1、CompanyLOGO毛細管電泳(capillary electrophoresis，CE)Contents展望展望毛細管電泳的應用毛細管電泳的應用毛細管電泳的類型毛細管電泳的類型毛細管電泳儀的基本結構毛細管電泳儀的基本結構毛細管電泳的基本概念和原理毛細管電泳的基本概念和原理一、毛細管電泳的基本概念和原理一、毛細管電泳的基本概念和原理v 電泳：在外加電場的作用下，帶電的膠體粒子或離子在分散介質中作電泳：在外加電場的作用下，帶電的膠體粒子或離子在分散介質中作定向移動的現象。定向移動的現象。v 毛細管電泳：以高壓電場為驅動力，以毛細管為分離通道，依據樣品毛細管電泳：以高壓電場為驅動力，以毛細管為分

2、離通道，依據樣品中各組分之間淌度和分配行為上的差異而實現分離分析物質的一類液中各組分之間淌度和分配行為上的差異而實現分離分析物質的一類液相技術，是經典電泳技術與現在微柱分離的結合。相技術，是經典電泳技術與現在微柱分離的結合。v 淌度：無限稀釋溶液中帶電離子在單位電場強度下的平均遷移速度淌度：無限稀釋溶液中帶電離子在單位電場強度下的平均遷移速度v/E經典電泳分離法與高效毛細管電泳對比1、所用分離柱的柱徑大、所用分離柱的柱徑大 柱較短柱較短2、分離效率不高、分離效率不高 遠低于遠低于HPLC3、溫度影響大、溫度影響大經典電泳分離法經典電泳分離法1、采用了幾十、采用了幾十m內徑內徑 的毛細管的毛細管

3、2、采用了高達數千伏、采用了高達數千伏 的電壓的電壓3、電流很小、電流很小高效毛細管電泳高效毛細管電泳電泳過程電泳過程v 在芯片電泳過程中，電泳與電滲流并存。因此，在不考慮溶液中離在芯片電泳過程中，電泳與電滲流并存。因此，在不考慮溶液中離子相互作用的前提下，實際所測得的離子淌度是電泳有效淌度與電滲流子相互作用的前提下，實際所測得的離子淌度是電泳有效淌度與電滲流淌度的矢量和，即表觀淌度（淌度的矢量和，即表觀淌度（apparent mobility, ap） 。ap=ef +eo 電場作用下，柱中出現：電泳現象和電滲流現象。電場作用下，柱中出現：電泳現象和電滲流現象。電泳過程電泳過程ap=ef +

4、eov 正離子：兩種效應的運動方向一致，在負極最先流出；正離子：兩種效應的運動方向一致，在負極最先流出；v 中性粒子：無電泳現象，受電滲流影響，在陽離后流出；中性粒子：無電泳現象，受電滲流影響，在陽離后流出；v 陰離子：兩種效應的運動方向相反，陰離子：兩種效應的運動方向相反，eo ef時時, 陰離子在負極最后陰離子在負極最后流出流出,在這種情況下在這種情況下,不不 但可以按類分離但可以按類分離,除中性粒子外除中性粒子外,同種類離子由同種類離子由于受到的電場力大小不一樣也同時被相互分離。于受到的電場力大小不一樣也同時被相互分離。電滲流電滲流( (electroosmotic flow ，EOF)

5、 v 在熔融毛細管內壁的在熔融毛細管內壁的Si-OH，解離為硅氧基，解離為硅氧基（Si-O-）-與與H+。H+與與H2O形成形成H3O+，而，而毛細管內壁的硅氧基陰離子吸引了溶液中毛細管內壁的硅氧基陰離子吸引了溶液中的陽離子，在其表面帶形成雙電層。雙電的陽離子，在其表面帶形成雙電層。雙電層外緣擴散層中的陽離子被電場陰極吸引層外緣擴散層中的陽離子被電場陰極吸引導致溶液向陰極移動，這種效應就是電滲導致溶液向陰極移動，這種效應就是電滲效應。效應。v 電滲效應產生電滲流（電滲效應產生電滲流（EOF）。）。電滲流電滲流( (electroosmotic flow ，EOF) v 電滲流的大小用電滲流速度

