ICS65.020.20

CCSB22

DB32

江蘇省地方標準

DB32/T4056—2021

優良食味半糯粳稻品質

Qualityofsemi-glutinousjaponicaricewithgoodtaste

2021-06-03發布2021-07-03實施

江蘇省市場監督管理局發布

DB32/T4056-2021

I

DB32/T4056-2021

優良食味半糯粳稻品質

1范圍

本文件規定了優良食味半糯粳稻品質的術語和定義、質量要求、檢驗方法、檢驗規則及判定規則。

本文件適用于半糯粳稻品種的選育、鑒定、評價和推廣，適用于商品半糯粳稻的收購、加工和銷售。

2規范性引用文件

下列文件中的內容通過文中的規范性引用而構成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，

僅該日期對應的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本

文件。

GB1350稻谷

GB/T1354大米

GB/T5490糧食檢驗一般規則

GB/T5491糧食、油料檢驗扦樣、分樣法

GB/T15682糧油檢驗稻谷、大米蒸煮食用品質感官評價方法

GB/T17891—2017優質稻谷

GB/T21719稻谷整精米率檢驗法

GB/T22294糧油檢驗大米膠稠度的測定

NY/T83米質測定方法

NY/T593食用稻品種品質

NY/T2639稻米直鏈淀粉的測定分光光度法

3術語和定義

GB1350、GB/T1354、GB/T17891和NY/T593界定的以及下列術語和定義適用于本文件。

3.1

半糯粳稻semi-glutinousjaponicarice

稻米直鏈淀粉含量在2%~13%之間，含有低直鏈淀粉含量的Wx等位基因（如Wxmp、Wxmq、Wxmw

等）的粳稻。

3.2

優良食味半糯粳稻semi-glutinousjaponicaricewithgoodtaste

品質達到本標準4規定的質量要求、品質等級三級及以上的半糯粳稻。

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3.3

鑒別標記identificationmolecularmarker

用于鑒別低直鏈淀粉含量基因（如Wxmp、Wxmq、Wxmw等）、經PCR反應擴增出的特征性條帶或

序列，詳見附錄A。

4質量要求

4.1基本質量要求

雜質含量、水分含量、黃粒米含量、谷外糙米含量、色澤氣味等基本質量指標應符合GB1350粳

稻谷要求，不完善粒含量應≤3%，異品種率應≤2%。

4.2定等質量指標

在符合GB1350的基礎上，優良食味半糯粳稻的定等質量指標見表1。

表1優良食味半糯粳稻品質等級

等級

指標

一二三

整精米率/%≥67.061.055.0

透明度/級≤123

直鏈淀粉（干基）含量/%8.0~13.0

膠稠度/mm≥908070

食味值/分≥908580

注1：等級評定須在相同的水分條件下進行。

5檢驗方法

5.1低直鏈淀粉含量基因Wxmp、Wxmq、Wxmw的檢驗按照附錄A執行。

5.2不完善粒含量檢驗：按GB/T17891—2017，6.5執行。

5.3異品種率檢驗：按照GB/T17891—2017，附錄B執行。

5.4整精米率檢驗：按照GB/T21719執行。

5.5透明度檢驗：按照NY/T83執行。

5.6直鏈淀粉（干基）含量檢驗：按照NY/T2639執行。

5.7膠稠度檢驗：按照GB/T22294執行。

5.8食味值檢驗：按照GB/T15682執行。

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6檢驗規則

6.1扦樣、分樣按照GB/T5491執行。

6.2檢驗的一般規則按照GB/T5490執行。

7判定規則

7.1類型判定

含有低直鏈淀粉含量基因（如Wxmp、Wxmq、Wxmw等）的，判定為半糯粳稻。

7.2等級判定

達到本標準4.1規定的基本質量要求，表1中5項定級指標全部達到該等級要求的，則判定為該等

級半糯粳稻。5項定級指標中有1項達不到該等級質量要求的，逐級降至符合的等級；不符合最低等級

指標要求的，為非等級產品。基本質量要求有1項及以上不符合的，為非等級產品。

7.3等級分類

品質等級達三級及以上的判定為優良食味半糯粳稻，低于三級的判定為普通半糯粳稻。

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附錄A

（規范性）

低直鏈淀粉含量基因Wxmp、Wxmq和Wxmw分子標記檢測方法

A.1原理

低直鏈淀粉含量突變基因Wxmp、Wxmq和Wxmw是在Wxb基因的第4、第5和第6外顯子發生了單堿基突

變（圖A.1）。僅在第4外顯子第53位堿基發生G-A突變的為Wxmp基因，同時在第4外顯子第53位堿基發

生G-A突變和第5外顯子第52位堿基發生T-C突變的為Wxmq基因，僅在第6外顯子第62位堿基發生A/C突變

的為Wxmw基因。利用四引物擴增受阻突變體系PCR技術可針對第4和第6外顯子的變異位點進行分子標

記檢測；利用成對引物可針對第5外顯子的變異位點進行PCR擴增和序列分析，根據突變位點的有無和

類型，來判斷是否含有突變基因Wxmp、Wxmq和Wxmw。

圖A.1Wx基因的結構及Wxmp、Wxmq和Wxmp基因突變位點示意圖

A.2儀器設備

高速冷凍離心機、PCR擴增儀、超純水系統、組織研磨儀、瓊脂糖凝膠電泳系統及制膠附件、凝膠

成像系統、微量可調移液器（2uL、10uL、100uL、1000uL）。

A.3試劑與溶液

A.3.1DNA提取試劑

十六烷基三甲基溴化銨、三氯甲烷、異戊醇、異丙醇、乙二胺四乙酸二鈉、三羥甲基氨基甲烷、鹽

酸、氫氧化鈉、氯化鈉。

A.3.2PCR擴增試劑

DNA、引物、dNTP、Taq酶、10×PCR緩沖液、超純水。

A.3.3電泳試劑

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6×上樣緩沖液、DNA分子量標準、1×TAE電泳緩沖液、核酸染料。

