實(shí)驗(yàn)二卵黃中卵磷脂的提取和鑒定XiamenUniversity生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)2015年03月26日廈門卵磷脂的概況1844年法國(guó)人Gohley從蛋黃中發(fā)現(xiàn)卵磷脂(蛋黃素)，并以希臘文命名為L(zhǎng)ecithos(卵磷脂)，英文名為L(zhǎng)ecithin，也自此揭開(kāi)了其神秘的面紗。卵磷脂是生命的基礎(chǔ)物質(zhì)，人類生命自始至終都離不開(kāi)它的滋養(yǎng)和保護(hù)。卵磷脂存在于每個(gè)細(xì)胞之中，更多的是集中在腦及神經(jīng)系統(tǒng)、血液循環(huán)系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)以及肝、心、腎等重要器官。磷脂是一類含有磷元素的脂肪化合物，通常是卵磷脂（磷脂酰膽堿，簡(jiǎn)稱PC）、腦磷脂（磷脂酰乙醇胺，簡(jiǎn)稱PE）、肌醇磷脂（磷脂酰肌醇，簡(jiǎn)稱PI）、磷脂酸（簡(jiǎn)稱PA）、絲氨酸磷脂（簡(jiǎn)稱PS）等的混合物，其中最典型的是前三種。

磷脂是一種成分復(fù)雜的甘油脂，水解后可以的到甘油、脂肪酸、磷酸、膽堿、膽胺、肌醇等化合物。一般大豆磷脂分子中的脂肪酸為軟脂酸、硬脂酸、油酸、亞油酸和花生烯酸。R1-COO-CH2R2-COO-C—H CH2—O—P—O—R

OHO12

*3R1常為飽和脂肪酸如C16，C18R2常為不飽和脂肪酸如花生四烯酸R=—CH2CH2-N(CH3)3OH

卵磷脂+ -卵磷脂徹底水解的產(chǎn)物是什么？卵磷脂的化學(xué)結(jié)構(gòu)CO2-CH2CO2-CHCH2O-P-O-CH2CH2-N(CH3)3

OO+非極性端疏水端，親油端

磷脂分子中同時(shí)具有疏水基和親水基。正是由于這種特點(diǎn)，使得磷脂類化合物在細(xì)胞中起著重要的生理作用。-極性端疏油端，親水端H-OH目前我們食用磷脂的主要來(lái)源是大豆磷脂和蛋黃磷脂。除此之外，牛奶、動(dòng)物的腦、骨髓、心臟、肺臟、肝臟、腎臟以及大豆和酵母中都含有卵磷脂。

卵磷脂在體內(nèi)多與蛋白質(zhì)結(jié)合，以脂肪蛋白質(zhì)(脂蛋白)的形態(tài)存在著，所以卵磷脂是以豐富的姿態(tài)存在于自然界當(dāng)中，如果能攝取足夠種類的食物，就不必?fù)?dān)心會(huì)有缺乏的問(wèn)題，同時(shí)也不需要額外補(bǔ)充卵磷脂的營(yíng)養(yǎng)品。蛋黃磷脂屬動(dòng)物胚胎磷脂，含有大量的膽固醇和甘油三酯及許多人體不可缺少的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和微量元素。蛋黃卵磷脂可將膽固醇乳化為極細(xì)的顆粒，這種微細(xì)的乳化膽固醇顆粒可透過(guò)血管壁被組織利用，而不會(huì)使血漿中的膽固醇增加。毋庸置疑，蛋黃卵磷脂是目前同類產(chǎn)品中營(yíng)養(yǎng)價(jià)值最高的。卵磷脂的作用1、肝臟的保護(hù)神磷脂中的膽堿對(duì)脂肪有親和力，若體內(nèi)膽堿不足，則會(huì)影響脂肪代謝，造成脂肪在肝內(nèi)積聚，形成脂肪肝甚至?xí)l(fā)炎腫脹。卵磷脂不但可以預(yù)防脂肪肝，還能促進(jìn)肝細(xì)胞再生，同時(shí)，磷脂可降低血清膽固醇含量，防止肝硬化并有助于肝功能的恢復(fù)。2、對(duì)心臟健康的積極作用

在20世紀(jì)60年代，科學(xué)家們就發(fā)現(xiàn)卵磷脂可能具有保護(hù)心臟的作用，在進(jìn)一步的研究中，終于證實(shí)卵磷脂對(duì)心臟健康有積極作用。這是因?yàn)樗苷{(diào)節(jié)膽固醇在人體內(nèi)的含量、有效降低膽固醇、高血脂及冠心病的發(fā)病率。

