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文檔簡介

1、1掌握毛細管電泳法的基本原理、結構與使用方法。2掌握紫外吸收光譜檢測方法。3測定阿司匹林與水楊酸。實驗二十一 毛細管電泳法測定水楊酸的含量實驗目的1 毛細管電泳又稱高效毛細管電泳( High Performance Capillary Electrophoresis, HPCE) 是一種儀器分析方法。通過施加10-40kV的高電壓于充有緩沖液的極細毛細管，對液體中離子或荷電粒子進行高效、快速的分離。現在，HPCE已廣泛應用于氨基酸、蛋白質、多肽、低聚核苷酸、DNA等生物分子分離分析，藥物分析，臨床分析，無機離子分析，有機分子分析，糖和低聚糖分析及高聚物和粒子的分離分析。人類基因組工程中DNA的

2、分離是用毛細管電泳儀進行的。實驗原理2儀器與試劑高效毛細管電泳儀；石英毛細管柱50cm50m；色譜工作站；PHS-3C數字酸度計 ；離心機 ；超純水儀器A10 水楊酸（SA）、北四硼酸鈉、氫氧化鈉、十二烷基硫酸鈉（SDS）等試劑均為高純試劑；31電泳條件毛細管柱在使用前分別用0.1 mol的NaOH溶液和二次蒸餾水及緩沖液沖洗3min后，在運行電壓下平衡10min。以后每次進樣前均用緩沖液沖柱，在運行電壓下平衡5min。 本實驗采用電遷移進樣（10Kv、5s）。 高壓端進樣， 低壓端檢測，20 Kv的工作電壓。檢測波長為214nm。2水楊酸標準樣品的測定分別測定0.05、0.01、0.8、1.

3、2、1.6、2.0和5.0 mmol的水楊酸標準溶液。每個濃度平行測三次。實驗步驟43阿司匹林藥片中水楊酸含量的測定a取阿司匹林藥品溶液，在上述的電泳條件下對樣品溶液進行測定，平行測三次。 b把一定濃度的水楊酸加入樣品溶液中，進行測定。4數據采集打開色譜工作站軟件。把電壓上升到20Kv，立即點擊主界面的綠色圖標譜圖采集，開始譜圖采集。在進樣之前把屏幕調到色譜工作站的主界面。點擊主界面的紅色圖標手動停止，可以停止譜圖采集。然后將文件起名并保存在指定的文件夾。5數據處理從色譜工作站打開保存的文件，通過調節參數表里的滿屏量程和滿屏時間，把譜圖調到最佳。當需要改動起始峰寬水平時，還要按在處理這個圖標。把譜圖調到最佳后，點擊定量組分，出現一張表格。選中套峰時間下的一個空格，再用鼠標右鍵點擊需要研究的峰的內部，彈出一個菜單，點擊自動填寫“定量組分”表中套峰時間。然后輸進樣品的濃度，點擊定量方法，點擊計算校正因子，點擊屏幕上的定量計算圖標，點擊定量結果表，出現校正因子和峰面積，記錄校正因子和峰面積。點擊定量結果，在定量結果表格里輸入組分名稱、濃度、平均校正因子、平均峰面積。點擊當前表存檔，重復上述操作，存入七檔數據。然后點擊定量方法，點擊工作曲線中的計算，再點擊顯示。顯示出峰面積濃度的線性關系圖和峰面積濃度的方程。然后把標準曲線復制到word文檔里。 將樣品中水楊酸峰面積的

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