A.3.4DNA回收試劑

凝膠回收試劑盒。

A.4DNA提取

稻谷出苗后在三葉期按單株取水稻葉片，提取基因組DNA。DNA提取方法及試劑配制方法按NT/T

1433執行。

A.5分子標記序列

A.5.1用于鑒定Wxmq或Wxmp的分子標記序列

利用四引物擴增受阻突變體系PCR技術可對Wxmq或Wxmp第4外顯子第53位堿基發生的G-A突

變進行分子標記鑒定，四引物序列為：

正向外引物（Wxmq/Wxmp-O-F）序列為5'-ATGTTGTGTTCTTGTGTTCTTTGCAGGC-3'，

反向外引物（Wxmq/Wxmp-O-R）序列為5'-GTAGATCTTCTCACCGGTCTTTCCCCAA-3'，

正向內引物（Wxmq/Wxmp-I-F）序列為5'-GGGTGAGGTTTTTCCATTGCTACAATCG-3'，

反向內引物（Wxmq/Wxmp-I-R）序列為5'-GTCGATGAACACACGGTCGACTCAAT-3'。

利用成對引物PCR擴增法可對Wxmq第5外顯子第52位堿基發生的T-C突變進行分子標記鑒定，

成對引物序列為：

正向引物（Wxmq-F）序列為5'-GGCTTCACGCAACGGCGCTACAAATAG-3'，

反向引物（Wxmq-R）序列為5'-CCATTCGCCTGCAAAGAACACAAGAAC-3'。

A.5.2用于鑒定Wxmw的分子標記序列

利用四引物擴增受阻突變體系PCR技術可對Wxmw第6外顯子第62位堿基發生的A/C突變進行分

子標記鑒定，四引物序列為：

正向外引物（Wxmw-O-F）序列為5'-GCTTAGCTTCCACTGGTGATTTCA-3'，

反向外引物（Wxmw-O-R）序列為5'-GTAGATGCCATTGGGCTGGTAGT-3'，

正向內引物（Wxmw-I-F）序列為5'-AACAACCCATACTTCAAAGGAACATC-3'，

反向內引物（Wxmw-I-R）序列為5'-TCTTGAGATCAATTGTAACTCCCCAT-3'。

A.6PCR反應體系

20μLPCR反應體系，包括2.0μL樣品DNA(10ng/μL)，2.0μL引物等摩爾混合液(4pmol/μL/每條)，

2.0μL10×PCR緩沖液(含MgCl2)，0.4μLdNTP(2.5mmol/L)，0.5μLTaq酶(5U/μL)，13.1μL超純水。

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A.7PCR反應程序

A.7.1Wxmq或Wxmp第4外顯子分子標記的PCR反應程序

95℃下預變性3min；95℃下變性30s，65℃退火30s，72℃下延伸1min，共33個循環；72℃延

伸5min，4℃保存。反應在PCR擴增儀（熱循環儀）上進行。

A.7.2Wxmq第5外顯子分子標記的PCR反應程序

95℃下預變性3min；95℃下變性30s，58℃退火30s，72℃下延伸2min，共33個循環；72℃延