3、促進(jìn)大腦發(fā)育，增強(qiáng)記憶力

美國(guó)北卡羅來(lái)納州DUKE大學(xué)心理學(xué)教授藥學(xué)博士沃倫來(lái)克在報(bào)告中提到：用卵磷脂飼育懷孕的大鼠，其后代在智力測(cè)驗(yàn)（迷宮測(cè)試）中，記憶力顯著優(yōu)于未飼育卵磷脂的大鼠的后代。北卡羅來(lái)納大學(xué)營(yíng)養(yǎng)學(xué)部教授及主任，會(huì)議的首席專家，醫(yī)學(xué)博士、藥學(xué)博士史蒂文·澤瑟爾在大會(huì)賀詞中說(shuō)：“總結(jié)有關(guān)卵磷脂的所有研究成果，我們應(yīng)當(dāng)特別建議懷孕婦女服用適量的卵磷脂，這對(duì)于她們的嬰兒的智力發(fā)育是很重要的。”美國(guó)食品與藥物管理委員會(huì)（FDA）規(guī)定，所有嬰兒食譜中都要適量補(bǔ)充卵磷脂。4、血管的“清道夫”

卵磷脂具有乳化、分解油脂的作用，可增進(jìn)血液循環(huán)，改善血清脂質(zhì)，清除過(guò)氧化物，使血液中膽固醇及中性脂肪含量降低，減少脂肪在血管內(nèi)壁的滯留時(shí)間，促進(jìn)粥樣硬化斑的消散，防止由膽固醇引起的血管內(nèi)膜損傷。服用卵磷脂對(duì)高血脂和高膽固醇具有顯著的功效，因而可預(yù)防和治療動(dòng)脈硬化癥（高血壓、心肌梗塞、腦溢血）。

5、糠尿病患者的營(yíng)養(yǎng)品

卵磷脂不足會(huì)使胰臟機(jī)能下降，無(wú)法分泌充分的胰島素，不能有效地將血液中的葡萄糖運(yùn)送到細(xì)胞中，這是導(dǎo)致糖尿病的基本原因之一。如每天食用20g以上的卵磷脂，則糖尿病的恢復(fù)是相當(dāng)顯著的。很多病人甚至可不必再注射胰島素。特別是對(duì)糖尿壞疽及動(dòng)脈硬化等并發(fā)癥患者更為有效。6、有效地化解膽結(jié)石

體內(nèi)過(guò)多的膽固醇會(huì)發(fā)生沉淀，從而形成膽結(jié)石，膽結(jié)石90%是由膽固醇組成。膽汁中的主要成分是卵磷脂，此外還有水份、膽固醇、礦物質(zhì)及色素等，卵磷脂可以將多余的膽固醇分解、消化及吸收，從而使膽汁中的膽固醇保持液體狀。如果每天攝取一定量的卵磷脂可以有效地防止膽結(jié)石的形成，并對(duì)已形成的膽結(jié)石也能起到化解的作用。7、胎、嬰兒神經(jīng)發(fā)育的必需品

正常情況下，孕婦體內(nèi)的羊水中含有大量的卵磷脂。人體腦細(xì)胞約有150億個(gè)，其中70%早在母體中就已經(jīng)形成。為了促進(jìn)胎兒腦細(xì)胞能健康發(fā)育，孕婦補(bǔ)充足夠的卵磷脂是很重要的。嬰幼兒時(shí)期是大腦形成發(fā)育最關(guān)鍵時(shí)期，卵磷脂可以促進(jìn)大腦神經(jīng)系統(tǒng)與腦容積的增長(zhǎng)、發(fā)育。因此美國(guó)食品和藥物管理局（FDA）規(guī)定在嬰兒奶粉中必需添加卵磷脂。8、消除青春痘、雀斑并滋潤(rùn)皮膚

正常人體內(nèi)含有許多毒素，特別是在腸道內(nèi)，當(dāng)這些毒素含量過(guò)高時(shí)，便會(huì)隨著血液循環(huán)沉積在皮膚上，從而形成色斑或青春痘。卵磷脂正好是一種天然的解毒劑，它能分解體內(nèi)過(guò)多的毒素，并經(jīng)肝臟和腎臟的處理排出體外，當(dāng)體內(nèi)的毒素降低到一定的濃度時(shí)，臉上的斑點(diǎn)和青春痘就會(huì)慢慢消失。卵磷脂還具有一定的親水性，并有增加血紅素的功能，如果每天服用一定量的卵磷脂，就能為皮膚提供充分的水分和氧氣，使皮膚變得光滑柔潤(rùn)。

