臨床免疫實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制

黑龍江省臨床檢驗(yàn)中心吳皓瑜

臨床免疫實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制

黑龍江省臨床檢驗(yàn)中心1（一）定義

1質(zhì)量控制(qualitycontrol,QC)質(zhì)量控制(簡稱：質(zhì)控)是監(jiān)視全過程，排除誤差，防止變化，維持標(biāo)準(zhǔn)化現(xiàn)狀的一個(gè)管理過程。這一過程是通過一個(gè)反饋環(huán)路進(jìn)行的。具體內(nèi)容如下：⑴、確定質(zhì)控對象。⑵、規(guī)定控制標(biāo)準(zhǔn)（預(yù)定期）。⑶、選擇和確定控制方法。⑷、依規(guī)定標(biāo)準(zhǔn)和方法測量實(shí)際數(shù)據(jù)。（一）定義2⑸、比較實(shí)際數(shù)據(jù)與預(yù)期值之間的差異，并說明產(chǎn)生這一差異的原因。超出預(yù)定誤差范圍，報(bào)警系統(tǒng)發(fā)出信號，反饋通道中斷。⑹采取行動，解決差異?；謴?fù)原狀（原標(biāo)準(zhǔn)狀態(tài)）的手段發(fā)揮作用。⑸、比較實(shí)際數(shù)據(jù)與預(yù)期值之間的差異，并說明產(chǎn)生這一差異的原因3臨床實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量目標(biāo)：

使檢驗(yàn)結(jié)果更好的符合病人的實(shí)際情況；及時(shí)的發(fā)出檢驗(yàn)報(bào)告，并依據(jù)檢驗(yàn)結(jié)果結(jié)合病人臨床情況主動為臨床診斷提供咨詢。臨床實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量目標(biāo)：4實(shí)驗(yàn)室的工作人員把其描述為：準(zhǔn)確、可靠、臨床適用性好。醫(yī)生將其定義為：實(shí)驗(yàn)時(shí)間短、臨床應(yīng)用價(jià)值大、隨時(shí)能得到實(shí)驗(yàn)室的咨詢意見。醫(yī)院院長：成本-效益好，臨床醫(yī)生滿意。病人或被檢查者將其定義為：快速、準(zhǔn)確、便宜、有價(jià)值。實(shí)驗(yàn)室的工作人員把其描述為：準(zhǔn)確、可靠、臨床適用性好。5（二）室內(nèi)質(zhì)量控制（簡稱室內(nèi)質(zhì)控）

是由實(shí)驗(yàn)室的工作人員采用一系列的方法，連續(xù)的評價(jià)本實(shí)驗(yàn)室的工作的可靠程度，確立報(bào)能否發(fā)出。旨在檢測、控制本室常規(guī)工作的精密度，并檢測其準(zhǔn)確度的改變，提高本室常規(guī)工作中的批間、批內(nèi)標(biāo)本檢測的一致性。（二）室內(nèi)質(zhì)量控制（簡稱室內(nèi)質(zhì)控）

是由實(shí)驗(yàn)室的工作61、開展室內(nèi)質(zhì)量控制前的準(zhǔn)備工作

在開展室內(nèi)質(zhì)量控制前每個(gè)實(shí)驗(yàn)室工作人員都應(yīng)對質(zhì)控的重要性、基礎(chǔ)知識、一般方法學(xué)有較充分的了解，并在質(zhì)控的實(shí)際工作中不斷進(jìn)行培訓(xùn)和提高，在實(shí)際工作中培養(yǎng)一些質(zhì)控工作的技術(shù)骨干。1）、培訓(xùn)實(shí)驗(yàn)室工作人員1、開展室內(nèi)質(zhì)量控制前的準(zhǔn)備工作

在開展室內(nèi)質(zhì)量控7●人員培訓(xùn)

實(shí)驗(yàn)是人操作的，因此檢驗(yàn)人員需經(jīng)過培訓(xùn)，熟練掌握本專業(yè)如下幾方面的技術(shù)知識：

◎檢驗(yàn)項(xiàng)目的基本原理

（ELISA原理）；

◎臨床意義；

◎熟悉檢測技巧，了解易出差錯(cuò)的環(huán)節(jié)及難點(diǎn)；

◎熟悉檢測試劑性能（包括試劑盒組成，包被片段及其組成）；

●人員培訓(xùn)

實(shí)驗(yàn)是人操作的，因此檢驗(yàn)人員需經(jīng)過培訓(xùn)，熟練8◎熟悉檢測儀器的原理及性能；掌握數(shù)據(jù)處理的能力和質(zhì)量控制知識。

◎某些特殊項(xiàng)目的檢測如抗HIV等需經(jīng)有關(guān)部門組織的專門培訓(xùn)班，考試合格后持證上崗。

◎熟悉檢測儀器的原理及性能；掌握數(shù)據(jù)處理的能力和質(zhì)量控制知92）、建立標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程實(shí)施質(zhì)控需要有一套完整的標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程做保障。例如儀器的使用、維護(hù)操作規(guī)程，試劑、質(zhì)控品、校準(zhǔn)品等的使用操作規(guī)程。所有臨床實(shí)驗(yàn)室都應(yīng)建立一套完整的標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程。2）、建立標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程103）、儀器的檢定校準(zhǔn)為使儀器保持最佳工作狀態(tài)應(yīng)建立維護(hù)和校正儀器的標(biāo)準(zhǔn)操作程序（SOP），所要控制的儀器包括移液器（加樣槍），水浴箱（溫箱）,洗板機(jī),酶標(biāo)儀?！蛞埔浩鳎篍LISA加樣量小（5-100ｕl），其準(zhǔn)確性直接影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果，利用稱重法檢查：吸取刻度指示量的水，萬分之一天平稱重后計(jì)算吸量是否準(zhǔn)確,一般應(yīng)在+-10%以內(nèi)。3）、儀器的檢定校準(zhǔn)11◎水浴箱

經(jīng)常檢查水浴箱溫度計(jì)所示的溫度和水中（或溫箱內(nèi)）實(shí)測溫度是否一致，允許有±1℃的誤差；

◎洗板機(jī)

每個(gè)廠家設(shè)置洗板后的殘留液有各自的規(guī)定一般不超過2ul，人工扣板時(shí)，墊紙不濕，定期檢查管孔是否堵塞；

◎酶標(biāo)儀

經(jīng)常維護(hù)其光學(xué)部分，防止濾光片霉變，定期檢測校正，使其保持良好的工作性能。◎水浴箱

經(jīng)常檢查水浴箱溫度計(jì)所示的溫度和水中（或溫箱內(nèi)122、質(zhì)控物定值的選擇

室內(nèi)質(zhì)控質(zhì)控點(diǎn)的選擇，以需要設(shè)置質(zhì)控的點(diǎn)，設(shè)置質(zhì)控物進(jìn)行質(zhì)控為原則。病毒性肝炎酶免檢驗(yàn)中，有高值、中值、低值、及陰性值的質(zhì)控物，我們認(rèn)為其中以低值的質(zhì)控物為最重要，設(shè)置臨界于cut-off值（CO值）的低值弱陽性質(zhì)控物是室內(nèi)質(zhì)控的關(guān)鍵。重點(diǎn)抓住低值弱陽性—臨界值血清的室內(nèi)質(zhì)控監(jiān)測，是室內(nèi)質(zhì)控精密度觀測的最敏感的窗口，也是提示試驗(yàn)成功與否的最重要的標(biāo)志。

2、質(zhì)控物定值的選擇

室內(nèi)質(zhì)控質(zhì)控點(diǎn)的選擇，以需要設(shè)置質(zhì)控的131）質(zhì)控血清的作用1、靈敏度控制；用臨界值血清，檢測試劑盒靈敏度是否達(dá)到要求。2、精密度控制3、是試驗(yàn)是否成功的重要標(biāo)志。1）質(zhì)控血清的作用1、靈敏度控制；143室內(nèi)質(zhì)控的步驟

1）、計(jì)算平均值、標(biāo)準(zhǔn)差、變異系數(shù) 在開展室內(nèi)質(zhì)控時(shí)，首先對同一批質(zhì)控血清連續(xù)進(jìn)行測定20-30次，將測得的結(jié)果計(jì)算獲得一組數(shù)據(jù)，求出平均值、標(biāo)準(zhǔn)差、變異系數(shù)。2）、質(zhì)控限的設(shè)定：質(zhì)控限通常是以標(biāo)準(zhǔn)差的倍數(shù)表示。3室內(nèi)質(zhì)控的步驟