6、電滲流的大小用電滲流速度veo表示，其大小取決于表示，其大小取決于電滲淌度電滲淌度eo，和電場強度，和電場強度E，即：，即： Veo=eo . Ev 影響影響EOF速度的主要因素有電場強度、管壁的速度的主要因素有電場強度、管壁的zeta電電勢和溶液的特性。而勢和溶液的特性。而zeta電勢受管壁材料及其表面特性和電勢受管壁材料及其表面特性和溶液性質的影響。溶液性質的影響。v 電滲流在電泳分離中扮演著重要角色。通過控制電滲流在電泳分離中扮演著重要角色。通過控制EOF的大小和方向，可以影響到芯片電泳分離的效率、選擇性的大小和方向，可以影響到芯片電泳分離的效率、選擇性和分離度，因此控制和分離度，因此控

7、制EOF成為優化分離條件的重要參數。成為優化分離條件的重要參數。電滲流的大小電滲流的大小v 電滲流的大小用電滲流速度電滲流的大小用電滲流速度eo表示，取決于電滲淌度表示，取決于電滲淌度eo和電和電場強度場強度E。即即eo= eo E電滲淌度電滲淌度eo取決于電泳介質及雙電層的取決于電泳介質及雙電層的Zeta電勢，即電勢，即 eo = 0 0真空介電常數真空介電常數 介電常數介電常數 毛細管壁的毛細管壁的Zeta電勢。電勢。v 實際電泳分析，可在實驗測定相應參數后，按下式計算實際電泳分析，可在實驗測定相應參數后，按下式計算 eo = Lef/teo Lef 毛細管有效長度毛細管有效長度 teo電

8、滲流標記物（中性物質）的遷移時間電滲流標記物（中性物質）的遷移時間電滲流的流形電滲流的流形v 電荷均勻分布，整體移動，電滲流的流動為平流，塞式流動（譜帶展電荷均勻分布，整體移動，電滲流的流動為平流，塞式流動（譜帶展寬很小）寬很小）v 液相色譜中的溶液流動為層流，拋物線流型，管壁處流速為零，管中液相色譜中的溶液流動為層流，拋物線流型，管壁處流速為零，管中心處的速度為平均速度的心處的速度為平均速度的2倍（引起譜帶展寬較大）。倍（引起譜帶展寬較大）。影響電滲流的因素影響電滲流的因素v1、電場強度的影響、電場強度的影響 v2、毛細管材料的影響、毛細管材料的影響 v3、電解質溶液性質的影響、電解質溶液性

9、質的影響v4、溫度的影響、溫度的影響v5、添加劑的影響、添加劑的影響影響電滲流的因素影響電滲流的因素v 1.電場強度的影響電場強度的影響 電滲流速度和電場強度成正比，當毛細電滲流速度和電場強度成正比，當毛細管長度一定時，電滲流速度正比于工作電壓。管長度一定時，電滲流速度正比于工作電壓。eo = eo Ev 2.毛細管材料的影響毛細管材料的影響 不同材料毛細管的表面電荷特性不同，不同材料毛細管的表面電荷特性不同，產生的電滲流大小和方向不同；產生的電滲流大小和方向不同；影響電滲流的因素影響電滲流的因素v 3. 電解質溶液性質的影響電解質溶液性質的影響v （1）溶液）溶液pH的影響的影響 對于石英毛

10、細管，溶液對于石英毛細管，溶液pH增高時，表面電離多，電增高時，表面電離多，電荷密度增加，管壁荷密度增加，管壁zeta電勢增大，電滲流增大，電勢增大，電滲流增大，pH=7，達到最大；達到最大； pH 電泳電泳 ，則帶負電的膠束以較慢的速度向，則帶負電的膠束以較慢的速度向負極方向移動，中性試樣分子在膠束相和溶液（水相）兩相間分配，負極方向移動，中性試樣分子在膠束相和溶液（水相）兩相間分配，疏水性強的組分與膠束結合的較牢，流出時間長。可用來分離中性物疏水性強的組分與膠束結合的較牢，流出時間長。可用來分離中性物質，擴展了高效毛細管電泳的應用范圍。質，擴展了高效毛細管電泳的應用范圍。 在緩沖溶液中加入

