1、整理課件1整理課件2實驗目的 學習細胞活體染色的方法。 觀察動、植物活細胞內線粒體，液泡系的形態、數量與分布。整理課件3細胞膜結構細胞膜結構整理課件4實驗原理 一般的生物材料不能穿透細胞膜，一般的生物材料不能穿透細胞膜，只有當細胞被固定后，細胞膜被破只有當細胞被固定后，細胞膜被破壞，染料才能進入細胞內部。但是，壞，染料才能進入細胞內部。但是，有一些染料（稱有一些染料（稱“活體染料活體染料”）卻）卻能進入活細胞，它們是一些無毒或能進入活細胞，它們是一些無毒或毒性很小的染色劑，能使細胞中某毒性很小的染色劑，能使細胞中某些特定結構著色。活體染料基本上些特定結構著色。活體染料基本上不影響或很少影響細胞

2、的生命活動。不影響或很少影響細胞的生命活動。整理課件5 活染法彌補了活觀察法不能顯示細胞精細結構的活染法彌補了活觀察法不能顯示細胞精細結構的不足，也避免了固定染色法對細胞結構的破環和不足，也避免了固定染色法對細胞結構的破環和造成人為假象的弊病。遺憾的是，適宜活體染色造成人為假象的弊病。遺憾的是，適宜活體染色的染料較少，能顯示出的結構和種類也不多。的染料較少，能顯示出的結構和種類也不多。 活體染色分為體內活染和體外活染兩種。前者是活體染色分為體內活染和體外活染兩種。前者是將染料注射于生物體內，染色后再取材觀察。后將染料注射于生物體內，染色后再取材觀察。后者是取材后，對離體的活細胞進行染色。為保持

3、者是取材后，對離體的活細胞進行染色。為保持離體細胞的正常存活，染色時需供給細胞以正常離體細胞的正常存活，染色時需供給細胞以正常的溫度，滲透壓，的溫度，滲透壓，PHPH等。等。整理課件6活體染色整理課件7較為常見的活體染色劑較為常見的活體染色劑 詹納斯綠B(Janus green B) 中性紅 臺盼藍(trypan blue)整理課件8詹納斯綠B(Janus green B) 專一專一用于用于線粒體線粒體的染色。它可以和線的染色。它可以和線粒體中的細胞色素粒體中的細胞色素C C氧化酶結合，氧化酶結合，保持保持氧化狀態氧化狀態( (即有色狀態即有色狀態) )呈呈藍綠色藍綠色, ,而在而在周圍的細胞

4、質中染料被還原周圍的細胞質中染料被還原, ,成為無色成為無色狀態狀態。 必須指出的是，只有具有必須指出的是，只有具有活性的活性的細胞細胞色素色素C C氧化酶才能夠把詹納斯綠氧化酶才能夠把詹納斯綠B B氧化，氧化，從而使它顯出顏色從而使它顯出顏色整理課件9人口腔上皮細胞的線粒體分布在實驗過程中在實驗過程中務必保持所取的務必保持所取的材料的活性。通材料的活性。通常，需要把生物常，需要把生物材料置于材料置于的冰水浴低的冰水浴低溫中，并且操作溫中，并且操作要迅速。要迅速。整理課件10整理課件11中性紅中性紅 中性紅是中性紅是液泡系液泡系的特殊的特殊活體活體染色劑，染色劑，它可將不同發育時期的液泡染成不

5、它可將不同發育時期的液泡染成不同深度的同深度的紅色紅色，在細胞處于生活狀，在細胞處于生活狀態下細胞質和核不被染色，該染料態下細胞質和核不被染色，該染料對液泡系具有一定對液泡系具有一定專一性專一性。整理課件12整理課件13液泡系的中性紅染色點經觀察液泡系的中性紅染色點經觀察整理課件14臺盼藍(trypan blue) 臺盼藍：正常的活細胞，胞膜結構完整，能臺盼藍：正常的活細胞，胞膜結構完整，能夠排斥臺盼藍，使之不能夠進入胞內；而喪夠排斥臺盼藍，使之不能夠進入胞內；而喪失活性或細胞膜不完整的細胞，胞膜的通透失活性或細胞膜不完整的細胞，胞膜的通透性增加，可被臺盼藍染成藍色。性增加，可被臺盼藍染成藍色

6、。 通常認為細胞膜完整性喪失，即可認為細胞通常認為細胞膜完整性喪失，即可認為細胞已經死亡，這與中性紅作用相反。因此，借已經死亡，這與中性紅作用相反。因此，借助臺盼藍染色可以非常簡便、快速地區分活助臺盼藍染色可以非常簡便、快速地區分活細胞和死細胞。臺盼藍是組織和細胞培養中細胞和死細胞。臺盼藍是組織和細胞培養中最常用的死細胞鑒定染色方法之一。注意凋最常用的死細胞鑒定染色方法之一。注意凋亡小體也有臺盼藍拒染現象。亡小體也有臺盼藍拒染現象。 整理課件15整理課件16實驗用品l材料：黃豆根尖、洋蔥、小鼠。材料：黃豆根尖、洋蔥、小鼠。l器械：顯微鏡、鑷子、刀片、器械：顯微鏡、鑷子、刀片、剪刀、解剪刀、解剖