1）、計(jì)算平均值、標(biāo)準(zhǔn)差、變異系數(shù)15HBsAg–ELISA檢驗(yàn)數(shù)據(jù)計(jì)算示例表1

質(zhì)控血清陰性對照cot-off值s/co值次數(shù)A值A(chǔ)值陰性A值×2.110.1800.0500.1051.7120.1900.0500.1051.8130.2000.0500.1051.9040.2880.0600.1261.8150.1370.0600.1262.2960.2210.0500.1052.1070.1500.0500.1051.4380.1700.0500.1051.6290.1800.0400.0842.14100.1500.0500.1051.43110.2000.0500.1051.90

HBsAg–ELISA檢驗(yàn)數(shù)據(jù)計(jì)算示例16計(jì)算20個(gè)質(zhì)控血清S/CO值的均值,標(biāo)準(zhǔn)差和變異系數(shù)。

=1.72S=0.29CV=16.9%計(jì)算20個(gè)質(zhì)控血清S/CO值的均值,標(biāo)準(zhǔn)差和變異系數(shù)。

17+3s+2s+1sX1.72-1s-2s-3s

LeveY—Jennings質(zhì)控圖

圖1

+3s+2s+1sX1.72-1s-2s-3s184、室內(nèi)質(zhì)控圖的繪制

目前，臨床免疫學(xué)檢驗(yàn)多采用Levey-Jennings質(zhì)控圖。以20份質(zhì)控品的檢測結(jié)果，計(jì)算平均值（x）和標(biāo)準(zhǔn)差（S），定出質(zhì)控限。一般以±2S為警告限，以±3S為失控限，作質(zhì)控框架圖。每次（或每天）隨病人樣本測定的質(zhì)控品值，將原始質(zhì)控結(jié)果記錄標(biāo)記在質(zhì)控圖表上。保留打印原始質(zhì)控記錄4、室內(nèi)質(zhì)控圖的繪制

目前，臨床免疫學(xué)檢驗(yàn)多采用Levey-195、質(zhì)控規(guī)則的應(yīng)用

將設(shè)計(jì)的質(zhì)控規(guī)則應(yīng)用于質(zhì)控?cái)?shù)據(jù)，判斷分析批每一次檢測是在控的還是失控的。一般以±2S

為警告限，以±3S為失控限，分析質(zhì)控圖中每天檢測質(zhì)控品結(jié)果的分布，判斷當(dāng)天檢測的樣本是否在控制限之內(nèi)。若當(dāng)天質(zhì)控物檢測結(jié)果失控，則當(dāng)天病人樣本的測定結(jié)果報(bào)告不能發(fā)出。當(dāng)以±3S為失控限時(shí)，

5、質(zhì)控規(guī)則的應(yīng)用

將設(shè)計(jì)的質(zhì)控規(guī)則應(yīng)用于質(zhì)控?cái)?shù)據(jù)，20每100次約有一次判為失控（99%的合格率）。顯然，這個(gè)標(biāo)準(zhǔn)太低，使許多失控狀態(tài)判為合格。當(dāng)以±2S為失控限時(shí)，每20次約有一次失控（95%的合格率），這個(gè)標(biāo)準(zhǔn)可以接受。當(dāng)我們以±1.5S為失控限時(shí)，就將2/10的結(jié)果設(shè)定為失控（即約80%的合格率），顯然提高了質(zhì)控的難度，使操作者需要更用心操作，否則易處失控狀態(tài)。我們建議臨床實(shí)驗(yàn)室采用±2S為失控限。血站±1.5S為失控限。每100次約有一次判為失控（99%的合格率）。顯然，這個(gè)216、Westgard多規(guī)則

質(zhì)控方法在質(zhì)控圖中單純依據(jù)質(zhì)控點(diǎn)超出2S為警告，超出3S為失控，在臨床檢驗(yàn)中以顯不夠。Wesegard將常用的判斷失控的規(guī)則總結(jié)出許多條規(guī)則.6、Westgard多規(guī)則

質(zhì)控方法在質(zhì)控圖中單純依據(jù)質(zhì)控2212S:一個(gè)質(zhì)控測定值超過均值±2S質(zhì)控限，違背次規(guī)則，提示警告。13S:一個(gè)質(zhì)控測定值超過均值±3S,違背此規(guī)則，提示存在隨機(jī)誤差。22S:2個(gè)連續(xù)的質(zhì)控測定值同時(shí)超均值+2S或均值-2S質(zhì)控限。違背此規(guī)則，提示存在系統(tǒng)誤差。12S:一個(gè)質(zhì)控測定值超過均值±2S質(zhì)控限，違背23R4S:在同一

批內(nèi)高值質(zhì)控測定值與低值質(zhì)控測定值兩個(gè)質(zhì)控結(jié)果之差超過4S，違背此規(guī)則，提示存在隨機(jī)誤差。31S:3個(gè)連續(xù)的質(zhì)控測定值同時(shí)超過+1S或-1S質(zhì)控限。違背次規(guī)則，提示存在系統(tǒng)誤差。

R4S:在同一批內(nèi)高值質(zhì)控測定值與低值質(zhì)控測定值兩2441S:連續(xù)4個(gè)質(zhì)控點(diǎn)落在同一側(cè)±1S之外。違背此規(guī)則，提示存在系統(tǒng)誤差。7↑/↓：連續(xù)7個(gè)質(zhì)控點(diǎn)呈連續(xù)上升或下降；或周期性波動變化。10X:是個(gè)連續(xù)的質(zhì)控結(jié)果在平均數(shù)一側(cè)，違背此規(guī)則，提示存在系統(tǒng)誤差。 41S:連續(xù)4個(gè)質(zhì)控點(diǎn)落在同一側(cè)±1S之外。違背此規(guī)則，25+3s+2s+1sX

-1s-2s21s違背規(guī)則-3s31s違背規(guī)則+3s+2s+1sX-1s-2s21s違背-3s26+3s+2s+1sX-1s-2s-3s22s違背規(guī)則R4s+3s+2s+1sX-1s-2s-3s22s違背R4s27我們利用Westgard規(guī)則,引入免疫學(xué)檢驗(yàn)中,建議以下幾種情況判為失控.

112s1質(zhì)控測定值超過±2S之外.2R4S

連續(xù)2個(gè)質(zhì)控點(diǎn)相差超過4S范圍.341S連續(xù)4個(gè)質(zhì)控點(diǎn)落在同一側(cè)±1S之外47X

連續(xù)7個(gè)質(zhì)控點(diǎn)落在同一側(cè)。57↑/↓連續(xù)7個(gè)質(zhì)控點(diǎn)呈連續(xù)上升或下降；或周期性波動變化。

我們利用Westgard規(guī)則,引入免疫學(xué)檢驗(yàn)中,建議以下幾種287、統(tǒng)計(jì)學(xué)計(jì)算方法——“即刻法”質(zhì)控

ELISA有其特殊性，最合適的質(zhì)控方法尚待研究建立。有些實(shí)驗(yàn)室不是每天進(jìn)行ELISA項(xiàng)目的檢驗(yàn)，而ELISA試劑盒效期短，用同一批號試劑盒連續(xù)常規(guī)測２０次，難度較大。采用“即刻法”質(zhì)控統(tǒng)計(jì)方法，只需連續(xù)測３次，即可對第３次檢驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行質(zhì)控。7、統(tǒng)計(jì)學(xué)計(jì)算方法——“即刻法”質(zhì)控ELISA有其特29（１）先將測定值從小到大排列：X1、X2、X3、……Xn（X1為最小值，Xn為最大值）。（２）計(jì)算x和S。

(３）計(jì)算SI上限值和SI下限值，

SI上限＝X最大值―x

均／ＳSI下限＝

x

均―Ｘ最小值

／Ｓ（４）將SI上限、SI下限與SI值表（表2）中的數(shù)字比較。

（１）先將測定值從小到大排列：X1、X2、X3、……Xn30

SI值表表2nn3sn2snn3sn231.151.15122.552.2941.491.46132.612.3351.751.67142.662.3761.941.82152.712.4172.101.94162.752.4482.222.03172.792.4792.322.11182.822.50102.412.18192.852.53112.482.23202.882.56