11、離子型表面活性劑，當它濃度達到足夠大時在緩沖溶液中加入離子型表面活性劑，當它濃度達到足夠大時,形形成一疏水內核、外部帶負電的膠束。在電場力作用下，膠束在毛細管成一疏水內核、外部帶負電的膠束。在電場力作用下，膠束在毛細管中移動。由于電泳流和電滲流的方向相反，且中移動。由于電泳流和電滲流的方向相反，且電滲流電滲流 電泳電泳 ，則帶，則帶負電的膠束以較慢的速度向負極方向移動，中性試樣分子在膠束相和負電的膠束以較慢的速度向負極方向移動，中性試樣分子在膠束相和溶液（水相）兩相間分配，疏水性強的組分與膠束結合的較牢，流出溶液（水相）兩相間分配，疏水性強的組分與膠束結合的較牢，流出時間長。可用來分離中性物質

12、，擴展了高效毛細管電泳的應用范圍。時間長。可用來分離中性物質，擴展了高效毛細管電泳的應用范圍。(1)原理原理毛細管膠束電動色譜（MECC）Company L 在毛細管膠束電泳的系統中存在兩相，即被分離物質在流動在毛細管膠束電泳的系統中存在兩相，即被分離物質在流動的水相和起固定作用的膠束相，在電場的作用下溶質在兩相之間的水相和起固定作用的膠束相，在電場的作用下溶質在兩相之間分配。溶質分子根據疏水性的大小，在膠束與溶液之間進行分離。分配。溶質分子根據疏水性的大小，在膠束與溶液之間進行分離。形成電泳和層析同時存在的膠束電動分離機制。它與普通層析分形成電泳和層析同時存在的膠束電動分離機制。它與普通層析

13、分離不同的，作為固定相的膠束是移動的，即在電場的作用下作定離不同的，作為固定相的膠束是移動的，即在電場的作用下作定向泳動。向泳動。 陰離子膠束在電場中向陽極遷移，如：十二烷基磺酸鈉陰離子膠束在電場中向陽極遷移，如：十二烷基磺酸鈉（SDS）。陽離子膠束在電場中向陰極遷移。如：十二烷基三）。陽離子膠束在電場中向陰極遷移。如：十二烷基三甲基季胺甲基季胺(DTAC)。 (2) 作用機理作用機理毛細管膠束電動色譜（MECC） 在膠束電泳中，組分是根據其疏水性的差異進行分離的，不同在膠束電泳中，組分是根據其疏水性的差異進行分離的，不同疏水性的粒子與膠束相互作用不同，疏水性強的作用力大，保留時疏水性的粒子與

14、膠束相互作用不同，疏水性強的作用力大，保留時間長，否則相反。分離過程如下：間長，否則相反。分離過程如下： a. 不與膠束結合的組分，比膠束泳動速度快而最先出來。不與膠束結合的組分，比膠束泳動速度快而最先出來。 b. 與膠束結合的組分，與膠束泳動速度一樣，最后出來。與膠束結合的組分，與膠束泳動速度一樣，最后出來。 c. 具有一定疏水基團的中性粒子，在膠束和溶液之間進行分配具有一定疏水基團的中性粒子，在膠束和溶液之間進行分配，因此它界于上述二者之間出來。，因此它界于上述二者之間出來。(3) 膠束分離過程膠束分離過程毛細管膠束電動色譜（MECC） 膠束電泳分離過程示意圖 毛細管膠束電動色譜（MECC

15、） 膠束毛細管電泳常用的表面活性劑主要分兩類：陽離子表面活膠束毛細管電泳常用的表面活性劑主要分兩類：陽離子表面活性劑和陰離子表面活性劑。性劑和陰離子表面活性劑。 陰離子表面活性劑十烷基硫酸鈉十二烷基硫酸鈉(SDS)十四烷基硫酸鈉(STS) 種 類 名 稱 陽離子表面活性劑十二烷基三甲基季胺氯(DTAC)十二烷基三甲基季胺溴(DTAB)十六烷基三甲基季胺氯(CTAC)(4) 膠束的種類膠束的種類毛細管膠束電動色譜（MECC）a 蛋白分離蛋白分離: 用非離子型表面活性分離神經肽，分離條件：用非離子型表面活性分離神經肽，分離條件：250mmol/L 磷酸緩沖液，磷酸緩沖液，pH7.0,80mmol/

