1、蘭盆花黃酮類(lèi)抗氧化作用烏日娜張維蘭孫福祥張昕原巴根那王志民李寶山 提要蘭盆花黃酮類(lèi)化合物在VB2MetNBT體系中對(duì)的IC50為2.7 g/ml，SC502.5 g/ml，在Vit.Ccoppercyt.c體系中.OHR50為14.6 g/ml在Fe2+/H2O2體系中能抑制MDA生成。其清熱的功效很可能與其清除、.OH、MDA的抗氧化作用有關(guān)。 關(guān)鍵詞蘭盆花黃酮；陰離子氧自由基；羥自由基；丙二醛 Antioxidation of Flavonoids of Scabiosa Comosa Fisch Urina, Zhang Weilan, Sun Fuxiang, et al Inner

2、Mongolia College of Traditional Mongolian Medicine,Tongliao 028041 AbstractFlavonoids compounds of Scabiosa comosa Fisch had antioxidation to (IC50=2.7g/ml,SC50=2.5g/ml) in the system of VB2MetNBT, to.OH (SC50=14.6 g/ml)in the system of Vit.C-copper-cyt.c,could inhibited the produce of MDA in the sy

3、stem of Fe2+/H2O2.Their antipyretic effect would have relation to the effect of scavenging 、.OH、MDA. Key WordsFlavonoids of Scabiosa comosa Fisch;Oxygen free radical;Hydroxyl free radical;Malondialdehyde 蒙藥材蘭盆花又稱(chēng)蒙古山蘿卜，為川續(xù)科植物窄葉蘭盆花(Scabiosa Comosa Fisch,et Suait)。具有清熱，清協(xié)日之功能，可用于肺熱、肝熱等證。現(xiàn)已證明，衰老、輻射損傷、腫瘤

4、、炎癥、缺血再灌注損傷與自由基有關(guān)。作者在前期工作的基礎(chǔ)上2，采用文獻(xiàn)3方法提取，分離，純化了蘭盆花黃酮類(lèi)物質(zhì)，并進(jìn)行了抗氧化實(shí)驗(yàn)。 1材料和方法 1.1試劑及儀器 維生素C(Vit.C)、蛋氨酸(Met)、四氮唑蘭(NBT)，蘆丁、皮素等均為國(guó)產(chǎn)分析純。細(xì)胞色素C(cyt.c)、硫化巴比妥酸(TBA)、四乙基甲烷(TEP)、脫氧核糖(DR)，均分Sigma公司產(chǎn)品。所用儀器為日立557型分光光度升，UV754型分光光度升。 1.2蘭盆花黃酮的提取 蘭盆花經(jīng)鑒定為正品。黃酮類(lèi)提取，分離，純化，按文獻(xiàn)3進(jìn)行，最后得到黃酮類(lèi)物質(zhì)(FSCF)用甲醇溶解定容為115 g/ml。 1.3自由基生成體系

5、生成體系采用VB2MetNBT法4，.OH生成體系采用Vit.CCoppercyt.c法5，MDA生成體系采用Fe2+H2O2DR法6。 2結(jié)果與討論 2.1蘭盆花經(jīng)75%乙醇水浴回流提取2次，合并濾液，減壓蒸干，石油醚脫色，正丁醇萃取，所得到物質(zhì)經(jīng)波長(zhǎng)掃描基本上和標(biāo)準(zhǔn)品蘆丁、皮素有相同的吸收峰(圖1)。黃酮類(lèi)化合物是泛指兩個(gè)芳環(huán)通過(guò)三碳鍵相互聯(lián)結(jié)而成的一系列化合物。天然黃酮類(lèi)系上述母體的衍生物。紫外光譜多數(shù)黃酮類(lèi)有兩個(gè)吸收峰，即帶在300400 nm，帶在240285 nm范圍內(nèi)。本文分離到FSCF的吸收峰基本上與蘆丁、皮素相同，說(shuō)明作者分離到物質(zhì)屬于黃酮類(lèi)化合物。 A.皮素 B.蘆丁 C.

