo)準(zhǔn)溶液加入法，以峰高或峰面積定量( (常用常用).).首先講兩個(gè)概念首先講兩個(gè)概念: :峰面積的測(cè)量：峰面積的測(cè)量：目前常用氣相色譜儀均有色譜工作站，可直接給出目前常用氣相色譜儀均有色譜工作站，可直接給出A A，h h，W W1

43、/21/2。iiiACm)(或定量依據(jù)校正因子的測(cè)定：校正因子的測(cè)定：前提是同一物質(zhì)用同一檢測(cè)器檢測(cè)前提是同一物質(zhì)用同一檢測(cè)器檢測(cè), ,物質(zhì)的物質(zhì)的m m或或CA.CA.(1)(1)絕對(duì)校正因子的測(cè)定絕對(duì)校正因子的測(cè)定: :iiiiiiAmfAfm關(guān)）分性質(zhì)、儀器靈敏度有絕對(duì)校正因子（與組if的量或質(zhì)量進(jìn)入檢測(cè)器中的物質(zhì)im(2)(2)相對(duì)校正因子的測(cè)定相對(duì)校正因子的測(cè)定: :siAAsi和測(cè)混勻進(jìn)樣基準(zhǔn)物純品過(guò)程：精稱保留時(shí)間接近與前提：sisiisssiisimimAmAAmAmffff fmimi為相對(duì)校正因子為相對(duì)校正因子, ,其與待測(cè)物、基準(zhǔn)物和檢測(cè)器其與待測(cè)物、基準(zhǔn)物和檢測(cè)器類型有

44、關(guān)，與操作條件變化（如進(jìn)樣量）無(wú)關(guān)類型有關(guān)，與操作條件變化（如進(jìn)樣量）無(wú)關(guān). .基準(zhǔn)物：基準(zhǔn)物：熱導(dǎo)檢測(cè)器（熱導(dǎo)檢測(cè)器（TCDTCD）苯；苯； 氫焰離子化檢測(cè)器（氫焰離子化檢測(cè)器（FIDFID）丁庚烷。丁庚烷。1 1、內(nèi)標(biāo)法：、內(nèi)標(biāo)法：氣相色譜最常用的定量方法氣相色譜最常用的定量方法. . 以一定量的純物質(zhì)（內(nèi)標(biāo)物），加入到準(zhǔn)確稱定的以一定量的純物質(zhì)（內(nèi)標(biāo)物），加入到準(zhǔn)確稱定的試樣中，根據(jù)試樣和內(nèi)標(biāo)物的重量及其峰面積比，求出試樣中，根據(jù)試樣和內(nèi)標(biāo)物的重量及其峰面積比，求出某組分的含量。某組分的含量。 siisAAmmm和測(cè)混勻進(jìn)樣）（含過(guò)程：ssiisifAfAmm%100%100%mmfAf

45、AmmCsssiiii對(duì)內(nèi)標(biāo)物要求：對(duì)內(nèi)標(biāo)物要求：a a內(nèi)標(biāo)物須為原樣品中不含組分內(nèi)標(biāo)物須為原樣品中不含組分. .b b內(nèi)標(biāo)物能單獨(dú)出峰且與待測(cè)物保留時(shí)間應(yīng)接近，但內(nèi)標(biāo)物能單獨(dú)出峰且與待測(cè)物保留時(shí)間應(yīng)接近，但與待測(cè)組分可完全分開(kāi)與待測(cè)組分可完全分開(kāi),R,R1.5.1.5.c c內(nèi)標(biāo)物為高純度標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，或含量已知物質(zhì)內(nèi)標(biāo)物為高純度標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，或含量已知物質(zhì), ,加入的加入的重量接近于組分的含量重量接近于組分的含量. .內(nèi)標(biāo)法優(yōu)點(diǎn)：內(nèi)標(biāo)法優(yōu)點(diǎn)：只需內(nèi)標(biāo)物及待測(cè)組分出峰。只需內(nèi)標(biāo)物及待測(cè)組分出峰。無(wú)需準(zhǔn)確進(jìn)樣，適合微量組分的含量測(cè)定無(wú)需準(zhǔn)確進(jìn)樣，適合微量組分的含量測(cè)定. .缺點(diǎn)：缺點(diǎn)：找合適內(nèi)標(biāo)物困難