16、L的辛基葡萄糖苷，電場強度的辛基葡萄糖苷，電場強度E = 250V/cm, 電流電流I=33A，毛細管長度，毛細管長度 L=70cm ，內徑，內徑id=17m，檢測波長檢測波長 =210nm。(5) 膠束電泳的應用膠束電泳的應用毛細管膠束電動色譜（MECC） b 氨基酸的分離氨基酸的分離: 膠束電泳分離膠束電泳分離PTH氨基酸氨基酸毛細管膠束電動色譜（MECC）毛細管等電聚焦（毛細管等電聚焦（CIEFCIEF）v 在毛細管中充上兩性電解質載體，在毛細管兩端施加在毛細管中充上兩性電解質載體，在毛細管兩端施加電壓，管內將建立一個由陽極到陰極逐步升高的電壓，管內將建立一個由陽極到陰極逐步升高的PH梯

17、度，梯度，當注入樣品時，樣品會因為他們的等電點不同也在電場作當注入樣品時，樣品會因為他們的等電點不同也在電場作用下在管道中遷移到不同的位置形成聚焦區帶，實現組分用下在管道中遷移到不同的位置形成聚焦區帶，實現組分之間的分離分析。之間的分離分析。v 適用樣品對象：蛋白質適用樣品對象：蛋白質 毛細管等電聚焦電泳(CIEF) 在毛細管內填充含有兩性電解質的凝膠溶液，聚膠后將毛細管在毛細管內填充含有兩性電解質的凝膠溶液，聚膠后將毛細管的陰極放入堿性電極槽，陽極放入酸性電極槽，施加一定的電壓的陰極放入堿性電極槽，陽極放入酸性電極槽，施加一定的電壓自動形成自動形成pH梯度。被分離的蛋白質在電場的作用下，開始

18、遷移梯度。被分離的蛋白質在電場的作用下，開始遷移直至到達一個不帶電荷的穩定區，停止運動。具有不同等電點的直至到達一個不帶電荷的穩定區，停止運動。具有不同等電點的蛋白質組分在蛋白質組分在pH梯度膠中泳動時，各自按照自身所帶電荷相反梯度膠中泳動時，各自按照自身所帶電荷相反的方向（等電點方向）遷移，最后停留在等電點的位置，形成一的方向（等電點方向）遷移，最后停留在等電點的位置，形成一條電泳區帶，各組分彼此被分開。條電泳區帶，各組分彼此被分開。(1) 原理：原理： 毛細管等電聚焦電泳的分離是根據組分的毛細管等電聚焦電泳的分離是根據組分的pI進行的。當被分離進行的。當被分離組分達到其組分達到其pI位置時

19、就會停止遷移，如何將已分離好的樣品逐個轉位置時就會停止遷移，如何將已分離好的樣品逐個轉移出來是很重要的。具體步驟如下：移出來是很重要的。具體步驟如下：進樣：將樣品以進樣：將樣品以12的濃度與兩性電解質混合，采用壓差法將兩的濃度與兩性電解質混合，采用壓差法將兩性電解質和樣品的混合物壓入毛細管內。性電解質和樣品的混合物壓入毛細管內。(2)分離過程：分離過程： 毛細管等電聚焦電泳(CIEF)電泳：接通電源電泳：接通電源(6-8KV)，在恒壓下電泳，由于兩性離子不，在恒壓下電泳，由于兩性離子不 斷遞減，電流也隨之不斷下降，待電泳基本趨于零斷遞減，電流也隨之不斷下降，待電泳基本趨于零 時即可。時即可。電