伸5min，4℃保存。反應在PCR擴增儀（熱循環儀）上進行。

A.7.3Wxmw分子標記的PCR反應程序

95℃下預變性3min；95℃下變性30s，55℃退火30s，72℃下延伸1min，共33個循環；72℃延

伸5min，4℃保存。反應在PCR擴增儀（熱循環儀）上進行。

A.8PCR產物檢測

A.8.1瓊脂糖凝膠制備

在三角瓶中將瓊脂糖與1×TAE緩沖液按1.5%質量比混合，煮沸至瓊脂糖顆粒完全溶解，按1：10000

（體積比）加入核酸染料，搖勻后倒入制膠槽托盤板上，插上樣品梳，冷卻凝固后拔出樣品梳，備用。

A.8.2上樣樣品制備

在20uL的PCR擴增產物中加入4uL6×上樣緩沖液，混勻。

A.8.3電泳

將瓊脂糖凝膠放入電泳槽，加入1×TAE緩沖液至剛沒過凝膠，每個樣品孔加入5uL上樣樣品，以

20V/cm的電壓進行電泳，電泳20min。

A.8.4凝膠成像

將電泳后的瓊脂糖凝膠放于凝膠成像系統的紫外光源下進行PCR擴增產物觀察，拍照備用。用成

對引物Wxmq-F/R擴增得到的PCR條帶需割膠回收、回收試劑盒純化后，送測序公司進行序列分析。

A.9結果分析

A.9.1分子標記檢測結果分析

利用四引物Wxmq/Wxmp-O-F/O-R/I-F/I-R分子標記可擴增得到三種類型的DNA特征條帶（圖A.2），

擴增得到439bp和292bpDNA條帶的樣品，證明含第4外顯子突變位點；擴增得到439bp和200bpDNA

條帶的樣品，證明不含此突變位點，同時擴增得到439bp、292bp和200bpDNA條帶的樣品，證明此突

變位點為雜合位點。

利用成對引物Wxmq-F/R分別作為測序引物，可獲得DNA條帶的核苷酸序列（圖A.3），如第5外

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顯子第52位為C堿基，證明含此突變位點，如為T堿基，證明不含此突變位點，如為T/C堿基疊加，

證明此突變位點為雜合位點。

利用四引物Wxmw-O-F/O-R/I-F/I-R可擴增得到三種類型的DNA特征條帶（圖A.4）：擴增得到459bp

和301bpDNA條帶的樣品，證明含Wxmw突變位點；擴增得到459bp和209bpDNA條帶的樣品，證明

不含此突變位點，同時擴增得到459bp、301bp和209bpDNA條帶的樣品，證明此突變位點為雜合位點。

（M：分子量標準；1,7-10為含第4外顯子突變位點的特征條帶，2-6為不含第4外顯子突變位點的特征

條帶，11-12為雜合位點的特征條帶）

圖A.2Wxmp或Wxmq第4外顯子突變位點的分子標記檢測電泳圖譜

（2,4為含第5外顯子突變位點的特征序列，1,3,5-10為不含第5外顯子突變位點的特征序列，11-12為雜

合位點的特征序列）

圖A.3Wxmq第5外顯子突變位點的核苷酸序列分析

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