1、較高激發態較高激發態基基 態態吸收能吸收能量受激量受激光輻射光輻射退激退激分子在退激過程中以光輻射形式釋放能量分子在退激過程中以光輻射形式釋放能量熒光熒光熒光分析法熒光分析法磷光磷光磷光分析法磷光分析法 采用高靈敏度的檢測系統可大大提高采用高靈敏度的檢測系統可大大提高靈敏度，檢測限熒光分析法比分光光度法靈敏度，檢測限熒光分析法比分光光度法低低24個數量級個數量級激發激發發射熒光發射熒光強強強強光照激發光照激發去激發光去激發光 * * n基態單重態 第一激發單重態 單重態分子具有抗磁性，激發態的平均壽命約為單重態分子具有抗磁性，激發態的平均壽命約為10-8基態單重態基態單重態 第一激發三重態第一

2、激發三重態 自旋平行自旋平行三重態分子具有順磁性，激發態的平均壽命約為三重態分子具有順磁性，激發態的平均壽命約為10-41ST1S0ISCVRVRIC吸光吸光 吸光吸光S0S1S2VR：振動馳豫：振動馳豫IC：內部轉換：內部轉換ISC：系間竄躍：系間竄躍發光T1S0ISCVRVRIC吸光吸光 吸光吸光 熒光熒光圖圖5-1 分子熒光光譜產生過程示意圖分子熒光光譜產生過程示意圖S0S1S2VR：振動馳豫：振動馳豫IC：內部轉換：內部轉換ISC：系間竄躍：系間竄躍 * 易產生熒光易產生熒光 n * 易產生磷光易產生磷光T1S0ISCVRVRIC吸光吸光 吸光吸光 熒光熒光 磷光磷光圖圖5-1 分子熒

3、光、磷光光譜產生過程示意圖分子熒光、磷光光譜產生過程示意圖S0S1S2VR：振動馳豫：振動馳豫IC：內部轉換：內部轉換ISC：系間竄躍：系間竄躍VR發熒光的分子數發熒光的分子數激發態分子總數激發態分子總數ifffKKK 0.11 205 278 0.29 286 3100.46 365 400苯苯萘萘蒽蒽 350菲菲線狀環結構比非線狀線狀環結構比非線狀結構的熒光波長長結構的熒光波長長 芳香族化合物因具有共軛的不飽和體系，芳香族化合物因具有共軛的不飽和體系，多數能發生熒光多數能發生熒光 多環芳烴是重要的環境污染物，可用熒光多環芳烴是重要的環境污染物，可用熒光法測定法測定 3，4 - 苯并苯并芘是

4、強致癌物芘是強致癌物ocoo-oo-coo-oo-熒光素：氧橋把兩熒光素：氧橋把兩個環固定在一個平個環固定在一個平面上，具有平面結面上，具有平面結構，強熒光物質構，強熒光物質酚酞：無氧橋把兩酚酞：無氧橋把兩個環固定，不能很個環固定，不能很好的共平面，為非好的共平面，為非熒光物質熒光物質反式：平面構型 強熒光體順式：非平面構型 非熒光體C=CHHC=CHHNOHNOHMOHO_OHH+_例：例： 苯酚苯酚離子化后，離子化后，熒光消失熒光消失pH1有有熒光熒光pH13無熒光無熒光例：例： 苯酚苯酚有熒光有熒光無熒光無熒光OHO_另外，表面活性劑也會影響熒光強度和特性熒光池熒光強度檢測器IIA0lg

5、將上式展開! 3)3 . 2(! 2)3 . 2(3 . 2320AAAIIff! 3)3 . 2(! 2)3 . 2(3 . 2320AAAIIff 當當A0.05時，方括號中其它各項與第一項相比可時，方括號中其它各項與第一項相比可忽略不計，上式簡化忽略不計，上式簡化 =2.3 當當A0.05時，時，光源第一單色器液池檢測器第二單色器檢測器放大器及記錄器與分光光度計有兩點不同與分光光度計有兩點不同兩個單色器兩個單色器檢測器與激發光互成直角檢測器與激發光互成直角應用最廣泛的一種光應用最廣泛的一種光源，可發射源，可發射250800nm很強的連續光源很強的連續光源I固定固定獲得方法：先把第二單色器

6、的波獲得方法：先把第二單色器的波長固定，使測定的長固定，使測定的I I固定固定獲得方法：先把第一單獲得方法：先把第一單色器的波長固定，使激色器的波長固定，使激發的發的圖吸收峰熒光峰磷光峰xCxC)(1QCKIIf后前猝滅劑加入前的熒光強度猝滅劑加入后試液的熒光強度常數猝滅劑濃度)()()(QCMCMQCKf 比較CsCxIIfsfx00ffsffxfsfxIIIICsIICsCx熒光強度減去空白后若有試劑空白，測得的VB2 又稱核黃素，是一種生長又稱核黃素，是一種生長促進劑，常存在于動物肝臟、肉促進劑，常存在于動物肝臟、肉類、蛋黃、豆類、花生、蘑菇和類、蛋黃、豆類、花生、蘑菇和海藻中，海藻中， VB2易溶于強酸或強堿易溶于強酸或強堿性溶液。性溶液。 在低濃度情況下，在低濃度情況下，I= KC，I與與C呈線性關系，在呈線性關系，在pH67熒光最強熒光最強 在在430440nm藍光照射下，發出藍光照射下，發出綠色熒光，綠色熒光， em = 535 nm下測下測 I ，用標準曲線法測定，用標準曲線法測定CHHOHOHONNNNHCHCHCH OHCH22OOH CH C33缺VB2會得口角炎、舌炎、唇炎、脂溢性皮炎維生素維生素B2熒 光 形 成 機 制單重態第二激發態