20、遷移：被分離的物質各自停留在其等電點區域，這時將電遷移：被分離的物質各自停留在其等電點區域，這時將 陰極槽中的陰極槽中的NaOH 用用NaOH + HCl 取代，再施加電取代，再施加電 壓使壓使Cl-進入毛細管內，然后進行電遷移，這時毛細進入毛細管內，然后進行電遷移，這時毛細 管內的管內的pH梯度就會下降，使已分離的蛋白質重新帶梯度就會下降，使已分離的蛋白質重新帶 上電荷，按上電荷，按pI值大小順序逐個遷移出來。值大小順序逐個遷移出來。 毛細管等電聚焦電泳(CIEF)毛細管等速電泳（毛細管等速電泳（CITPCITP）v 毛細管中充滿前導電解質，樣品池中放置尾隨電解毛細管中充滿前導電解質，樣品池

21、中放置尾隨電解質，前導電解質的淌度大于樣品中各組分的淌度，尾隨電質，前導電解質的淌度大于樣品中各組分的淌度，尾隨電解質的淌度小于樣品中各組分的淌度，當施加電壓后，前解質的淌度小于樣品中各組分的淌度，當施加電壓后，前導電解質最先向陰極移動，然后是樣品中淌度大的組分，導電解質最先向陰極移動，然后是樣品中淌度大的組分，依此類推，最后移動的是尾隨電解質，之后他們就以相同依此類推，最后移動的是尾隨電解質，之后他們就以相同的移動速度向陰極移動，達到分離檢測的目的。的移動速度向陰極移動，達到分離檢測的目的。(1)原理：原理： 在被分離組分與電解質一起向前移動的同時進行聚焦分離的電泳方在被分離組分與電解質一起

22、向前移動的同時進行聚焦分離的電泳方法。法。 如同等電聚焦電泳一樣，等速電泳的毛細管內電滲流為零，緩沖系如同等電聚焦電泳一樣，等速電泳的毛細管內電滲流為零，緩沖系統由前后兩種不同淌度的電解質組成。在電泳分離時，首先向毛細管內統由前后兩種不同淌度的電解質組成。在電泳分離時，首先向毛細管內引入高于被分離物質各組分電泳淌度的電解質引入高于被分離物質各組分電泳淌度的電解質(稱為前導電解質，稱為前導電解質，Leading Electrolyte)，然后進樣，隨后再引入低于被分離物質各組分電，然后進樣，隨后再引入低于被分離物質各組分電泳淌度的電解質泳淌度的電解質(稱為尾隨電解質，稱為尾隨電解質，Termin

23、ating Electrolyte)。在電場作。在電場作用下各組分在前導電解質和尾隨電解質之間進行聚焦分離。用下各組分在前導電解質和尾隨電解質之間進行聚焦分離。 毛細管等速電泳(CITP) (2)毛細管等速電泳緩沖液的選擇：毛細管等速電泳緩沖液的選擇： 前導電解質：5nmol 磷酸 尾隨電解質：100nmol 結 氨酸，用伯胺調節所需pH值。(3)等速電泳分離等速電泳分離PTH氨基酸氨基酸毛細管等速電泳(CITP)毛細管等速電泳分離原理示意圖毛細管等速電泳分離原理示意圖毛細管凝膠電泳（毛細管凝膠電泳（CGECGE） 將聚丙烯酰胺在毛細管柱內交聯生成凝膠。其具有多將聚丙烯酰胺在毛細管柱內交聯生成

24、凝膠。其具有多孔性，類似分子篩的作用，試樣分子按大小分離。能夠有孔性，類似分子篩的作用，試樣分子按大小分離。能夠有效減小組分擴散，所得峰型尖銳，分離效率高。可分離測效減小組分擴散，所得峰型尖銳，分離效率高。可分離測定蛋白質、定蛋白質、DNA等等。毛細管凝膠篩分電泳的基本原理與常規的凝膠電泳相同毛細管凝膠篩分電泳的基本原理與常規的凝膠電泳相同，是在毛細管內填充了凝膠類多聚物，其具有多孔性，是在毛細管內填充了凝膠類多聚物，其具有多孔性，類似分子篩的作用，試樣分子在電泳時按大小被分離。類似分子篩的作用，試樣分子在電泳時按大小被分離。能夠有效減小組分擴散，所得峰型尖銳，分離效率高。能夠有效減小組分擴散

