1、中國礦業大學銀川學院鄰二氮菲分光光度法測定 微量鐵實驗王趙蒙2013/10/26摘要:本文采用鄰二氮菲分光光度法,該方法具有靈敏度高、操作簡單、重現性 好等特定,效果令人滿意摘要 :本文采用鄰二氮菲分光光度法,該方法具有靈敏度高、操作簡單、重現性 好等特定,效果令人滿意關鍵詞 :鄰二氮菲 分光光度法 微量鐵測量 吸光度目錄2. 結論與思考 . 73. 參考資料 . 7鐵與人類的生活密切相關, 也是維持人體新陳代謝必不可少的微量元素之一, 是構成血紅蛋白、 肌紅蛋白以及多種酶的重要成分, 若缺少鐵, 可影響血紅蛋白、 肌紅蛋白的合成, 使某些酶的活性降低, 引起人體生理上的變化, 導致免疫力下

2、降, 智力降低和機體抗感染能力降低等各種疾病的產生。 鐵廣泛的存在于各類動 物性和植物性食品當中,如動物的肝臟、全血、肉類、蛋類、棗、蘋果、山楂、 木耳、 海藻等食品中都含有大量鐵, 此外部分果汁、 牛奶、 酸奶中也含有微量鐵。 因此對于微量鐵的檢測尤為重要, 目前測定微量鐵的方法主要有分光光度法、 熒 光法、原子吸收法,本文采用鄰二氮菲分光光度法,鄰二氮菲是一種顯色劑,在 pH=2.09.0的溶液中能與 Fe 2+形成橙紅色絡合物,該方法具有靈敏度高、操作 簡單、重現性好等特定,效果令人滿意。1. 實驗部分1.1實驗原理鄰二氮菲 (Phen 是測定二價鐵離子的一種高高靈敏度、 高選擇性顯色試

3、劑, 在 pH=2.09.0的溶液中能與 Fe 2+形成橙紅色絡合物 Fe(Phen32+,反應方程式如 下: 此絡合物的 lgK 穩 =21.3(20 0C , 摩爾吸光系數 max =1.1×104L ·mol -1·cm -1。 穩定性常數 2.0×1021,鐵含量在 0.16g ·ml -1范圍內遵循比爾定律。在還原劑 存在下,顏色可以保持幾個月不變。鄰二氮菲可與 Fe 3+生成配位比為 3:1的淡藍色配合物,其穩定性常數為 1.2×1014,因此在使用鄰二氮菲測定鐵時,顯色前應先用還原劑如鹽酸羥胺 (NH 2OH ·

4、;HCl 或對苯二酚將 Fe 3+全部還原為 Fe 2+。 本文采用鹽酸羥胺為還原劑, 還原反應為:4Fe 3+2NH2OH=4Fe2+4H+N2O+H2O其顯色反應的適宜 pH 范圍很寬,且其色澤與 pH 無關,但酸度高時反應進 行較慢, 酸度低時二價鐵離子會水解, 所以為避免 Fe 2+水解及其他雜質的影響并 且保持較高的反應速率, 通常在 pH 約為 56的 HAc NaAc 緩沖介質中進行測定。利用分光光度法進行定量測定時,通常選擇吸光物質的最大吸收波長 max 作為入射波長, 因此時測得的摩爾吸收系數最大, 即測定的靈敏度最高。 測定吸 光物質在不同波長下的吸光度 A ,繪制 A 吸

5、收曲線,即可求得該吸光物質的最大吸收波長 max 。標準曲線法是定量測定中最常使用的方法。 先配制一系列不同濃度的被測物 質的標準溶液,在選定的條件下顯色,在最大吸收波長下測定其相應的吸光度, 繪制 A c 標準曲線。根據朗伯比爾定律:A=bc ,標準曲線應為一條斜率為 b 的過原點的直線。另取試液經適當處理后,在與上述相同的條件下顯色、測 定,由測得的吸光度從標準曲線上求出被測物質的含量。1.2儀器和試劑1. 儀器:722型分光光度計 50ml 容量瓶 7只 吸量管(10ml 兩支、 5ml 兩支、 1ml 一支 比色皿(10mm 、 20mm 各一 移液管(1ml 兩支、 2ml 一支、

6、5ml 一支 電子天平2. 試劑:鐵標準溶液(100.0g/ml鄰二氮菲溶液(1.5g/L鹽酸(6mol/L鹽酸羥胺溶液(100g/LHAc NaAc 緩沖溶液(pH=4.6未知濃度鐵待測液1.3實驗內容在序號為 16的 6只 50ml 容量瓶中用吸量管分別加入 0.00、 2.00、 4.00、 6.00、 8.00、 10.00ml10ug/ml鐵標準溶液,均加入 1.0ml 鹽酸羥胺溶液,搖勻放置 2min 后,各加入 2.0ml 鄰二氮菲溶液、 5ml HAc NaAc 緩沖溶液 , 加水稀釋,定容,搖 勻,放置 10min 。用吸量管加入 5.00ml 待測溶液于 7號容量瓶中,加入 1.0ml 鹽酸羥胺溶液, 搖勻放置 2min 后,加入 2.0ml 鄰二氮菲溶液、 5.0ml HAc NaAc 緩沖溶液,加水 稀釋,定容,搖勻,放置 10min 。使用 1cm 吸收池, 以 1號空白溶液為參比, 用