46、找合適內(nèi)標(biāo)物困難( (選擇合適內(nèi)標(biāo)物選擇合適內(nèi)標(biāo)物是內(nèi)標(biāo)法的關(guān)鍵是內(nèi)標(biāo)法的關(guān)鍵););需已知校正因子需已知校正因子; ;樣品的樣品的配制較復(fù)雜配制較復(fù)雜. .內(nèi)標(biāo)法加校正因子內(nèi)標(biāo)法加校正因子: :精密稱取待測(cè)物質(zhì)的對(duì)照品精密稱取待測(cè)物質(zhì)的對(duì)照品R,R,加入加入適量?jī)?nèi)標(biāo)物適量?jī)?nèi)標(biāo)物S S進(jìn)樣進(jìn)樣, ,記錄色譜圖記錄色譜圖, ,測(cè)量對(duì)照品和內(nèi)標(biāo)物的峰測(cè)量對(duì)照品和內(nèi)標(biāo)物的峰面積面積, ,則其相對(duì)校正因子為則其相對(duì)校正因子為: :再取加入內(nèi)標(biāo)物的供再取加入內(nèi)標(biāo)物的供試液試液, ,進(jìn)樣進(jìn)樣, ,記錄色譜圖記錄色譜圖, ,測(cè)量供試測(cè)量供試液中待測(cè)組分和內(nèi)標(biāo)物的峰面積液中待測(cè)組分和內(nèi)標(biāo)物的峰面積, ,計(jì)算含

47、量計(jì)算含量: :內(nèi)標(biāo)對(duì)比法（內(nèi)標(biāo)對(duì)比法（內(nèi)標(biāo)一點(diǎn)法內(nèi)標(biāo)一點(diǎn)法）把等量?jī)?nèi)標(biāo)物分別把等量?jī)?nèi)標(biāo)物分別加入等體積已知濃度對(duì)照品溶液加入等體積已知濃度對(duì)照品溶液和和待測(cè)樣品溶液中，待測(cè)樣品溶液中，樣品溶液濃度最好與對(duì)照品溶液相樣品溶液濃度最好與對(duì)照品溶液相當(dāng)。當(dāng)。前提前提:C:Ci i/C/Cs sA Ai i/A/As s的截距為零的截距為零. .對(duì)樣對(duì)樣）（）（sisiiiAAAACC)(%)(對(duì)對(duì)樣樣）（）（）（）（%isisiiCAAAAC內(nèi)標(biāo)對(duì)比法特點(diǎn)：不需要校正因子內(nèi)標(biāo)對(duì)比法特點(diǎn)：不需要校正因子 內(nèi)標(biāo)工作曲線法：內(nèi)標(biāo)工作曲線法：a a、配制一系列不同濃度的等體積對(duì)照液，并加入相、配制一系列不

48、同濃度的等體積對(duì)照液，并加入相同量的內(nèi)標(biāo)物，進(jìn)樣，測(cè)標(biāo)準(zhǔn)品和內(nèi)標(biāo)物的峰面積同量的內(nèi)標(biāo)物，進(jìn)樣，測(cè)標(biāo)準(zhǔn)品和內(nèi)標(biāo)物的峰面積A Ai i和和A As s，以，以A Ai/i/A As s對(duì)對(duì)照溶液中對(duì)照品濃度與對(duì)對(duì)照溶液中對(duì)照品濃度與內(nèi)標(biāo)物濃內(nèi)標(biāo)物濃度之比度之比Ci/CsCi/Cs作圖。計(jì)算回歸方程式作圖。計(jì)算回歸方程式Ai/AsAi/As= a = a Ci/CsCi/Cs+b+b 及相關(guān)系數(shù)（及相關(guān)系數(shù)（ a a：斜率；：斜率；b b：截：截距距 ），求出斜率、截距后確定標(biāo)準(zhǔn)曲線。），求出斜率、截距后確定標(biāo)準(zhǔn)曲線。b b、與、與對(duì)照液對(duì)照液等體積待測(cè)試樣溶液中也加入與對(duì)照液等體積待測(cè)試樣溶液中也