25、，所得峰型尖銳，分離效率高。可分離測定蛋白質、可分離測定蛋白質、DNA等。等。毛細管凝膠電泳（CGE）(1)原理：原理：無機凝膠：如多孔硅膠，多孔玻璃等。無機凝膠：如多孔硅膠，多孔玻璃等。有機凝膠：如葡聚糖、瓊脂糖、聚丙烯酰胺凝膠等。有機凝膠：如葡聚糖、瓊脂糖、聚丙烯酰胺凝膠等。分離生物大分子使用的凝膠主要是有機凝膠。在毛細管凝膠電分離生物大分子使用的凝膠主要是有機凝膠。在毛細管凝膠電泳中主要用十二烷基磺酸鈉聚丙烯酰胺泳中主要用十二烷基磺酸鈉聚丙烯酰胺(SDSPAGE)，甲基，甲基纖維素，羥基丙基纖維素等。纖維素，羥基丙基纖維素等。(2) 凝膠分類凝膠分類毛細管凝膠電泳（CGE） 毛細管電泳分

26、離標準蛋白圖譜(3) 應用應用毛細管凝膠電泳（CGE） 使用粘度低的線性聚合物，如甲基纖維素，羥基丙基纖維素使用粘度低的線性聚合物，如甲基纖維素，羥基丙基纖維素等。不加聚合劑處理一單體的形式填充到毛細管內，同樣也有和等。不加聚合劑處理一單體的形式填充到毛細管內，同樣也有和很好的分子篩的作用。因此，把這類填料制成的毛細管稱之為無很好的分子篩的作用。因此，把這類填料制成的毛細管稱之為無膠篩分。無膠篩分與凝膠篩分所起的作用是相似的。膠篩分。無膠篩分與凝膠篩分所起的作用是相似的。 優點：凝膠聚合過程中容易產生氣泡的弊端、操作簡便、優點：凝膠聚合過程中容易產生氣泡的弊端、操作簡便、毛細管使用壽命長、柱內

27、的填料可以更換。毛細管使用壽命長、柱內的填料可以更換。 缺點：是分離效果略比凝交差一點。缺點：是分離效果略比凝交差一點。無膠篩分毛細管電泳（無膠篩分毛細管電泳（NGCENGCE）毛細管電滲色譜（毛細管電滲色譜（CECCEC）v 在毛細管壁上鍵合涂漬或填充在毛細管壁上鍵合涂漬或填充HPLC固定相微粒，以固定相微粒，以試樣與固定相之間的相互作用為分離機制，以電滲流為流試樣與固定相之間的相互作用為分離機制，以電滲流為流動相驅動力的色譜過程。動相驅動力的色譜過程。思考：各種電泳方式比較思考：各種電泳方式比較v 相同點？相同點？v 不同點：？不同點：？ 機理：機理： 適用的樣品范圍：適用的樣品范圍： 優

28、缺點：優缺點：四、毛細管電泳的應用四、毛細管電泳的應用毛細管毛細管電泳電泳食品安全食品安全生命科學生命科學藥物研究藥物研究資源環境資源環境生命科學生命科學v蛋白質分析蛋白質分析vDNA分析分析v基因分析基因分析v血液分析血液分析 毛細管電泳在蛋白質分析的應用毛細管電泳在蛋白質分析的應用v分子量的測定v等電點的測定v肽譜分析（指紋圖）測定蛋白質的一級結構v遷移率的測定示例示例1516171819201.52.02.53.03.54.04.5t/minMW/104Mw=4989tR-57295R=0.9965先測出標準蛋白，如左圖顯示了由214nm紫外吸收檢測得到的譜圖。由此，可算出如下圖分子量遷

29、移時間工作曲線圖或計算出回歸曲線方程再測未知樣品的tR ，然后與工作曲線進行標準比較。標準曲線法示例示例 豬基因組豬基因組DNA及及PCR產物測試產物測試電泳儀，電泳槽，電子天平，移液器，槍頭，電泳儀，電泳槽，電子天平，移液器，槍頭，微波爐，紫外透射檢測儀等。微波爐，紫外透射檢測儀等。 瓊脂糖，瓊脂糖，1XTAE電泳緩沖液，溴化乙錠（電泳緩沖液，溴化乙錠（EB），），6X載載樣緩沖液樣緩沖液 ： 0.25%溴酚藍溴酚藍 ，0.25%二甲苯青二甲苯青 ，40%蔗糖水溶液蔗糖水溶液; 0.25%溴酚藍溴酚藍 ，0.25%二甲苯青二甲苯青 ，30%甘油水溶液甘油水溶液示例示例 1g 瓊脂糖加入瓊脂糖