SI值表31當(dāng)SI上限值和SI下限值<n2s時(shí)，表示處于控制范圍內(nèi)，可以繼續(xù)往下測定，繼續(xù)重復(fù)以上各項(xiàng)計(jì)算；當(dāng)SI上限和SI下限有一值處于n2s和n3s值之間時(shí)，說明該值在2s～3s范圍，處于“告警”狀態(tài)；當(dāng)SI上限和SI下限有一值>n3s值時(shí)，說明該值已在3s范圍之外，屬“失控”。數(shù)值處于“告警”和“失控”狀態(tài)應(yīng)舍去，重新測定該項(xiàng)質(zhì)控血清和病人樣本。舍去的只是失控的這次數(shù)值，其它次測定值仍可繼續(xù)使用。當(dāng)SI上限值和SI下限值<n2s時(shí)，表示處于控制范圍3220次質(zhì)控血清檢測S/CO值次數(shù)s/co次數(shù)s/co11.71121.3521.81132.0031.90141.5241.81151.7151.09161.8162.10171.5271.43182.1081.62192.0092.14201.43101.43211.52111.9020次質(zhì)控血清檢測S/CO值133在第3次測后，按“即刻法”計(jì)算公式n=3,S/CO值從小到大排列為：1.711.811.90SI上限=X最大值-X均值/S

SI下限

=X均值-X最小值/S

x均=1.81，S=0.10

計(jì)算：SI上限=1.90–1.81/0.1=0.9SI下限=1.81–1.71/0.1=1.0在第3次測后，按“即刻法”計(jì)算公式SI下限=1.834查SI值表：n=3時(shí)，n2s=1.15，n3s=1.15,SI上限、SI下限均小于n2s、n3s，因此該三次檢驗(yàn)數(shù)據(jù)在控制范圍內(nèi)。在第4次測定后，按上法計(jì)算：n=41.711.811.811.90

x均=1.81S=0.08SI上限=1.90―1.81/0.08=1.13SI下限=1.81―1.71/0.08=1.25

查SI值表：n=4時(shí)，n2s=1.46，n3s=1.49。SI上限、SI下限均小于n2、n3s,數(shù)據(jù)在控制范圍內(nèi)。

查SI值表：n=3時(shí)，n2s=1.15，n3s35

在第5次測定后，按上法計(jì)算：

n=51.091.711.811.811.90

x均=1.66，S=0.33SI上限=1.90―1.66/0.33=0.73SI下限=1.66―1.09/0.33=1.73查SI值表；n=5時(shí)，n2s=1.67，n3s=1.75n2s（1.67）<SI下限（1.73）<n3s（1.75）。SI下限值在n2s和n3s之間,說明該值在2s～3s范圍，同時(shí)表示該資料是在下限（-2s）之外，處于“告警”狀態(tài)，本次數(shù)據(jù)棄去。在第5次測定后，按上法計(jì)算：36第6次檢測，n仍為5進(jìn)行計(jì)算：

n=5，1.711.811.811.902.1

x均=1.87S=0.15SI上限=2.10―1.87/0.15=1.53SI下限=1.87―1.71/0.15=1.07查SI值表：n2s=1.67，n3s=1.75。SI上限、SI下限均小于n2s、n3s,數(shù)據(jù)在控制范圍內(nèi)，繼續(xù)檢測并計(jì)算。第6次檢測，n仍為5進(jìn)行計(jì)算：37

當(dāng)測定達(dá)到21次時(shí)，因舍去一個(gè)數(shù)據(jù)（第5個(gè)），n=20，排序如下：1.351.431.431.431.521.521.621.711.711.81

1.811.811.901.901.902.002.002.102.102.14

x均=1.76S=0.25SI上限=2.14―1.76/0.25=1.5

SI下限=1.76–1.35/0.25=1.64

當(dāng)測定達(dá)到21次時(shí)，因舍去一個(gè)數(shù)據(jù)（第5個(gè)），n=2038

查SI值表：n2s=2.56,n3s=2.88.SI上限、SI下限均小于n2s、n3s數(shù)據(jù)在控制范圍內(nèi).用20次數(shù)據(jù)的均值和S值（x均=

1.76S=0.25）做質(zhì)控框架圖。以后的檢測數(shù)據(jù)不再計(jì)算，轉(zhuǎn)入質(zhì)控圖。從以上實(shí)例可看出，通過“即刻法”統(tǒng)計(jì)計(jì)算的均值和S值與前面介紹的測20次獲得均值和S是十分接近的。即刻法質(zhì)控的統(tǒng)計(jì)方法，適于免疫學(xué)測定的質(zhì)控。查SI值表：n2s=2.56,n3s=2.39當(dāng)檢測的數(shù)值超20次以后，不必再使用“即刻法”質(zhì)控統(tǒng)計(jì)計(jì)算，可以轉(zhuǎn)入常規(guī)的質(zhì)控圖的質(zhì)控，將前20次的數(shù)值求出的均值和S值作質(zhì)控框架圖，第21次的數(shù)值，依次點(diǎn)入即可。當(dāng)檢測的數(shù)值超20次以后，不必再使用“即刻法”質(zhì)控統(tǒng)計(jì)40(三)ELISA檢驗(yàn)中各種變異的控制

1、孔間差變異的控制

ELISA檢驗(yàn)孔與孔間的差異的調(diào)查，可以在同一塊板上，獲取同一份質(zhì)控血清至少十孔平行試驗(yàn)的S/CO值的均值和標(biāo)準(zhǔn)差。

質(zhì)控血清HBsAglng/ml做孔間變異A值檢測,結(jié)果如下:0.125，0.1031.103,0.098，0.092,0.099，0.098,0.106，0.098，0.092(三)ELISA檢驗(yàn)中各種變異的控制

1、孔間差變異的控制41x均=0.101S=0.01CV=9.3%通過孔間的變異調(diào)查，可以了解不同試劑、不同批號、不同操作者的差異，以便于選擇、改進(jìn)。了解孔間的變異，就可以了解每個(gè)樣品測定值的可能變動范圍，對于判定處于CO值上下的樣品的結(jié)果是十分有用的。x均=0.101S=0.01422、批內(nèi)變異（板間差異）與批間變異的控制有的實(shí)驗(yàn)室每天需測試數(shù)百人的血清樣品，使用數(shù)塊微孔板，或數(shù)拾塊微孔板。在這里就存在同一天檢測數(shù)塊板之間的變異（批內(nèi)變異），和不同天檢測之間的變異（批間變異）的問題。有的單位將每天檢測的每一塊板的質(zhì)控?cái)?shù)值，連續(xù)在質(zhì)控圖中描記出來，不考慮不同天之間變異的影響。這種作法，只有當(dāng)證實(shí)該實(shí)驗(yàn)室批內(nèi)變異十分小，且批內(nèi)變異與批間變異十分接近的前題條件下，才可以這么做。

2、批內(nèi)變異（板間差異）與批間變異的控制有的實(shí)驗(yàn)室43有的實(shí)驗(yàn)室，不考慮批內(nèi)變異，只將每天檢測的“第一塊”板的質(zhì)控?cái)?shù)值描記在質(zhì)控圖中，這樣使該室質(zhì)檢圖可以做得十分漂亮，但細(xì)查一下每塊板的質(zhì)檢結(jié)果，就會發(fā)現(xiàn)差異變化極大。這樣的質(zhì)控，不能對每塊板進(jìn)行質(zhì)控（批內(nèi)變異）,失去意義。如何進(jìn)行免疫實(shí)驗(yàn)室室內(nèi)質(zhì)控的批內(nèi)、批間變異的控制，我們借用某一實(shí)驗(yàn)室開展室內(nèi)質(zhì)控初始的實(shí)際數(shù)據(jù)計(jì)算一下。該室室內(nèi)質(zhì)控初始階段資料變異很大，6個(gè)月后才趨于穩(wěn)定水平。從這也說明實(shí)驗(yàn)室開展室內(nèi)質(zhì)控的必要性。該實(shí)驗(yàn)室室內(nèi)質(zhì)控資料見表4有的實(shí)驗(yàn)室，不考慮批內(nèi)變異，只將每天檢測的“第一塊”板44

某實(shí)驗(yàn)室室內(nèi)質(zhì)控資料表（S/CO值）質(zhì)控血清：HBsAglng/ml

日期序號S/CO

12.241.321.3923.391.522.013.953.088.001.712.971.5833.253.953.022.2342.073.042.132.131.983.162.5152.503.002.204.011.949.8362.703.462.38

2.422.7173.373.794.262.742.912.5883.063.978.629.224.063.4594.654.968.916.408.62107.304.137.683.02112.383.202.653.57121.901.723.383.612.882.663.02

132.632.633.198.911412.864.45.209.736.686.78154.854.884.514.952.182.641610.506.906.108.59

某實(shí)驗(yàn)室室內(nèi)質(zhì)控資料表（S/CO值）45取表4中連續(xù)20天的每天最大值（X大）和最小值（X?。┝斜?，并計(jì)算其值差（X差），求20天值差的均值和標(biāo)準(zhǔn)差，此為批內(nèi)變異（以x均