49、加入與對(duì)照液相同量的內(nèi)標(biāo)物，測(cè)得相同量的內(nèi)標(biāo)物，測(cè)得A Ai/i/A As s。c c、把、把b b中測(cè)得比值代入標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算試樣的含量。中測(cè)得比值代入標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算試樣的含量。 特點(diǎn)：不需要校正因子且比內(nèi)標(biāo)一點(diǎn)法精確。特點(diǎn)：不需要校正因子且比內(nèi)標(biāo)一點(diǎn)法精確。2 2、外標(biāo)法：以待測(cè)組分純品為對(duì)照物，與試、外標(biāo)法：以待測(cè)組分純品為對(duì)照物，與試樣中待測(cè)組分的響應(yīng)信號(hào)（峰面積）相比較進(jìn)樣中待測(cè)組分的響應(yīng)信號(hào)（峰面積）相比較進(jìn)行定量的方法。行定量的方法。外標(biāo)法關(guān)鍵：進(jìn)樣量準(zhǔn)確，實(shí)驗(yàn)條件恒定。外標(biāo)法關(guān)鍵：進(jìn)樣量準(zhǔn)確，實(shí)驗(yàn)條件恒定。優(yōu)點(diǎn)：優(yōu)點(diǎn)：操作簡(jiǎn)便，不用校正因子，不必加內(nèi)標(biāo)操作簡(jiǎn)便，不用校正因子，不必加

50、內(nèi)標(biāo)物，只需待測(cè)組分出峰。物，只需待測(cè)組分出峰。缺點(diǎn)：缺點(diǎn)：結(jié)果的準(zhǔn)確度與進(jìn)樣量和操作條件的穩(wěn)結(jié)果的準(zhǔn)確度與進(jìn)樣量和操作條件的穩(wěn)定性有關(guān)定性有關(guān), ,易易產(chǎn)生誤差。產(chǎn)生誤差。外標(biāo)一點(diǎn)法：一種濃度對(duì)照物對(duì)比樣品中待測(cè)組分外標(biāo)一點(diǎn)法：一種濃度對(duì)照物對(duì)比樣品中待測(cè)組分含量，含量，中國(guó)藥典中國(guó)藥典用氣相測(cè)水分用此法。用氣相測(cè)水分用此法。前提：截距為前提：截距為0 0，對(duì)照品濃度與待測(cè)組分濃度接近。，對(duì)照品濃度與待測(cè)組分濃度接近。C C標(biāo)標(biāo)=FA=FA標(biāo)標(biāo)， 求出求出F F， C C樣樣=FA=FA樣樣C C為組分的濃度，為組分的濃度，A A為測(cè)得該組分的峰面積，為測(cè)得該組分的峰面積，F(xiàn) F為比例為比例

51、常數(shù)。常數(shù)。外標(biāo)兩點(diǎn)法：用兩種濃度對(duì)照物求算樣品中待測(cè)組外標(biāo)兩點(diǎn)法：用兩種濃度對(duì)照物求算樣品中待測(cè)組分含量。分含量。前提：選取兩點(diǎn)對(duì)照品的濃度，需涵蓋待測(cè)濃度。前提：選取兩點(diǎn)對(duì)照品的濃度，需涵蓋待測(cè)濃度。 C=FC=F1 1A+FA+F2 2C C、A A同前，同前，F(xiàn) F1 1是比例常數(shù)，是比例常數(shù)，F(xiàn) F2 2是縱坐標(biāo)截距。較先進(jìn)是縱坐標(biāo)截距。較先進(jìn)儀器可自動(dòng)給出，否則也可自己求算。根據(jù)兩種濃度儀器可自動(dòng)給出，否則也可自己求算。根據(jù)兩種濃度對(duì)照品溶液對(duì)照品溶液C C1 1、C C2 2可測(cè)出其相應(yīng)峰面積可測(cè)出其相應(yīng)峰面積A A1 1、A A2 2代入上代入上式解二元一次方程，求出式解二元一

52、次方程，求出F F1 1與與F F2 2，確定直線方程后再，確定直線方程后再測(cè)出供試品的峰面積，即可計(jì)算出供試品濃度。測(cè)出供試品的峰面積，即可計(jì)算出供試品濃度。工作曲線法：用對(duì)照品配成不同濃度的對(duì)照工作曲線法：用對(duì)照品配成不同濃度的對(duì)照液，定量進(jìn)樣，用峰面積對(duì)對(duì)照品的量（或濃液，定量進(jìn)樣，用峰面積對(duì)對(duì)照品的量（或濃度）作線性回歸，求出斜率、截距，確定度）作線性回歸，求出斜率、截距，確定標(biāo)準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)曲線曲線而后計(jì)算樣品的含量。而后計(jì)算樣品的含量。 前提：進(jìn)入檢測(cè)器樣品中被測(cè)成分含量與峰面前提：進(jìn)入檢測(cè)器樣品中被測(cè)成分含量與峰面積成正比且待測(cè)物峰面積在標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍內(nèi)。積成正比且待測(cè)物峰面積在標(biāo)準(zhǔn)曲線范