6、蘭盆花黃酮 圖1蘭盆花黃酮類(lèi)波長(zhǎng)掃描 2.2FSCF對(duì)、.OH自由基的抑制和清除作用 在VB2MetNBT體系中加入不同量的FSCF后，隨著加入量的增加其抑制和清除作用增強(qiáng)。當(dāng)加入量為5.45 g/ml時(shí)，對(duì)的抑制率(I%)為82.9%，清除率(S%)為76.5%。抑制率達(dá)到50%時(shí)的藥物濃度(SC50)為2.5 g/ml。在Vit.CCoppercyt.c體系中加入35.9 g/ml時(shí)S%為87.0，SC50為14.6 g/ml(表1)。上述結(jié)果提示FSCF對(duì)的清除和抑制作用大于對(duì).OH的作用。 表1蘭盆花黃酮對(duì)O(-)/(*)2、.OH的抑制和清除作用 VB2MetNBT體系 Vit.Cc

7、oppercyt.c體系 C(g/ml) I% s% C(g/ml) S% O - - 3.6 25.9 0.15 1.4 13.4 7.2 29.6 0.91 32.8 41.3 14.4 48.1 1.82 41.4 49.7 21.6 61.1 3.63 65.7 65.4 28.7 75.9 5.45 82.9 76.5 35.9 87.0 IC50=2.7 g/ml；SC50=2.5 g/ml；SC50=14.6 g/ml 2.3FSCF對(duì)MDA生成的抑制作用 根據(jù)Fenton reaction原理，采用Fe2+H2O2DR體系產(chǎn)生的MDA，用TBA顯色，TEP做標(biāo)準(zhǔn)6，當(dāng)加入FSC

8、F后，隨著加入量增加，MDA生成量減少，當(dāng)加入量達(dá)5 mg時(shí)其S%可達(dá)89.1%，說(shuō)明FSCF有很強(qiáng)的抑制MDA生成作用。 生物體內(nèi)的自由基產(chǎn)生和清除失衡必然造成自由基堆積。超生理量的自由基均可誘導(dǎo)生物膜的損傷，導(dǎo)致代謝紊亂，產(chǎn)生疾病。因此尋找有效的自由基清除劑就成為當(dāng)前醫(yī)藥界研究的熱點(diǎn)。.OH是生物體內(nèi)產(chǎn)生途徑多，攻擊性強(qiáng)兩種自由基，是抗菌氧化的主要對(duì)象。已知許多蒙藥材含有黃酮類(lèi)化合物，而黃酮類(lèi)化合物具有抗氧化作用。因此提取、分離蒙藥材中黃酮類(lèi)物質(zhì)，對(duì)蒙藥抗氧化劑研究很有意義。蘭盆花清熱、清協(xié)日的作用很可能與其清除和抑制、.OH、MDA有關(guān)，有待深入研究。 作者單位:內(nèi)蒙古蒙醫(yī)學(xué)院中心實(shí)驗(yàn)室，通遼028041 參考文獻(xiàn) 1中國(guó)醫(yī)學(xué)百科全書(shū)編輯委員會(huì).中國(guó)醫(yī)學(xué)百科全書(shū)*蒙醫(yī)學(xué).上海：上海科技出版社，1992120 2李寶山.烏日娜，張昕原，等.5種蒙藥材清除自由基作用.時(shí)珍國(guó)藥研究，1997，8(4)308 3中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥用植物資源研究開(kāi)發(fā)所.中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥物研究所.中藥志().北京：人民衛(wèi)生出版社，198835 4陳奇主編.中藥藥理研究方法學(xué).北京：人民衛(wèi)生出版社，1993953 5王成蓮，劉莉.比色法測(cè)定抗壞血酸體系產(chǎn)生.OH自由基.生物化學(xué)與生物物理學(xué)進(jìn)展，1989，16(6)473 6Ahmad A,et