內(nèi)S

內(nèi)表示

);以取每天數(shù)值的均值,求20天均值的均值和標(biāo)準(zhǔn)差，此為批間變異(以x均

間S

間表示

）,見表5取表4中連續(xù)20天的每天最大值（X大）和最小值（X小46

某實(shí)驗(yàn)室室內(nèi)質(zhì)控批內(nèi)、批間數(shù)值表（S/CO值）

質(zhì)控血清：HBsAglng/ml

表5第n天最小值最大值值差均差第n天最小值最大值值差均差

（X?。╔大）(X差)X（X小）（X大）(X差)X

11.322.240.921.65112.383.571.192.9521.528.006.483.02121.723.812.092.7732.333.951.723.11132.636.914.284.3441.983.161.182.43144.4012.868.467.6151.949.837.893.91152.184.952.774.0062.423.461.042.73166.1010.854.408.0272.584.261.683.28172.898.805.976.3383.069.226.165.40183.279.676.306.1794.658.914.266.17193.706.202.505.13103.027.684.665.53202.809.406.605.36

某實(shí)驗(yàn)室室內(nèi)質(zhì)控批內(nèi)、批間數(shù)值表（S/CO值）47通過表5，計(jì)算值差項(xiàng)得出：均值

內(nèi)=4.11S

內(nèi)=2.52計(jì)算均值項(xiàng)得出：均值間=4.52S

間=1.83表5中均值

內(nèi)4.11和S

內(nèi)2.52為批內(nèi)變異，均值間4.52和S

間1.83為批間變異。從該數(shù)據(jù)反映出該室批內(nèi)變異S內(nèi)2.52，大于批間變異1.83。依人們固有思想，一般認(rèn)為批間變異往往大于批內(nèi)變異，而事實(shí)往往不一定。因此提示人們應(yīng)重視精密度檢測水平。通過表5，計(jì)算值差項(xiàng)得出：均值內(nèi)=4.11S內(nèi)48利用表5中X內(nèi)和S內(nèi)做室內(nèi)批內(nèi)變異質(zhì)控框架圖，將X大和X小描記上，并連成線段，觀察批內(nèi)變異十分直觀。實(shí)際應(yīng)將第21次以后的X大和X小線段描記上，在這里，僅利用表5的數(shù)據(jù)進(jìn)行范列描記，見圖9。利用表5中X內(nèi)和S內(nèi)做室內(nèi)批內(nèi)變異質(zhì)控框架圖，將X大49圖9某實(shí)驗(yàn)室批內(nèi)變異質(zhì)控圖圖9某實(shí)驗(yàn)室批內(nèi)變異質(zhì)控圖50

從圖9中可以看到，線段長短不等。線段越長，反映精密度越差；線段長的越多，反映這一階段精密度總體情況不好。線段上上下下不平衡地分布在X軸線的上下兩側(cè)，反映出批內(nèi)變異的偏離也很大。從圖9中可以看到，線段長短不等。線段越長，反映51利用表5中X間和S間做室內(nèi)批間變異質(zhì)控框架圖，并將第21次以后的均值依次描記上。在這里，僅利用表5中的均值數(shù)據(jù)X進(jìn)行范例描記。見圖10利用表5中X間和S間做室內(nèi)批間變異質(zhì)控框架圖，并將第52

圖10某實(shí)驗(yàn)室批間變異質(zhì)控圖

圖10某實(shí)驗(yàn)53

從圖10中可以看到，前7次數(shù)值偏于X軸的下方。第21次到29次，數(shù)值呈明顯上升趨勢，反映出這一段檢測處于系統(tǒng)誤差之中，應(yīng)查找原因。從圖10中可以看到，前7次數(shù)值偏于X軸的下方。54(四)失控情況處理及原因分析

1、失控情況處理操作者如發(fā)現(xiàn)質(zhì)控?cái)?shù)據(jù)違背了控制規(guī)則，應(yīng)填寫失控報(bào)告單，上交專業(yè)主管（組長），由專業(yè)主管（組長），作出是否發(fā)出標(biāo)本檢驗(yàn)報(bào)告單。

2、失控原因分析失控信號的出現(xiàn)受多種因素的影響，這些因素操作上的失誤、試劑、質(zhì)控品的失效，儀器維護(hù)不良以及采用的質(zhì)控規(guī)則、控制限范圍、一次測定的標(biāo)本數(shù)等等。(四)失控情況處理及原因分析

1、失控情況處理55失控信號一旦出現(xiàn)就意味著與測定質(zhì)控品相關(guān)的那批病人標(biāo)本報(bào)告可能作廢。此時(shí)，首先要盡量查明導(dǎo)致失控的原因，如果為假失控常規(guī)測定報(bào)告可按原先測定結(jié)果發(fā)出，如果為真失控，應(yīng)在糾正失控原因后，全部標(biāo)本重做，質(zhì)控品測定合格后再簽字發(fā)出報(bào)告。當(dāng)出現(xiàn)失控信號時(shí)，可采用下述步驟尋找原因：失控信號一旦出現(xiàn)就意味著與測定質(zhì)控品相關(guān)的那批病人標(biāo)本報(bào)告可561）、重新測定同一質(zhì)控品，用以查明是否有人為誤差或偶然誤差，如重側(cè)的結(jié)果在允許范圍內(nèi)（在控）即為偶然誤差。如重側(cè)的結(jié)果仍不在允許范圍，應(yīng)進(jìn)行下步操作。2）、新開一瓶質(zhì)控品，重測定失控項(xiàng)目。如果結(jié)果正常，說明原來那瓶質(zhì)控血清可能變質(zhì)，如果仍然不在允許范圍，則進(jìn)行下一步。

1）、重新測定同一質(zhì)控品，用以查明是否有人為誤差或偶然誤差，574）、進(jìn)行儀器維護(hù)，重側(cè)失控項(xiàng)目。檢查光源是否需更換，濾光片是否在正常位置。如果仍然不在允許范圍，則進(jìn)行下一步。3）、檢查試劑，此時(shí)可更換試劑以查明原因，如不是試劑的問題，則進(jìn)行下一步。4）、進(jìn)行儀器維護(hù)，重側(cè)失控項(xiàng)目。檢查光源是否需更換，濾光片58（六）免疫實(shí)驗(yàn)室室內(nèi)質(zhì)控重點(diǎn)

免疫學(xué)檢驗(yàn)的特點(diǎn)是靈敏度高，其檢測的靈敏度高與生化檢測的106倍。因此，微小的檢測數(shù)值的變異，會造成很大的S和CV值的變異。國際上尚未有對免疫學(xué)檢驗(yàn)室內(nèi)質(zhì)控給出明確規(guī)定、標(biāo)準(zhǔn)和方法，均處于借鑒生化的原則、方法開展免疫學(xué)檢驗(yàn)室內(nèi)質(zhì)控階段。（六）免疫實(shí)驗(yàn)室室內(nèi)質(zhì)控重點(diǎn)

免疫學(xué)檢驗(yàn)的特點(diǎn)是靈敏度591、試驗(yàn)首先應(yīng)成立，滿足試劑盒要求。陰、陽對照結(jié)果符合要求，cut-off值判定公式滿足試劑盒要求。該試驗(yàn)結(jié)果可以發(fā)出報(bào)告。2、每一批次操作時(shí)，應(yīng)含有一個(gè)陽性和陰性質(zhì)控品，用已知靶值物質(zhì)作為質(zhì)控品。3、質(zhì)控品必須按患者標(biāo)本那樣進(jìn)行檢測。4、只有觀察到預(yù)先設(shè)立的質(zhì)控品反應(yīng)模式時(shí)，實(shí)驗(yàn)室才能發(fā)出檢驗(yàn)結(jié)果。1、試驗(yàn)首先應(yīng)成立，滿足試劑盒要求。陰、陽對照結(jié)果符合要求，60試劑盒的質(zhì)量評價(jià)

（一）質(zhì)量評價(jià)要點(diǎn)

從臨床應(yīng)用角度考核檢驗(yàn)試劑的可靠性，是以其能否區(qū)分健康與疾病的能力作為依據(jù)的。判斷檢驗(yàn)結(jié)果的正確性和可靠性主要依賴于對標(biāo)準(zhǔn)品的測定，并對測定結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)計(jì)算評估的。試劑盒的質(zhì)量評價(jià)

（一）質(zhì)量評價(jià)要點(diǎn)611靈敏度:1)為試劑檢出被檢物質(zhì)的最低量的能力;2)為試劑對人群或大量樣品中陽性檢出的能力（假陰性越少越好），取決于包被物的全面性。2特異性:指試劑正確檢定不存在的被檢物質(zhì)的能力（無假陽性），取決于包被抗原（體）及標(biāo)記抗原（體）的純度及特異性。

