T/SVEFA02011-2024ICS67.050CCSX04T/SVEFA02011-2024蔬菜中啶蟲脒等7種農藥殘留的膠體金免疫層析法檢測規范Standardforthedeterminationof7pesticideresiduessuchasacetcolloidalgoldimmunochrT/SVEFA02011-2024前言 2 32規范性引用文件 33術語和定義 34檢測原理 35試劑與材料 36儀器和測試條件 47分析步驟 58結果判定 59性能指標 6 81T/SVEFA02011-2024前言本文件按照GB/T1.1-2020《標準化工作導則第1部分：標準化文件的結構和起草規則》的規定起草。請注意本文件的某些內容可能涉及專利。本文的發布機構不承擔識別專利的責任。本文件由上海市農業技術推廣服務中心提出。本文件由上海蔬菜食用菌行業協會歸口并組織實施。本文件起草單位：上海市農業技術推廣服務中心、浙江大學、上海瑞鑫科技儀器有限公司、上海市青浦區農產品質量安全中心、松江區農業技術推廣中心、上海蔬菜食用菌行業協會。首批承諾執行單位：閔行區農產品質量安全中心、松江區新浜鎮農業農村服務中心、松江區泖港鎮農業農村服務中心、金山區呂巷鎮農業農村服務中心、浦東區唐鎮經濟發展服務中心、青浦區練塘鎮農業農村服務中心。本文件主要起草人：占繡萍、李建勇、郭逸蓉、朱衛芳、張東鶴、顧芹芹、王齊旭、高宇、孔令娟、張恒鋮、宋佳、袁圣斐、陳旭、張大銘。2T/SVEFA02011-2024本文件所述藥品、試劑、檢測卡信息及操作步驟是為給文件使用者提供方便，在使用本文件時不做限定，檢出陽性樣品時，可根據檢測卡說明書進行操作。文件使用者應使用經過驗證的滿足本文件規定的各項性能指標的試劑、試劑盒，并根據膠體金檢測卡使用說明書進行保存。本文件參比實驗室儀器標準為《食品安全國家標準植物源性食品中331種農藥及其代謝物殘留量的測定液相色譜-質譜聯用法》（GB23200.121）、《食品安全國家標準水果和蔬菜中500種農藥及相關化學品殘留量的測定氣相色譜-質譜法》（GB23200.8當結果陽性時，可采用儀器方法進行確證。3T/SVEFA02011-2024蔬菜中啶蟲脒等7種農藥殘留的快速檢測膠體金免疫層析法本文件規定了蔬菜中啶蟲脒、吡蟲啉、噻蟲嗪、多菌靈、百菌清、烯酰嗎啉、氯蟲苯甲酰胺等7種農藥殘留的膠體金免疫層析快速檢測方法。本文件適用于蔬菜中啶蟲脒等7種農藥的快速定性測定。2規范性引用文件下列文件中的內容通過文中的規范性引用而構成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB2763食品安全國家標準食品中農藥最大殘留限量GB2763.1食品安全國家標準食品中2,4-滴丁酸鈉鹽等112種農藥最大殘留限量GB/T6682分析實驗室用水規格和試驗方法3術語和定義膠體金：又稱金溶膠，是金鹽被還原成金單質后形成的穩定、均勻、呈單一分散狀態懸浮在液體中的金顆粒懸浮液。金溶膠顆粒由一個金原子及包圍在外的雙離子層構成。4檢測原理采用競爭型免疫反應原理，樣品中目標農藥經提取后，與膠體金標記的特異性抗體相結合，抑制抗體和檢測線（T線）上抗原的結合，從而導致T線顏色變化。通過目視（或借助膠體金讀數儀）識別并比較試紙檢測區域T線與控制線（C線）顏色深淺，從而判定樣品中的農藥殘留情況。5試劑與材料除另有規定外，本方法使用試劑均為分析純，水為GB/T6682規定的二級水。5.1.1磷酸二氫鉀（KH2PO4）。5.1.2磷酸氫二鈉（Na2HPO4）。4T/SVEFA02011-20245.1.3氯化鈉（NaCl）。5.1.4氯化鉀（KCl）。5.1.5氫氧化鈉（NaOH）。5.1.6甲醇（CH3OH，色譜純）。5.1.7磷酸鹽緩沖液（PBS，0.01mol/L分別稱取磷酸二氫鉀（5.1.1）0.27g，磷酸氫二鈉（5.1.2）1.14g，氯化鈉（5.1.3）8.0g，氯化鉀（5.1.4）0.2g，用水溶解后定容至1L，用氫氧化鈉（5.1.5）溶液pH值調至7.4，現配現用。5.1.7通用提取液：分別量取甲醇（5.1.6）200mL和磷酸鹽緩沖液（5.1.7）800mL混合均勻。5.2參考物質啶蟲脒等7種農藥參考物質的中文名稱、英文名稱、CAS號、分子式、相對分子質量見附錄A1。5.3標準溶液的配制5.3.1農藥標準儲備液（1000μg/mL分別準確稱取目標農藥標準品10mg（精確到0.1mg用甲醇（5.1.5）完全溶解并定容至10mL，配制成農藥標準儲備液，-18℃條件下避光、密閉保存，有效期十二個月。