9、預(yù)防老年癡呆癥的發(fā)生

人隨著年齡增長(zhǎng)，記憶力會(huì)減退，其原因與乙酰膽堿含量不足有一定關(guān)系。腦部的神經(jīng)傳導(dǎo)物質(zhì)（乙酰膽堿）減少是引起老年癡呆的主要原因，乙酰膽堿是神經(jīng)系統(tǒng)信息傳遞時(shí)必需的化合物。而且“膽堿”是卵磷脂的基本成分，卵磷脂的充分供應(yīng)將保證機(jī)體內(nèi)有足夠的膽堿與人體內(nèi)的乙酰結(jié)合為“乙酰膽堿”，從而成為大腦提供充分的信息傳導(dǎo)物質(zhì)，大腦能直接從血液中攝取卵磷脂及膽堿，并很快轉(zhuǎn)化為乙酰膽堿。長(zhǎng)期補(bǔ)充卵磷脂可以減緩記憶力衰退的進(jìn)程，預(yù)防或推遲老年癡呆的發(fā)生。10、良好的心理調(diào)和劑

社會(huì)競(jìng)爭(zhēng)日趨激烈，人們長(zhǎng)期處在緊張的環(huán)境和種種壓力下，常患有焦慮、急躁、易怒、失眠、耳鳴等癥，即植物神經(jīng)紊亂，通常被稱為神經(jīng)衰弱。經(jīng)常補(bǔ)充卵磷脂，可使大腦神經(jīng)及時(shí)得到營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)充，保持健康的工作狀態(tài)，利于消除疲勞，激化腦細(xì)胞，改善因神經(jīng)緊張而引起的急躁、易怒、失眠等癥。卵磷脂應(yīng)用是肝臟的保護(hù)神對(duì)心臟健康的積極作用促進(jìn)大腦發(fā)育，增強(qiáng)記憶力是血管的“清道夫”

是糖尿病患者的營(yíng)養(yǎng)品能有效地化解膽結(jié)石是胎、嬰兒神經(jīng)發(fā)育的必需品可消除青春痘、雀斑并滋潤(rùn)皮膚可預(yù)防老年癡呆癥的發(fā)生是良好的心理調(diào)和劑二、實(shí)驗(yàn)原理

卵磷脂易溶于乙醇、乙醚等脂溶劑，可利用此等溶劑提取，它不溶于丙酮，利用此性質(zhì)可與中性脂肪分離。純卵磷脂為白色蠟狀物，與空氣接觸后，因分子中不飽和脂肪酸被氧化而呈黃褐色，卵磷脂中的膽堿基在堿性溶液中分離成三甲胺，三甲胺有特異魚(yú)腥臭味，可鑒別。一、目的要求1、了解卵磷脂的性質(zhì)2、學(xué)習(xí)提取卵磷脂粗品的方法三、材料與試劑雞蛋黃95%乙醇溶液10%氫氧化鈉溶液丙酮蛋黃的收集采用放置于冰箱保存的新鮮雞蛋。打黃時(shí)要注意保證蛋黃的完整性，分離蛋黃，備用。四、操作方法

1.卵磷脂的提取取2g雞蛋卵黃于燒杯中，加入15ml95%乙醇溶液，邊加邊攪拌，冷卻，轉(zhuǎn)移到10ml離心管離心(轉(zhuǎn)速2000r/min，3min)取上清，過(guò)濾，如濾液混沌，須重濾，直至完全透明，將濾液在水浴上蒸干，殘留物即為卵磷脂。2、性質(zhì)試驗(yàn)(1)取已制備的卵磷脂一部分，放入試管中加10%氫氧化鈉溶液2ml，水浴上加熱，是否產(chǎn)生三甲胺的魚(yú)腥味。(2)另取一些卵磷脂溶于1ml乙醇中，添加丙酮2ml，觀察現(xiàn)象變化。思考題加丙酮的作用是什么？艾春香