臨床免疫實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制課件624穩(wěn)定性：試劑在規(guī)定條件下能儲存的時(shí)間，一般采用破壞性試驗(yàn)即將試劑存放于37℃保存，定期測定其靈敏度，特異性和精密度等指標(biāo)，直到其質(zhì)量指標(biāo)開始下降為止，通常認(rèn)為37℃每穩(wěn)定一天相當(dāng)于4-10℃保存一個(gè)半月。

3精密度：ELISA試劑一般指其批內(nèi)CV，其值應(yīng)小于15%；定量試劑應(yīng)同時(shí)考察線性范圍

4穩(wěn)定性：試劑在規(guī)定條件下能儲存的時(shí)間，一般采用破壞性試驗(yàn)即635參考室間質(zhì)評評價(jià)報(bào)告中對試劑的評價(jià)結(jié)果:這比較客觀公正，因?yàn)榻y(tǒng)計(jì)數(shù)字均來自各參評醫(yī)院，反映了試劑在某一地區(qū)的使用情況；

6根據(jù)權(quán)威部門發(fā)布的試劑評價(jià)結(jié)果，了解市場上試劑的質(zhì)量優(yōu)劣。5參考室間質(zhì)評評價(jià)報(bào)告中對試劑的評價(jià)結(jié)果:這比較客觀公正，因64評價(jià)試劑的各項(xiàng)性能指標(biāo)按以下公式計(jì)算靈敏度（%）=真陽性

×100%特異性（%）=真陰性×100%符合率（%）=真陽性+真陰性

真陽性+假陰性

假陽性+真陰性

真陽性+假陽性+真陰性+假陰性×100%評價(jià)試劑的各項(xiàng)性能指標(biāo)按以下公式計(jì)算真陽性+假陰性651、靈敏度就是患者真陽性結(jié)果的百分率。理想的檢驗(yàn)結(jié)果應(yīng)當(dāng)是假陰性為零，敏感性為100%。敏感性與假陰性是互補(bǔ)的，敏感性好，假陰性就少，相反敏感性差，假陰性就高。假陰性率在臨床檢驗(yàn)中通常稱為漏診率。一般要求臨床檢驗(yàn)盡量減少假陰性，在血站對獻(xiàn)血員的篩查，就要求漏診率為零。1、靈敏度就是患者真陽性結(jié)果的百分率。662、特異性就是患者真陰性結(jié)果的百分率。理想的檢驗(yàn)結(jié)果應(yīng)當(dāng)是假陽性為零，特異性為100%。特異性與假陽性是互補(bǔ)的，特異性好，假陽性就少，相反特異性差，假陽性就高。假陽性率在臨床檢驗(yàn)中通常稱為誤診率。2、特異性就是患者真陰性結(jié)果的百分率。67符合率是綜合靈敏度和特異性的指標(biāo)在臨床上漏診率和誤診率可評價(jià)檢驗(yàn)試劑是否有診斷價(jià)值，而檢驗(yàn)試劑的靈敏度和特異性是重要指標(biāo)。符合率是綜合靈敏度和特異性的指標(biāo)在臨床上漏診率和誤診率可評價(jià)68

微孔板封閉以生理鹽水代替血清標(biāo)本嚴(yán)格按照試劑盒操作要求分別進(jìn)行。微孔板封閉以生理鹽水代替血清標(biāo)本嚴(yán)格按照試劑盒操作要求分別69干擾試驗(yàn):

以類風(fēng)濕因子陽性血清及抗大腸桿菌陽性血清(經(jīng)確證均不含乙肝標(biāo)志物)為混合待檢標(biāo)本,觀察有無非特異性反應(yīng).

本底檢測:取混合陰性血清標(biāo)本(經(jīng)確證均不含乙肝標(biāo)志物)

干擾試驗(yàn):以類風(fēng)濕因子陽性血清及抗大腸桿菌陽性血清(經(jīng)確證70HbeAb,HBcAb檢測試劑交叉反應(yīng)

以20%小牛血清為檢測標(biāo)本,以酶標(biāo)記抗HBc-HRP代替抗Hbe-HRP,其它條件不變,進(jìn)行抗HBeAb檢測,以酶標(biāo)記抗Hbe-HRP代替抗HBc-HRP其它條件不變,檢測HbcAb.HbeAb,HBcAb檢測試劑交叉反應(yīng)以20%小牛血清為檢71臨床考核血清盤的制備要求

（1）采用人的原血清；（2）血清盤應(yīng)具有相應(yīng)的穩(wěn)定性；（3）血清盤中樣品不含防腐劑，或只含微量的、不影響檢驗(yàn)結(jié)果的防腐劑；（4）血清盤中所包含的陰性樣本和陽性樣本數(shù)約各占一半；（5）陽性樣本中，應(yīng)有一定數(shù)量的強(qiáng)陽性和弱陽性樣本；臨床考核血清盤的制備要求

（1）采用人的原血清；72（6）血清盤中應(yīng)有一定數(shù)量的臨界值上、下含量的樣品，以檢驗(yàn)試劑的靈敏度。（7）血清盤中應(yīng)包含于該項(xiàng)檢驗(yàn)相關(guān)的病種地樣本和已知具有干擾物質(zhì)（RF因子）的樣本，以檢驗(yàn)試劑的特異性。

（6）血清盤中應(yīng)有一定數(shù)量的臨界值上、下含量的樣品，以檢驗(yàn)試73ELISA檢測注意事項(xiàng)

1標(biāo)本要避免嚴(yán)重溶血；盡量避免細(xì)菌污染；冷藏保存5-7天；冰凍保存避免反復(fù)凍融；2試劑的準(zhǔn)備在ELISA檢測中試劑的準(zhǔn)備最為關(guān)鍵的，在實(shí)驗(yàn)開始前，將試劑盒從冰箱中取出，在室溫下放20分鐘以上后再使用。使試劑盒在使用前與室溫平衡。ELISA檢測注意事項(xiàng)

1標(biāo)本743加樣；4溫育；5洗板；6顯色；7比色；8結(jié)果；3加樣；75（七）免疫學(xué)室間質(zhì)量評價(jià)（EQA）

由非本單位的機(jī)構(gòu)，采用一系列辦法來客觀地評價(jià)實(shí)驗(yàn)室的結(jié)果，其主要目的是建立實(shí)驗(yàn)室間的可比性。該計(jì)劃是多個(gè)標(biāo)本周期性地發(fā)送的實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行分析和/或鑒定，將每一實(shí)驗(yàn)室的結(jié)果與同組的其它實(shí)驗(yàn)室的結(jié)果或靶值進(jìn)行比較，并將比較的結(jié)果報(bào)告給參與的實(shí)驗(yàn)室。（七）免疫學(xué)室間質(zhì)量評價(jià)（EQA）

由非本單位的機(jī)構(gòu)761、室間質(zhì)評樣品的檢測1）、室間質(zhì)評樣本必須按實(shí)驗(yàn)室常規(guī)工作，由進(jìn)行常規(guī)工作的人員檢測，必須使用實(shí)驗(yàn)室常規(guī)檢測方法和試劑。實(shí)驗(yàn)室主任和質(zhì)控樣本檢測人員必須在質(zhì)控記錄上簽字。2）、室間質(zhì)評樣本檢測的次數(shù)應(yīng)與常規(guī)檢測患者樣本的次數(shù)一樣。3）、實(shí)驗(yàn)室必須在規(guī)定的時(shí)間里回報(bào)室間質(zhì)評樣本檢測的結(jié)果。

1、室間質(zhì)評樣品的檢測774）、實(shí)驗(yàn)室一定不能將室間質(zhì)評樣本或樣本的一部分送到另一個(gè)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行分析。5）、實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行室間質(zhì)評樣本檢測時(shí)，必須將處理、準(zhǔn)備、方法、審核、檢驗(yàn)的每一步驟和結(jié)果報(bào)告文件化。實(shí)驗(yàn)室必須保存所有記錄至少二年。

4）、實(shí)驗(yàn)室一定不能將室間質(zhì)評樣本或樣本的一部分送到另一個(gè)實(shí)782、室間質(zhì)評成績的評價(jià)方式1）、每次活動每一檢測項(xiàng)目未能達(dá)到至少80%得分為不滿意的EQA成績2）、每次室間質(zhì)評活動所有的評價(jià)項(xiàng)目未能達(dá)到至少80%得分為不滿意的EQA成績。3）、定性的一般免疫學(xué)試驗(yàn)的可接受的性能準(zhǔn)則是陰性或陽性。2、室間質(zhì)評成績的評價(jià)方式794）對每一次EQA活動，針對某一項(xiàng)目的得分計(jì)算公式為：該項(xiàng)目的可接受結(jié)果數(shù)——————————X100%