53、圍內(nèi)。3 3、歸一化法：、歸一化法：前提：試樣中所有組分都產(chǎn)生信號(hào)并能檢出色前提：試樣中所有組分都產(chǎn)生信號(hào)并能檢出色譜峰。譜峰。依據(jù)：組分含量與峰面積成正比。依據(jù)：組分含量與峰面積成正比。適用范圍：只能粗略考察供試品中被測(cè)物的含適用范圍：只能粗略考察供試品中被測(cè)物的含量，量，不適合微量組分的測(cè)定。不適合微量組分的測(cè)定。質(zhì)量歸一化法公式：質(zhì)量歸一化法公式：%100%100%11nniiiiiiiiifAfAfAfAfAfAC各組分為同系物或性質(zhì)相近，校正因子相近時(shí)可直接采各組分為同系物或性質(zhì)相近，校正因子相近時(shí)可直接采用用面積歸一化法計(jì)算：面積歸一化法計(jì)算：%100%100%1niiiiiAAA

54、AAAC同系物或結(jié)構(gòu)異構(gòu)體優(yōu)點(diǎn)：優(yōu)點(diǎn)：定量結(jié)果與進(jìn)樣量、重復(fù)性無(wú)關(guān)，色譜條件略有變定量結(jié)果與進(jìn)樣量、重復(fù)性無(wú)關(guān)，色譜條件略有變化對(duì)結(jié)果幾乎無(wú)影響?；瘜?duì)結(jié)果幾乎無(wú)影響。缺點(diǎn)：缺點(diǎn)：所有組分必須在一定時(shí)間內(nèi)都出峰，必須已知所有所有組分必須在一定時(shí)間內(nèi)都出峰，必須已知所有組分的校正因子，不適合微量組分的測(cè)定。組分的校正因子，不適合微量組分的測(cè)定。4 4、標(biāo)準(zhǔn)溶液加入法：近年來(lái)出現(xiàn)新方法。為精密量取待、標(biāo)準(zhǔn)溶液加入法：近年來(lái)出現(xiàn)新方法。為精密量取待測(cè)成分對(duì)照品適量配制成對(duì)照品溶液，取一定量精密加入測(cè)成分對(duì)照品適量配制成對(duì)照品溶液，取一定量精密加入供試品溶液中，根據(jù)外標(biāo)法或內(nèi)標(biāo)法測(cè)定含量，再扣除加供試品

55、溶液中，根據(jù)外標(biāo)法或內(nèi)標(biāo)法測(cè)定含量，再扣除加入對(duì)照品入對(duì)照品的量的量，即得，即得供試品中待測(cè)成分的含量。供試品中待測(cè)成分的含量。目的：因氣相色譜供試品中被測(cè)成分多含量較低，測(cè)量時(shí)目的：因氣相色譜供試品中被測(cè)成分多含量較低，測(cè)量時(shí)誤差較大。此方法就是要加大檢測(cè)樣品量，減小誤差，其誤差較大。此方法就是要加大檢測(cè)樣品量，減小誤差，其基本定量方法同前三個(gè)?；径糠椒ㄍ叭齻€(gè)。（八）注意事項(xiàng)：（八）注意事項(xiàng)：1 1、手工進(jìn)樣時(shí)，因進(jìn)樣體積不宜控制，最好用內(nèi)標(biāo)法、手工進(jìn)樣時(shí)，因進(jìn)樣體積不宜控制，最好用內(nèi)標(biāo)法定量。自動(dòng)定量。自動(dòng)進(jìn)樣時(shí)，可采用外標(biāo)法定量。進(jìn)樣時(shí)，可采用外標(biāo)法定量。2 2、當(dāng)、當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)溶液加入

56、法與其他定量方法結(jié)果不一致時(shí)，標(biāo)準(zhǔn)溶液加入法與其他定量方法結(jié)果不一致時(shí)，以標(biāo)準(zhǔn)溶液加入法為準(zhǔn)。以標(biāo)準(zhǔn)溶液加入法為準(zhǔn)。五、高效液相色譜法五、高效液相色譜法（HPLCHPLC）：）：（一）定義：是在經(jīng)典的液相柱色譜法的基礎(chǔ)上引入了氣相（一）定義：是在經(jīng)典的液相柱色譜法的基礎(chǔ)上引入了氣相色譜的理論和技術(shù)，采用高壓泵，高效固定相以及高靈敏度色譜的理論和技術(shù)，采用高壓泵，高效固定相以及高靈敏度在線檢測(cè)器發(fā)展而成的分離分析方法。在線檢測(cè)器發(fā)展而成的分離分析方法。適用于測(cè)定揮發(fā)性低、適用于測(cè)定揮發(fā)性低、熱穩(wěn)定性差、分子量大的高分子化合物及離子型化合物，如熱穩(wěn)定性差、分子量大的高分子化合物及離子型化合物，如蛋