廈門大學(xué)海洋與地球?qū)W院

chunxai@

實(shí)驗(yàn)三：血清膽固醇的定量測(cè)定-硫磷鐵法

XiamenUniversity生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)2015年03月26日廈門一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、學(xué)習(xí)并掌握磷硫鐵法測(cè)定血清中總膽固醇含量的原理及操作；2、學(xué)會(huì)制備無(wú)蛋白血清；3、了解血清總膽固醇的正常值范圍及臨床意義。二、實(shí)驗(yàn)原理膽固醇的分子結(jié)構(gòu)3171

膽固醇主要存在于動(dòng)物細(xì)胞，參與膜的組成，質(zhì)膜中的含量比細(xì)胞器膜中的多。膽固醇也是血中脂蛋白復(fù)合體的成分；并與粥樣硬化有關(guān)，它是動(dòng)脈壁上形成的粥樣硬化斑塊成分之一。膽固醇也是類固醇激素和膽汁酸的前提。

1784年，從膽石中提取出膽固醇。總膽固醇的測(cè)定方法：

磷硫鐵法

化學(xué)比色法醋酸酐法

鄰苯二甲醛法

酶學(xué)方法（試劑盒）

用無(wú)水乙醇提取血清中的膽固醇，再與磷硫鐵試劑作用，產(chǎn)生顏色反應(yīng)，呈色度與膽固醇含量成正比，可用比色法測(cè)定血清中膽固醇含量。

血清經(jīng)無(wú)水乙醇處理后蛋白質(zhì)被沉淀，膽固醇及其脂則溶解在無(wú)水乙醇中。在乙醇提取液中加入硫磷鐵試劑（即濃硫酸和三價(jià)鐵溶液），膽固醇及其脂與試劑反應(yīng)形成比較穩(wěn)定的紫紅色化合物，呈色程度與膽固醇含量成正比，可于560nm波長(zhǎng)下進(jìn)行比色測(cè)定。正常血清中膽固醇的含量有隨年齡增大而增加的趨勢(shì)，其平均正常值在110～220mg/100mL。膽固醇含量在400mg/100ml內(nèi)，與A值成良好線性關(guān)系。

三、實(shí)驗(yàn)器材1、人血清2、723可見(jiàn)分光光度計(jì)3、臺(tái)式離心機(jī)（4000r/min）4、離心管5、試管6、移液管。四、實(shí)驗(yàn)試劑1、10%三氯化鐵溶液：10.0gFeCl3·6H2O溶于濃磷酸中，定容至100ml；2、磷硫鐵試劑(P-S-Fe試劑)：取10%三氯化鐵溶液1.5ml于100ml棕色容量瓶?jī)?nèi)，加濃硫酸至刻度；3、膽固醇標(biāo)準(zhǔn)貯液：準(zhǔn)確稱量膽固醇80mg，溶于無(wú)水乙醇，定容至100ml；4、膽固醇標(biāo)準(zhǔn)溶液：將貯液用無(wú)水乙醇準(zhǔn)確稀釋10倍即得，此標(biāo)準(zhǔn)液含0.08mg/mL膽固醇。5、無(wú)水乙醇五、操作1、膽固醇的提取吸取血清0.1ml置干燥離心管內(nèi)，先加無(wú)水乙醇0.4ml，搖勻后再加無(wú)水乙醇2.0ml，搖勻，10min后離心（3000r/min-6000r/min）5min，取上清夜備用。2、比色測(cè)定取干燥試管3支，編號(hào)，分別加入無(wú)水乙醇1.0ml（空白管），膽固醇標(biāo)準(zhǔn)溶液1.0ml（標(biāo)準(zhǔn)管），上述乙醇提取液1.0ml（樣品管），各管皆加入磷硫鐵試劑1.0ml，搖勻，10min后，分別轉(zhuǎn)移至比色杯內(nèi)，用可見(jiàn)分光光度計(jì)在560nm處比色。管號(hào)/試劑空白管標(biāo)準(zhǔn)管測(cè)定管無(wú)水乙醇1.0ml膽固醇標(biāo)準(zhǔn)液1.0ml乙醇抽提液1.0ml磷硫鐵試劑1.0ml1.0ml1.0mlA560

注：磷硫鐵試劑須沿管壁緩緩加入，與乙醇液分成兩層，立即迅速振搖20次，放置10min（冷卻至室溫）后，于560nm進(jìn)行比色，以空白管調(diào)零讀取各管吸光度。六、計(jì)算100ml血清中膽固醇的質(zhì)量（mg）A1C0m=÷0.04×100