該項(xiàng)目的總的測定樣本數(shù)5）對評價(jià)的所有項(xiàng)目，其得分計(jì)算公式為全部項(xiàng)目的可接受結(jié)果總數(shù)——————————X100%

全部項(xiàng)目的總的測定樣本數(shù)4）對每一次EQA活動，針對某一項(xiàng)目的得分計(jì)算公式為：80臨床免疫實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制

黑龍江省臨床檢驗(yàn)中心吳皓瑜

臨床免疫實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制

黑龍江省臨床檢驗(yàn)中心81（一）定義

1質(zhì)量控制(qualitycontrol,QC)質(zhì)量控制(簡稱：質(zhì)控)是監(jiān)視全過程，排除誤差，防止變化，維持標(biāo)準(zhǔn)化現(xiàn)狀的一個(gè)管理過程。這一過程是通過一個(gè)反饋環(huán)路進(jìn)行的。具體內(nèi)容如下：⑴、確定質(zhì)控對象。⑵、規(guī)定控制標(biāo)準(zhǔn)（預(yù)定期）。⑶、選擇和確定控制方法。⑷、依規(guī)定標(biāo)準(zhǔn)和方法測量實(shí)際數(shù)據(jù)。（一）定義82⑸、比較實(shí)際數(shù)據(jù)與預(yù)期值之間的差異，并說明產(chǎn)生這一差異的原因。超出預(yù)定誤差范圍，報(bào)警系統(tǒng)發(fā)出信號，反饋通道中斷。⑹采取行動，解決差異?；謴?fù)原狀（原標(biāo)準(zhǔn)狀態(tài)）的手段發(fā)揮作用。⑸、比較實(shí)際數(shù)據(jù)與預(yù)期值之間的差異，并說明產(chǎn)生這一差異的原因83臨床實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量目標(biāo)：

使檢驗(yàn)結(jié)果更好的符合病人的實(shí)際情況；及時(shí)的發(fā)出檢驗(yàn)報(bào)告，并依據(jù)檢驗(yàn)結(jié)果結(jié)合病人臨床情況主動為臨床診斷提供咨詢。臨床實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量目標(biāo)：84實(shí)驗(yàn)室的工作人員把其描述為：準(zhǔn)確、可靠、臨床適用性好。醫(yī)生將其定義為：實(shí)驗(yàn)時(shí)間短、臨床應(yīng)用價(jià)值大、隨時(shí)能得到實(shí)驗(yàn)室的咨詢意見。醫(yī)院院長：成本-效益好，臨床醫(yī)生滿意。病人或被檢查者將其定義為：快速、準(zhǔn)確、便宜、有價(jià)值。實(shí)驗(yàn)室的工作人員把其描述為：準(zhǔn)確、可靠、臨床適用性好。85（二）室內(nèi)質(zhì)量控制（簡稱室內(nèi)質(zhì)控）

是由實(shí)驗(yàn)室的工作人員采用一系列的方法，連續(xù)的評價(jià)本實(shí)驗(yàn)室的工作的可靠程度，確立報(bào)能否發(fā)出。旨在檢測、控制本室常規(guī)工作的精密度，并檢測其準(zhǔn)確度的改變，提高本室常規(guī)工作中的批間、批內(nèi)標(biāo)本檢測的一致性。（二）室內(nèi)質(zhì)量控制（簡稱室內(nèi)質(zhì)控）

是由實(shí)驗(yàn)室的工作861、開展室內(nèi)質(zhì)量控制前的準(zhǔn)備工作

在開展室內(nèi)質(zhì)量控制前每個(gè)實(shí)驗(yàn)室工作人員都應(yīng)對質(zhì)控的重要性、基礎(chǔ)知識、一般方法學(xué)有較充分的了解，并在質(zhì)控的實(shí)際工作中不斷進(jìn)行培訓(xùn)和提高，在實(shí)際工作中培養(yǎng)一些質(zhì)控工作的技術(shù)骨干。1）、培訓(xùn)實(shí)驗(yàn)室工作人員1、開展室內(nèi)質(zhì)量控制前的準(zhǔn)備工作

在開展室內(nèi)質(zhì)量控87●人員培訓(xùn)

實(shí)驗(yàn)是人操作的，因此檢驗(yàn)人員需經(jīng)過培訓(xùn)，熟練掌握本專業(yè)如下幾方面的技術(shù)知識：

◎檢驗(yàn)項(xiàng)目的基本原理

（ELISA原理）；

◎臨床意義；

◎熟悉檢測技巧，了解易出差錯(cuò)的環(huán)節(jié)及難點(diǎn)；

◎熟悉檢測試劑性能（包括試劑盒組成，包被片段及其組成）；

●人員培訓(xùn)

實(shí)驗(yàn)是人操作的，因此檢驗(yàn)人員需經(jīng)過培訓(xùn)，熟練88◎熟悉檢測儀器的原理及性能；掌握數(shù)據(jù)處理的能力和質(zhì)量控制知識。

◎某些特殊項(xiàng)目的檢測如抗HIV等需經(jīng)有關(guān)部門組織的專門培訓(xùn)班，考試合格后持證上崗。

◎熟悉檢測儀器的原理及性能；掌握數(shù)據(jù)處理的能力和質(zhì)量控制知892）、建立標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程實(shí)施質(zhì)控需要有一套完整的標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程做保障。例如儀器的使用、維護(hù)操作規(guī)程，試劑、質(zhì)控品、校準(zhǔn)品等的使用操作規(guī)程。所有臨床實(shí)驗(yàn)室都應(yīng)建立一套完整的標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程。2）、建立標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程903）、儀器的檢定校準(zhǔn)為使儀器保持最佳工作狀態(tài)應(yīng)建立維護(hù)和校正儀器的標(biāo)準(zhǔn)操作程序（SOP），所要控制的儀器包括移液器（加樣槍），水浴箱（溫箱）,洗板機(jī),酶標(biāo)儀?！蛞埔浩鳎篍LISA加樣量?。?-100ｕl），其準(zhǔn)確性直接影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果，利用稱重法檢查：吸取刻度指示量的水，萬分之一天平稱重后計(jì)算吸量是否準(zhǔn)確,一般應(yīng)在+-10%以內(nèi)。3）、儀器的檢定校準(zhǔn)91◎水浴箱

經(jīng)常檢查水浴箱溫度計(jì)所示的溫度和水中（或溫箱內(nèi)）實(shí)測溫度是否一致，允許有±1℃的誤差；

◎洗板機(jī)

每個(gè)廠家設(shè)置洗板后的殘留液有各自的規(guī)定一般不超過2ul，人工扣板時(shí)，墊紙不濕，定期檢查管孔是否堵塞；

◎酶標(biāo)儀

經(jīng)常維護(hù)其光學(xué)部分，防止濾光片霉變，定期檢測校正，使其保持良好的工作性能。◎水浴箱

經(jīng)常檢查水浴箱溫度計(jì)所示的溫度和水中（或溫箱內(nèi)922、質(zhì)控物定值的選擇

室內(nèi)質(zhì)控質(zhì)控點(diǎn)的選擇，以需要設(shè)置質(zhì)控的點(diǎn)，設(shè)置質(zhì)控物進(jìn)行質(zhì)控為原則。病毒性肝炎酶免檢驗(yàn)中，有高值、中值、低值、及陰性值的質(zhì)控物，我們認(rèn)為其中以低值的質(zhì)控物為最重要，設(shè)置臨界于cut-off值（CO值）的低值弱陽性質(zhì)控物是室內(nèi)質(zhì)控的關(guān)鍵。重點(diǎn)抓住低值弱陽性—臨界值血清的室內(nèi)質(zhì)控監(jiān)測，是室內(nèi)質(zhì)控精密度觀測的最敏感的窗口，也是提示試驗(yàn)成功與否的最重要的標(biāo)志。

2、質(zhì)控物定值的選擇

室內(nèi)質(zhì)控質(zhì)控點(diǎn)的選擇，以需要設(shè)置質(zhì)控的931）質(zhì)控血清的作用1、靈敏度控制；用臨界值血清，檢測試劑盒靈敏度是否達(dá)到要求。2、精密度控制3、是試驗(yàn)是否成功的重要標(biāo)志。1）質(zhì)控血清的作用1、靈敏度控制；943室內(nèi)質(zhì)控的步驟