30、加入100ml 1TAE電泳緩沖液中，搖勻。電泳緩沖液中，搖勻。在微波爐中加熱至瓊脂糖完全溶解。（冷卻到在微波爐中加熱至瓊脂糖完全溶解。（冷卻到60，加入，加入100l的的0.5mg/ml EB，并搖勻。），并搖勻。） 用膠帶將制膠板兩端封好，用膠帶將制膠板兩端封好，插入適當梳子插入適當梳子，將溶解的，將溶解的瓊脂糖（約瓊脂糖（約50）倒入，室溫冷卻凝固）倒入，室溫冷卻凝固 充分凝固后撕掉兩端的膠布，將凝膠置入電泳槽中，充分凝固后撕掉兩端的膠布，將凝膠置入電泳槽中，加加1TAE電泳緩沖液至液面覆蓋凝膠電泳緩沖液至液面覆蓋凝膠1-2mm，小心，小心垂直向上拔出梳子。垂直向上拔出梳子。(4) 用移

31、液器吸取總用移液器吸取總DNA或質粒樣品或質粒樣品4l于封口膜上，再于封口膜上，再加入加入2l 的的6X載樣緩沖液，混勻后，載樣緩沖液，混勻后，小心加入點樣小心加入點樣孔孔。 打開電源開關，調節電壓至打開電源開關，調節電壓至3-5V/cm，可見到溴酚藍，可見到溴酚藍條帶由負極向正極移動，電泳約條帶由負極向正極移動，電泳約30min-60min。 將凝膠放入將凝膠放入EB染液中染色染液中染色5-10min,用清水稍微漂洗用清水稍微漂洗。 將染色后的凝膠置于紫外透射檢測儀上，蓋上防護觀將染色后的凝膠置于紫外透射檢測儀上，蓋上防護觀察罩，打開紫外燈，可見到發出熒光的察罩，打開紫外燈，可見到發出熒光的

32、DNA條帶。條帶。豬基因組豬基因組DNA1%瓊脂凝膠電泳圖瓊脂凝膠電泳圖 PCR產物瓊脂凝膠電泳圖產物瓊脂凝膠電泳圖 (1、2、3、4為為PCR產物，產物，M為為DL2000Marker) 藥物研究藥物研究v天然藥物或中藥中的成分：天然藥物或中藥中的成分：v制劑中的有效成分分析：制劑中的有效成分分析：v藥物中的雜質分析：藥物中的雜質分析：v中藥的指紋圖譜的建立：中藥的指紋圖譜的建立：中藥指紋圖譜分析中藥指紋圖譜分析a 冬蟲夏草b 天然蛹蟲草C 亞香棒草測試條件：l 毛細管：毛細管：50cm75m i.dl 緩沖液緩沖液：36mmol硼酸鈉和 15mmol硼酸氫（pH9.2）l 電壓：電壓： 1

33、4KVl 檢測方式：檢測方式： 紫外 藥物的手性拆分藥物的手性拆分測試樣品：鹽酸舍曲林異構體鹽酸舍曲林異構體 （1 110-4g/ml）測試條件：l 緩沖液緩沖液：40mmol/L磷酸鹽緩 沖液（pH3）l 檢測方式：檢測方式： 紫外 資源環境資源環境v水質檢測，廢水檢測：水質檢測，廢水檢測： 有機物（酚類、酯類）有機物（酚類、酯類） 無機離子無機離子廢水中酚類的檢測廢水中酚類的檢測測試條件：l 毛細管：毛細管：80cm25m i.dl 緩沖液緩沖液：20mmol硼砂 （pH9.6）l 分離電壓：分離電壓： 20KVl 檢測方式：檢測方式： 安培檢測1.間甲酚間甲酚 2.苯酚苯酚 3.五氯酚五氯酚4.2，4，6三氯酚三氯酚 5.2，4二氯酚二氯酚 6.對