MRM目標小分子定量華大采用世界先進的MRM質譜平臺QTRAP5500系統，可同時快速、精確測定樣本中多種目標小分子的含量。1.應用臨床研究一一大量血樣尿樣中多種生物分子指標測定，適于biomarker篩選，致病機理研究藥代動力學研究——定量測定臨床人體血漿樣本/臨床前實驗動物血液樣本中藥物及其代謝產物濃度檢驗檢疫——大量樣本中待測分子的流水線式檢測生物小分子定量分析——動植物，人類樣本中多種感興趣分子(及蛋白)的同時測定2.技術優勢靈敏度高：通過兩級離子選擇，排除大量干擾離子，使質譜的化學背景降低，目標檢測物的信噪比顯著提高，從而實現檢測的高靈敏度；低至amol。重現性好：質譜信號重現性差在一定程度上是因為復雜生物樣本基體和共流出組分對待測分子離子化、質譜信號的抑制及源內碰撞碎裂過程的影響導致，而在MRM技術質譜信號采集中，后兩者的影響被大大降低，因此重現性也相應提高；準確度高：利用MRM技術的特異性，進行連續增強的離子掃描分析(EPI),得到高分辨的串聯質譜(MS/MS)碎片數據，與全掃描和中性丟失質譜掃描模式相比降低了分析過程中定性結果的假陽性率，保證了分析的準確度；通量高：MRM技術每個工作循環能處理多達300對母離子-子離子對。特異性高：利用SelexION技術(離子淌度差分質譜分離技術)，可為高靈敏度的定量與定性分析提供更多一維的選擇性，適合分離同分異構體、色譜分離流出雜質以及消除高背景噪音的多種應用。3.原理MRM技術基于三重四級桿質譜原理，通過第一重四級桿(Quadrupole,Q1)檢測到具有特異性的母離子，然后第二重四級桿(Q2)只將選定的特異性母離子進行碰撞誘導(collision-induced)，最后去除其他子離子的干擾，通過第三重四級桿(Q3)對選定的特異子離子進行質譜信號的采集。通過母子離子對的選擇，去除干擾離子，對目標小分子進行定性定量分析。原理圖：>七芒出匸一TimePeptide

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SelectionFra^mcntaxicnFragmentSelection4.技術路線方法建立方法建立成功方法建立方法建立成功5.送樣要求標準品要求：客戶自行提供標準品，請注明所用的溶劑、濃度、體積等信息；建議1-10ug/ml.若不能提供純度大于98%的標準品，需要提供目標分子的有效含量大于10ug的樣品.樣品要求：生物體液（血漿、血清、尿液等）血漿為采用肝素類抗凝劑抗凝后，除去血細胞的液體。血清為血液凝固后的上清液。尿液需新鮮，未作任何處理。樣本均需采集后，立即置入-80°C低溫冷凍保存。每個樣品總體積不低于200卩L,尿液建議5-10mL。組織（植物、動物以及昆蟲等）樣品均需新鮮采集后，立即置入液氮中低溫冷凍保存；每個樣品總重量不低于100mg。微生物樣品必須為經過淬滅，即將微生物迅速用液氮或者有機溶劑（-40°C）滅活，使其代謝瞬間停止，具體操作可進一步溝通。每個樣品在淬滅前樣品總量需保持一致（參考濃度:OD600不低于1.0）。

6.Democase1.25-OHVitaminD檢測IKirff4~kniJ ■■-::!17■--i■■dr二匚丫1怦■嚴i二wp"t6.Democase1.25-OHVitaminD檢測IKirff4~kniJ ■■-::!17■--i■■dr二匚丫1怦■嚴i二wp"t：3q.rr 曲|、匚餡白=、戡、”*曾mr，WTWHtwoU￡O-11CDIW*Ttt-wa-w4NHo-

rnI4?-5?InternalstandardIJ^25-OH-Vitamin6:-沖_^25-OH-VitaminD?川廠9ufl ±1 >jOiTi耐，，han2.44種氨基酸democase需求：檢測44種氨基酸的含量

解決方案分別配制氨基酸標準液(1-10ug/ml)Q1Scan確定母離子并優化質譜的源氣參數ProductIonScan確定子離子以選定好的母離子、子離子組成母子離子對并優化質譜的化合物參數，提高檢測靈敏度將MRM方法轉化為液質聯用方法色譜條件優化樣品上機檢驗XICof+MRM(74pairs):326.100/113.100aDD:Pser_ISfromSample1(20121017_Sindard_Test_03)of20121017_Test_03fWTurboS..7.4e67.0e6Max.8.2e4cps6.5e66.0e65.5e65.0e64.5e64.0e63.5e63.0e62.5e62.0e61.5e61.0e69.389.825.0e500XICof+MRM(74pairs):326.100/113.100aDD:Pser_ISfromSample1(20121017_Sindard_Test_03)of20121017_Test_03fWTurboS..7.4e67.0e6Max.8.2e4cps6.5e66.0e65.5e65.0e64.5e64.0e63.5e63.0e62.5e62.0e61.5e61.0e69.389.825.0e500*0.460.621.00 1.70 2.202.492.963.323.723.854.374.504.81 5.565.98 6.526.91Time,min7.FAQQ1：—個子離子是否會對應多個母離子，如何排除假陽性結果？A1：一個子離子可能對應多個母離子，可以通過MRM的全譜掃描分析出子離子唯一對應的母離子；最好要有相關的數據庫支持，若沒有，可以自行篩選，但是工作量可能較大。Q2：如何選擇母子離子對？A2：—個母離子可能對對應多個子離子，在實驗方法建立過程中，每個目標化合物會提供兩個最佳母子離子對，其中一個用于定性，同時會根據標準品的色譜保留時間排除假陽性結果。Q3：標準曲線如何制作？A3：選取不同濃度的標準品溶液（默認8個），根據標準品濃度和標準品MRM信號響應峰面積擬合直線方程。得到標準曲線。Q4：MRM技術進行質譜時，可以一次監測多少個母子離子對？是只能對一個特定分子監測，還是多個特定分子同時監測？A4：MRM檢測可實現多個目標分子的同時檢測，最大限度節省時間，提高檢測效率，每個工作循環最多能處理300對母子離子對，使用ScheduleMRM可達700對母子離子對。Q5：MRM在做定量方面有哪些優勢？A5：高通量：能實現大規模樣本的定量分析；高靈敏度：定向分析，排除背景噪音干擾；準確度高，重現性好。Q6：華