1）、計(jì)算平均值、標(biāo)準(zhǔn)差、變異系數(shù) 在開展室內(nèi)質(zhì)控時(shí)，首先對同一批質(zhì)控血清連續(xù)進(jìn)行測定20-30次，將測得的結(jié)果計(jì)算獲得一組數(shù)據(jù)，求出平均值、標(biāo)準(zhǔn)差、變異系數(shù)。2）、質(zhì)控限的設(shè)定：質(zhì)控限通常是以標(biāo)準(zhǔn)差的倍數(shù)表示。3室內(nèi)質(zhì)控的步驟

1）、計(jì)算平均值、標(biāo)準(zhǔn)差、變異系數(shù)95HBsAg–ELISA檢驗(yàn)數(shù)據(jù)計(jì)算示例表1

質(zhì)控血清陰性對照cot-off值s/co值次數(shù)A值A(chǔ)值陰性A值×2.110.1800.0500.1051.7120.1900.0500.1051.8130.2000.0500.1051.9040.2880.0600.1261.8150.1370.0600.1262.2960.2210.0500.1052.1070.1500.0500.1051.4380.1700.0500.1051.6290.1800.0400.0842.14100.1500.0500.1051.43110.2000.0500.1051.90

HBsAg–ELISA檢驗(yàn)數(shù)據(jù)計(jì)算示例96計(jì)算20個(gè)質(zhì)控血清S/CO值的均值,標(biāo)準(zhǔn)差和變異系數(shù)。

=1.72S=0.29CV=16.9%計(jì)算20個(gè)質(zhì)控血清S/CO值的均值,標(biāo)準(zhǔn)差和變異系數(shù)。

97+3s+2s+1sX1.72-1s-2s-3s

LeveY—Jennings質(zhì)控圖

圖1

+3s+2s+1sX1.72-1s-2s-3s984、室內(nèi)質(zhì)控圖的繪制

目前，臨床免疫學(xué)檢驗(yàn)多采用Levey-Jennings質(zhì)控圖。以20份質(zhì)控品的檢測結(jié)果，計(jì)算平均值（x）和標(biāo)準(zhǔn)差（S），定出質(zhì)控限。一般以±2S為警告限，以±3S為失控限，作質(zhì)控框架圖。每次（或每天）隨病人樣本測定的質(zhì)控品值，將原始質(zhì)控結(jié)果記錄標(biāo)記在質(zhì)控圖表上。保留打印原始質(zhì)控記錄4、室內(nèi)質(zhì)控圖的繪制

目前，臨床免疫學(xué)檢驗(yàn)多采用Levey-995、質(zhì)控規(guī)則的應(yīng)用

將設(shè)計(jì)的質(zhì)控規(guī)則應(yīng)用于質(zhì)控?cái)?shù)據(jù)，判斷分析批每一次檢測是在控的還是失控的。一般以±2S

為警告限，以±3S為失控限，分析質(zhì)控圖中每天檢測質(zhì)控品結(jié)果的分布，判斷當(dāng)天檢測的樣本是否在控制限之內(nèi)。若當(dāng)天質(zhì)控物檢測結(jié)果失控，則當(dāng)天病人樣本的測定結(jié)果報(bào)告不能發(fā)出。當(dāng)以±3S為失控限時(shí)，

5、質(zhì)控規(guī)則的應(yīng)用

將設(shè)計(jì)的質(zhì)控規(guī)則應(yīng)用于質(zhì)控?cái)?shù)據(jù)，100每100次約有一次判為失控（99%的合格率）。顯然，這個(gè)標(biāo)準(zhǔn)太低，使許多失控狀態(tài)判為合格。當(dāng)以±2S為失控限時(shí)，每20次約有一次失控（95%的合格率），這個(gè)標(biāo)準(zhǔn)可以接受。當(dāng)我們以±1.5S為失控限時(shí)，就將2/10的結(jié)果設(shè)定為失控（即約80%的合格率），顯然提高了質(zhì)控的難度，使操作者需要更用心操作，否則易處失控狀態(tài)。我們建議臨床實(shí)驗(yàn)室采用±2S為失控限。血站±1.5S為失控限。每100次約有一次判為失控（99%的合格率）。顯然，這個(gè)1016、Westgard多規(guī)則

質(zhì)控方法在質(zhì)控圖中單純依據(jù)質(zhì)控點(diǎn)超出2S為警告，超出3S為失控，在臨床檢驗(yàn)中以顯不夠。Wesegard將常用的判斷失控的規(guī)則總結(jié)出許多條規(guī)則.6、Westgard多規(guī)則

質(zhì)控方法在質(zhì)控圖中單純依據(jù)質(zhì)控10212S:一個(gè)質(zhì)控測定值超過均值±2S質(zhì)控限，違背次規(guī)則，提示警告。13S:一個(gè)質(zhì)控測定值超過均值±3S,違背此規(guī)則，提示存在隨機(jī)誤差。22S:2個(gè)連續(xù)的質(zhì)控測定值同時(shí)超均值+2S或均值-2S質(zhì)控限。違背此規(guī)則，提示存在系統(tǒng)誤差。12S:一個(gè)質(zhì)控測定值超過均值±2S質(zhì)控限，違背103R4S:在同一

批內(nèi)高值質(zhì)控測定值與低值質(zhì)控測定值兩個(gè)質(zhì)控結(jié)果之差超過4S，違背此規(guī)則，提示存在隨機(jī)誤差。31S:3個(gè)連續(xù)的質(zhì)控測定值同時(shí)超過+1S或-1S質(zhì)控限。違背次規(guī)則，提示存在系統(tǒng)誤差。

R4S:在同一批內(nèi)高值質(zhì)控測定值與低值質(zhì)控測定值兩10441S:連續(xù)4個(gè)質(zhì)控點(diǎn)落在同一側(cè)±1S之外。違背此規(guī)則，提示存在系統(tǒng)誤差。7↑/↓：連續(xù)7個(gè)質(zhì)控點(diǎn)呈連續(xù)上升或下降；或周期性波動變化。10X:是個(gè)連續(xù)的質(zhì)控結(jié)果在平均數(shù)一側(cè)，違背此規(guī)則，提示存在系統(tǒng)誤差。 41S:連續(xù)4個(gè)質(zhì)控點(diǎn)落在同一側(cè)±1S之外。違背此規(guī)則，105+3s+2s+1sX

-1s-2s21s違背規(guī)則-3s31s違背規(guī)則+3s+2s+1sX-1s-2s21s違背-3s106+3s+2s+1sX-1s-2s-3s22s違背規(guī)則R4s+3s+2s+1sX-1s-2s-3s22s違背R4s107我們利用Westgard規(guī)則,引入免疫學(xué)檢驗(yàn)中,建議以下幾種情況判為失控.

112s1質(zhì)控測定值超過±2S之外.2R4S

連續(xù)2個(gè)質(zhì)控點(diǎn)相差超過4S范圍.341S連續(xù)4個(gè)質(zhì)控點(diǎn)落在同一側(cè)±1S之外47X

連續(xù)7個(gè)質(zhì)控點(diǎn)落在同一側(cè)。57↑/↓連續(xù)7個(gè)質(zhì)控點(diǎn)呈連續(xù)上升或下降；或周期性波動變化。

我們利用Westgard規(guī)則,引入免疫學(xué)檢驗(yàn)中,建議以下幾種1087、統(tǒng)計(jì)學(xué)計(jì)算方法——“即刻法”質(zhì)控

ELISA有其特殊性，最合適的質(zhì)控方法尚待研究建立。有些實(shí)驗(yàn)室不是每天進(jìn)行ELISA項(xiàng)目的檢驗(yàn)，而ELISA試劑盒效期短，用同一批號試劑盒連續(xù)常規(guī)測２０次，難度較大。采用“即刻法”質(zhì)控統(tǒng)計(jì)方法，只需連續(xù)測３次，即可對第３次檢驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行質(zhì)控。7、統(tǒng)計(jì)學(xué)計(jì)算方法——“即刻法”質(zhì)控ELISA有其特109（１）先將測定值從小到大排列：X1、X2、X3、……Xn（X1為最小值，Xn為最大值）。（２）計(jì)算x和S。

(３）計(jì)算SI上限值和SI下限值，

SI上限＝X最大值―x

均／ＳSI下限＝

x

均―Ｘ最小值

／Ｓ（４）將SI上限、SI下限與SI值表（表2）中的數(shù)字比較。

（１）先將測定值從小到大排列：X1、X2、X3、……Xn110

SI值表表2nn3sn2snn3sn231.151.15122.552.2941.491.46132.612.3351.751.67142.662.3761.941.82152.712.4172.101.94162.752.4482.222.03172.792.4792.322.11182.822.50102.412.18192.852.53112.482.23202.882.56