57、白質(zhì)、生物堿、甾體等。蛋白質(zhì)、生物堿、甾體等。HPLCHPLC與經(jīng)典液相色譜比較：與經(jīng)典液相色譜比較：1 1、采用、采用高壓泵和高壓泵和高效固定相；高效固定相；2 2、采用高靈敏度檢測(cè)器；、采用高靈敏度檢測(cè)器； 3 3、分析速度快。、分析速度快。HPLCHPLC與氣相色譜比較：與氣相色譜比較： 1 1、應(yīng)用范圍廣；、應(yīng)用范圍廣； 2 2、流動(dòng)相選擇范、流動(dòng)相選擇范圍寬；圍寬； 3 3、室溫下分離。、室溫下分離。（二）特點(diǎn)：（二）特點(diǎn)： “ “三高三高” “” “一快一快” “” “一廣一廣” ” 高柱效高柱效nn10104 4/ /米，柱效高（遠(yuǎn)高于一般米，柱效高（遠(yuǎn)高于一般LCLC）高靈敏度

58、高靈敏度高選擇性高選擇性分析速度快分析速度快應(yīng)用范圍廣泛（可分析應(yīng)用范圍廣泛（可分析80%80%有機(jī)化合物）有機(jī)化合物）（三）高效液相色譜儀與工作流程：（三）高效液相色譜儀與工作流程：1 1貯液罐（濾棒，可濾去顆粒狀物質(zhì)）貯液罐（濾棒，可濾去顆粒狀物質(zhì)）2 2高壓泵（輸液泵）高壓泵（輸液泵）3 3進(jìn)樣裝置進(jìn)樣裝置4 4色譜柱色譜柱分離分離5 5檢測(cè)器檢測(cè)器分析分析6 6廢液出口或組分收集器廢液出口或組分收集器 7 7記錄裝置記錄裝置（四）基本原理：（四）基本原理：1 1、塔板理論：、塔板理論：理理nLH/22212)(16)(54. 5)(WtWttnRRR理effeffnLH/2212)(5

59、4. 5)(16WtWtnRReff2 2、速率理論：、速率理論：（填充柱）：uCuBAHGC/（毛細(xì)管柱）或uCuBH/uCAHHPLC：因在因在HPLCHPLC中流動(dòng)相為液體，擴(kuò)散系數(shù)很小，縱向中流動(dòng)相為液體，擴(kuò)散系數(shù)很小，縱向擴(kuò)散項(xiàng)擴(kuò)散項(xiàng)B/uB/u可忽略不計(jì)可忽略不計(jì). .流動(dòng)相流速對(duì)流動(dòng)相流速對(duì)HPLCHPLC板高的影響：板高的影響：min/1mlu 選擇兼顧柱效和分析時(shí)間，（五）（五）HPLCHPLC法實(shí)驗(yàn)條件的選擇：法實(shí)驗(yàn)條件的選擇：1 1、色譜柱的選擇：、色譜柱的選擇：反相色譜反相色譜：應(yīng)用最為廣泛，適于分析：應(yīng)用最為廣泛，適于分析非極性和中等極非極性和中等極性的化合物。性的化

60、合物。最常用的固定相是十八烷基鍵合固定相。最常用的固定相是十八烷基鍵合固定相。正相色譜正相色譜：主要用于：主要用于分離極性化合物分離極性化合物，常用氨基、氰，常用氨基、氰基鍵合固定相?；I合固定相。樣品為樣品為酸、堿化合物酸、堿化合物，則采用，則采用離子交換色譜離子交換色譜。樣品為樣品為脂肪族或芳香族脂肪族或芳香族異構(gòu)體異構(gòu)體則采用則采用液液- -固（硅膠）固（硅膠）吸附色譜吸附色譜。2 2、流動(dòng)相的選擇：、流動(dòng)相的選擇：根據(jù)不同類型的色譜法選擇流動(dòng)相。根據(jù)不同類型的色譜法選擇流動(dòng)相。反相分配色譜反相分配色譜部分含水溶劑：流動(dòng)相是以水為主，再加入能與水混部分含水溶劑：流動(dòng)相是以水為主，再加入能