5.3.2農藥標準中間液（100μg/mL準確移取7種農藥標準儲備液（5.3.1）各1mL，分別置于10mL容量瓶中，用甲醇（5.1.5）定容，搖勻，分別配制成濃度為100μg/mL的7種農藥標準中間液，-18℃條件下避光、密閉保存，有效期三個月。5.3.3農藥標準工作液（1μg/mL準確移取農藥標準中間液（5.3.2）各1mL，分別置于100mL容量瓶中，用緩沖溶液（5.1.6）定容，搖勻，分別配制成濃度為1μg/mL的7種農藥標準工作液，現用現配。5.3.4標準溶液為外部獲取時，管理及使用應符合相關規定。5.4材料5.4.1固化有膠體金免疫層析試劑條的紙片（速測卡）。5.4.2不銹鋼研磨珠（可選）。6儀器和測試條件6.1電子天平：感量為0.01g和0.1mg（選用）。6.2pH計。6.3移液器：最大量程為100μL、1000μL、10mL。5T/SVEFA02011-20246.4渦旋儀（可選）。6.5超聲儀（可選）。6.6食品加工器（可選）。6.7膠體金讀數儀（可選）。6.8環境條件：溫度為15℃~35℃,濕度≤80%。6.9測試要求：請按照操作步驟進行測試，盡量不要觸摸速測卡中央的白色膜面，檢測時避免陽光直射。6.10注意事項：本速測卡為一次性產品，請勿重復使用。6.11儲存條件：速測卡儲存于4℃~30℃陰涼避光干燥環境中。6.12速測卡的有效期：十二個月。7分析步驟7.1前處理方法7.1.1樣品制備：蔬菜樣品取樣部位按照GB2763的規定執行，樣品切碎后混勻，按四分法縮分后直接裝入樣品袋或經食品加工器攪碎勻漿后備用，樣品量不少于100g。7.1.2提取方法：稱取已制備的蔬菜樣品2.0g（精確到0.01g）于15mL離心管中，加入10mL通用提取液（5.1.7并添加5～8粒研磨珠，振蕩提取1min，或超聲、渦旋提取1min。7.1.3靜置：樣品提取完成后靜置10min，取上清液待測。7.2上樣測定7.2.1加樣液：將速測卡盒恢復至室溫，打開包裝后將7種農藥速測卡平放，用滴管吸取待測液，每種農藥速測卡分別滴加3～4滴（100～120μL）于加樣孔中，加樣在15s～30s內完成。7.2.2反應計時：液體流動時開始計時，反應5min，根據示意圖判定結果。7.3質量控制：每批樣品應同時進行空白和加標質控實驗，驗證方法和速測卡的準確性，降低假陰性和假陽性出現的概率。空白樣品應經參比方法檢測且未檢出待測的農藥。8結果判定8.1判定原則采用目視法對結果進行判讀，通過對比控制線（C線）和檢測線（T線）的顏色深淺進行結果判定。目視判定示意圖如圖1所示。有條件時也可使用膠體金讀數儀判讀，讀數儀的具體操作與判讀原則參照讀數儀的使用說明書。6T/SVEFA02011-2024陰性T線顯色比C線顯色深或顯色一致，均表明樣品中不含待測農藥或其殘留低于方法檢出限。陽性T線顯色比C線顯色淺或T線不顯色，均表明樣品中待測農藥殘留等于或高于方法檢出限。無效：未出現C線，表明不正確的操作過程或速測卡已失效。8.2質量控制要求空白試驗測定結果應為陰性，加標質控試驗測定結果應為陽性。否則表示不滿足質控試驗要求，此批樣品結果無效。9性能指標9.1檢出限速測卡對啶蟲脒等7種農藥的檢出限見表1。表1啶蟲脒等7種農藥的檢出限農藥名稱檢出限（mg/kg）農藥名稱檢出限（mg/kg）農藥名稱檢出限（mg/kg）啶蟲脒0.05吡蟲啉0.05噻蟲嗪0.01多菌靈0.5烯酰嗎啉1百菌清0.1氯蟲苯甲酰胺19.2特異性：≥95%。9.3靈敏度：≥95%。7T/SVEFA02011-20249.4假陰性率：≤5%。9.5假陽性率：≤5%。（注：性能指標計算方法參見附錄A2快速檢測方法性能指標計算表。）8T/SVEFA02011-2024資料性附錄附錄A1.參考物質中文名稱、英文名稱、CAS號、分子式、相對分子質量1C9H10ClN5O22AcetamipridC10H11ClN43C8H10ClN5O3S4C9H9N3O25C8Cl4N26C21H22ClNO47C18H14BrCl2N5O2定性方法各個性能指標計算方法見表A2。表A2.定性方法性能指標計算表樣品情況a檢測結果b總數N11N12N1.=N11+N12N21N22N2.=N21+N22總數N.1=N11+N21N.2=N12+N22N=N1.+N2.或N.1+N.2顯著性差異(χ2）χ2=（|N12-N21|-1）2/（N12+N21自由度（df）=1靈敏度（p+，%）p+=N11/N1.特異性（p-，%）p-=N22/N2.假陰性率（pf-，%）pf-=N12/N1.=100-靈敏度假陽性率（pf+，%）pf+=N21/N2