SI值表111當(dāng)SI上限值和SI下限值<n2s時(shí)，表示處于控制范圍內(nèi)，可以繼續(xù)往下測定，繼續(xù)重復(fù)以上各項(xiàng)計(jì)算；當(dāng)SI上限和SI下限有一值處于n2s和n3s值之間時(shí)，說明該值在2s～3s范圍，處于“告警”狀態(tài)；當(dāng)SI上限和SI下限有一值>n3s值時(shí)，說明該值已在3s范圍之外，屬“失控”。數(shù)值處于“告警”和“失控”狀態(tài)應(yīng)舍去，重新測定該項(xiàng)質(zhì)控血清和病人樣本。舍去的只是失控的這次數(shù)值，其它次測定值仍可繼續(xù)使用。當(dāng)SI上限值和SI下限值<n2s時(shí)，表示處于控制范圍11220次質(zhì)控血清檢測S/CO值次數(shù)s/co次數(shù)s/co11.71121.3521.81132.0031.90141.5241.81151.7151.09161.8162.10171.5271.43182.1081.62192.0092.14201.43101.43211.52111.9020次質(zhì)控血清檢測S/CO值1113在第3次測后，按“即刻法”計(jì)算公式n=3,S/CO值從小到大排列為：1.711.811.90SI上限=X最大值-X均值/S

SI下限

=X均值-X最小值/S

x均=1.81，S=0.10

計(jì)算：SI上限=1.90–1.81/0.1=0.9SI下限=1.81–1.71/0.1=1.0在第3次測后，按“即刻法”計(jì)算公式SI下限=1.8114查SI值表：n=3時(shí)，n2s=1.15，n3s=1.15,SI上限、SI下限均小于n2s、n3s，因此該三次檢驗(yàn)數(shù)據(jù)在控制范圍內(nèi)。在第4次測定后，按上法計(jì)算：n=41.711.811.811.90

x均=1.81S=0.08SI上限=1.90―1.81/0.08=1.13SI下限=1.81―1.71/0.08=1.25

查SI值表：n=4時(shí)，n2s=1.46，n3s=1.49。SI上限、SI下限均小于n2、n3s,數(shù)據(jù)在控制范圍內(nèi)。

查SI值表：n=3時(shí)，n2s=1.15，n3s115

在第5次測定后，按上法計(jì)算：

n=51.091.711.811.811.90

x均=1.66，S=0.33SI上限=1.90―1.66/0.33=0.73SI下限=1.66―1.09/0.33=1.73查SI值表；n=5時(shí)，n2s=1.67，n3s=1.75n2s（1.67）<SI下限（1.73）<n3s（1.75）。SI下限值在n2s和n3s之間,說明該值在2s～3s范圍，同時(shí)表示該資料是在下限（-2s）之外，處于“告警”狀態(tài)，本次數(shù)據(jù)棄去。在第5次測定后，按上法計(jì)算：116第6次檢測，n仍為5進(jìn)行計(jì)算：

n=5，1.711.811.811.902.1

x均=1.87S=0.15SI上限=2.10―1.87/0.15=1.53SI下限=1.87―1.71/0.15=1.07查SI值表：n2s=1.67，n3s=1.75。SI上限、SI下限均小于n2s、n3s,數(shù)據(jù)在控制范圍內(nèi)，繼續(xù)檢測并計(jì)算。第6次檢測，n仍為5進(jìn)行計(jì)算：117

當(dāng)測定達(dá)到21次時(shí)，因舍去一個(gè)數(shù)據(jù)（第5個(gè)），n=20，排序如下：1.351.431.431.431.521.521.621.711.711.81

1.811.811.901.901.902.002.002.102.102.14

x均=1.76S=0.25SI上限=2.14―1.76/0.25=1.5

SI下限=1.76–1.35/0.25=1.64

當(dāng)測定達(dá)到21次時(shí)，因舍去一個(gè)數(shù)據(jù)（第5個(gè)），n=20118

查SI值表：n2s=2.56,n3s=2.88.SI上限、SI下限均小于n2s、n3s數(shù)據(jù)在控制范圍內(nèi).用20次數(shù)據(jù)的均值和S值（x均=

1.76S=0.25）做質(zhì)控框架圖。以后的檢測數(shù)據(jù)不再計(jì)算，轉(zhuǎn)入質(zhì)控圖。從以上實(shí)例可看出，通過“即刻法”統(tǒng)計(jì)計(jì)算的均值和S值與前面介紹的測20次獲得均值和S是十分接近的。即刻法質(zhì)控的統(tǒng)計(jì)方法，適于免疫學(xué)測定的質(zhì)控。查SI值表：n2s=2.56,n3s=2.119當(dāng)檢測的數(shù)值超20次以后，不必再使用“即刻法”質(zhì)控統(tǒng)計(jì)計(jì)算，可以轉(zhuǎn)入常規(guī)的質(zhì)控圖的質(zhì)控，將前20次的數(shù)值求出的均值和S值作質(zhì)控框架圖，第21次的數(shù)值，依次點(diǎn)入即可。當(dāng)檢測的數(shù)值超20次以后，不必再使用“即刻法”質(zhì)控統(tǒng)計(jì)120(三)ELISA檢驗(yàn)中各種變異的控制

1、孔間差變異的控制

ELISA檢驗(yàn)孔與孔間的差異的調(diào)查，可以在同一塊板上，獲取同一份質(zhì)控血清至少十孔平行試驗(yàn)的S/CO值的均值和標(biāo)準(zhǔn)差。

質(zhì)控血清HBsAglng/ml做孔間變異A值檢測,結(jié)果如下:0.125，0.1031.103,0.098，0.092,0.099，0.098,0.106，0.098，0.092(三)ELISA檢驗(yàn)中各種變異的控制

1、孔間差變異的控制121x均=0.101S=0.01CV=9.3%通過孔間的變異調(diào)查，可以了解不同試劑、不同批號、不同操作者的差異，以便于選擇、改進(jìn)。了解孔間的變異，就可以了解每個(gè)樣品測定值的可能變動范圍，對于判定處于CO值上下的樣品的結(jié)果是十分有用的。x均=0.101S=0.011222、批內(nèi)變異（板間差異）與批間變異的控制有的實(shí)驗(yàn)室每天需測試數(shù)百人的血清樣品，使用數(shù)塊微孔板，或數(shù)拾塊微孔板。在這里就存在同一天檢測數(shù)塊板之間的變異（批內(nèi)變異），和不同天檢測之間的變異（批間變異）的問題。有的單位將每天檢測的每一塊板的質(zhì)控?cái)?shù)值，連續(xù)在質(zhì)控圖中描記出來，不考慮不同天之間變異的影響。這種作法，只有當(dāng)證實(shí)該實(shí)驗(yàn)室批內(nèi)變異十分小，且批內(nèi)變異與批間變異十分接近的前題條件下，才可以這么做。

2、批內(nèi)變異（板間差異）與批間變異的控制有的實(shí)驗(yàn)室123有的實(shí)驗(yàn)室，不考慮批內(nèi)變異，只將每天檢測的“第一塊”板的質(zhì)控?cái)?shù)值描記在質(zhì)控圖中，這樣使該室質(zhì)檢圖可以做得十分漂亮，但細(xì)查一下每塊板的質(zhì)檢結(jié)果，就會發(fā)現(xiàn)差異變化極大。這樣的質(zhì)控，不能對每塊板進(jìn)行質(zhì)控（批內(nèi)變異）,失去意義。如何進(jìn)行免疫實(shí)驗(yàn)室室內(nèi)質(zhì)控的批內(nèi)、批間變異的控制，我們借用某一實(shí)驗(yàn)室開展室內(nèi)質(zhì)控初始的實(shí)際數(shù)據(jù)計(jì)算一下。該室室內(nèi)質(zhì)控初始階段資料變異很大，6個(gè)月后才趨于穩(wěn)定水平。從這也說明實(shí)驗(yàn)室開展室內(nèi)質(zhì)控的必要性。該實(shí)驗(yàn)室室內(nèi)質(zhì)控資料見表4有的實(shí)驗(yàn)室，不考慮批內(nèi)變異，只將每天檢測的“第一塊”板124

某實(shí)驗(yàn)室室內(nèi)質(zhì)控資料表（S/CO值）質(zhì)控血清：HBsAglng/ml

日期序號S/CO

12.241.321.3923.391.522.013.953.088.001.712.971.5833.253.953.022.2342.073.042.132.131.983.162.5152.503.002.204.011.949.8362.703.462.38

2.422.7173.373.794.262.742.912.5883.063.978.629.224.063.4594.654.968.916.408.62107.304.137.683.02112.383.202.653.57