7、針、剖針、 表面皿、載玻片、蓋玻片、吸管、表面皿、載玻片、蓋玻片、吸管、收水紙等。收水紙等。l試劑：試劑： Ringer Ringer氏液氏液 1 130003000中性紅溶液中性紅溶液 1 150005000詹納斯綠詹納斯綠B B 臺盼藍染色液臺盼藍染色液 香柏油、二甲苯、蒸餾水等香柏油、二甲苯、蒸餾水等整理課件17實驗方法1. 1. 液泡系的中性紅活體染色液泡系的中性紅活體染色取黃豆芽的根尖處的縱切面取黃豆芽的根尖處的縱切面 于載玻片上的中性紅染液中染色于載玻片上的中性紅染液中染色510min510min 吸去染液，滴一滴吸去染液，滴一滴RingerRinger液液 蓋上蓋玻片進行鏡檢蓋上

8、蓋玻片進行鏡檢整理課件182.線粒體的活體染色 用植物細胞觀察線粒體的活體染色用植物細胞觀察線粒體的活體染色撕取洋蔥鱗莖內表皮一小塊撕取洋蔥鱗莖內表皮一小塊于載玻片上的于載玻片上的1/5000 Janus green B1/5000 Janus green B染色染色30min30min吸去染液，滴一滴吸去染液，滴一滴RingerRinger液液蓋上蓋玻片進行鏡檢蓋上蓋玻片進行鏡檢整理課件19娶取鼠肝肝組織一小塊，放入盛有娶取鼠肝肝組織一小塊，放入盛有RingerRinger氏液表氏液表面皿中洗去血液面皿中洗去血液 于載玻片上的于載玻片上的1/5000 Janus green B1/5000

9、Janus green B染色染色30min30min 撕開組織塊，這樣溶液中會有一些細胞或細胞群撕開組織塊，這樣溶液中會有一些細胞或細胞群 吸取溶液，放在載玻片的吸取溶液，放在載玻片的RingerRinger氏液中氏液中 墊上兩根短頭發，蓋上蓋玻片進行鏡檢墊上兩根短頭發，蓋上蓋玻片進行鏡檢 用動物細胞觀察線粒體的活體染色用動物細胞觀察線粒體的活體染色為什么要用油鏡觀察，植物細胞卻不用？為什么要用油鏡觀察，植物細胞卻不用？為什么要墊上兩根短頭發？為什么要墊上兩根短頭發？思考整理課件20 3 3. .人口腔粘膜上皮細胞線粒體的超活染色觀察人口腔粘膜上皮細胞線粒體的超活染色觀察清潔載玻片放在清潔載

10、玻片放在3737恒溫水浴鍋的金屬板上恒溫水浴鍋的金屬板上滴滴2 2滴滴1/5000 Janus green B1/5000 Janus green B染液染液用牙簽口腔頰粘膜處稍用力刮取上皮細胞用牙簽口腔頰粘膜處稍用力刮取上皮細胞刮下的粘液狀物放大載玻片的染液滴中刮下的粘液狀物放大載玻片的染液滴中染色染色10l5min(10l5min(注意不可使染液干燥，必要時可再注意不可使染液干燥，必要時可再加滴染液加滴染液) )蓋上蓋玻片蓋上蓋玻片, ,顯微鏡下觀察顯微鏡下觀察整理課件214. 臺盼藍染色鑒定細胞死活取小鼠腹腔水細胞于潔凈載玻片上取小鼠腹腔水細胞于潔凈載玻片上滴加滴加1%臺盼藍臺盼藍1滴滴

11、蓋上蓋玻片于顯微鏡下進行鏡檢蓋上蓋玻片于顯微鏡下進行鏡檢整理課件22注意事項注意事項 對口腔上皮細胞進行染色時不可使對口腔上皮細胞進行染色時不可使染劑干燥，可適當補加染液。染劑干燥，可適當補加染液。 在對植物進行觀察時一定要讓材料在對植物進行觀察時一定要讓材料盡量展開。盡量展開。 詹納斯綠詹納斯綠B(Janus green B)B(Janus green B)溶液現溶液現用現配，以保持它的充分氧化能力。用現配，以保持它的充分氧化能力。 試驗中速度要快，以免組織細胞死試驗中速度要快，以免組織細胞死亡亡整理課件23思考題思考題 所觀察到的液泡大小是否有差別，染所觀察到的液泡大小是否有差別，染色深度是否一樣，并繪圖加以說明。色深度是否