氣相色譜質譜-氣相色譜法測定姜、白術揮發油及包合物中天然冬蟲夏草的含量

柴油又稱油油或芳香油，通常存在于植物的油腺和皮脂腺中，一些溶解在樹脂中，并充滿于植物體的空腔中。揮發油常由各種不同的天然化學物質組成,如萜類、芳香類和脂肪酸類等,具有抗菌、抗病毒、提高機體免疫功能等作用,主要存在于唇形科、蕓香科、桃金娘科、姜科、菊科、樟科、傘科等植物中。干姜為姜科植物ZingiberofficinaleRosc.的根莖,氣香,味辛辣,性熱。能溫中散寒,回陽通脈,燥濕消痰。其揮發油的主要成分為莰烯、β-水芹烯和桉葉素等。白術為菊科植物白術AtractylodesmacrocephalaKoidz.的干燥根莖,性溫,味苦、甘。健脾益氣,燥濕利水。其揮發油的主要成分為蒼術酮等。筆者將附子理中丸研制成中藥緩釋片劑,該方中干姜和白術揮發油按前文報道的工藝提取,通過天然冰片的含量測定對揮發油的質量進行控制。1氣質聯用儀、差示量熱儀器干姜和白術購自沈陽市天益堂藥店,符合《中華人民共和國藥典》2000年版的要求。GCMS-QP5050A氣質聯用儀、GC-17A氣相色譜儀和DSC-60型差示量熱掃描儀均為日本島津生產;冰片(云南三木有限公司思茅香料廠),β-環糊精(天津市化學試劑公司)為實驗所需,其它試劑均為分析純。2方法和結果2.1從術中提取揮發油根據2000年版《中華人民共和國藥典》(一部)中附子理中丸項下干姜和白術的處方量,稱取白術1000g,干姜667g,適當粉碎后,混勻,加水淹沒過,浸泡1h,倒入10000ml的長頸圓底燒瓶內,再加6倍量的水,裝上冷凝裝置,電熱套加熱進行回流提取揮發油,時間為沸騰后提取6h,最后得到淡黃色的干姜和白術揮發油。2.2峰面積歸一化法計算的各個環節根據文獻報道,混合揮發油經氣相色譜-質譜(GC-MS)測試和圖譜驗證,選定峰面積大、清晰度高的13個峰,鑒定了峰面積歸一化法計算出的相對百分含量居前的前6個成分,依次為β-水芹烯(β-phellandrene)、桉葉素(eucalyptol)、蒼術酮(atractylon)、冰片(borneol)、姜烯(zingiberene)和牛兒醛(geranial),見圖1、圖2。冰片為第6號離子峰。2.3天然婆羅洲的含量在燃燒過程中2.3.1peg-20m因揮發油中含有天然冰片,所以采用氣相色譜測定冰片的含量。具體條件如下:柱為10%PEG-20M,Φ2.6mm×2.0m;柱溫150℃,氣化室溫度200℃,FID檢測器溫度200℃,載氣為氮氣,氮氣壓2.0kg/cm2,流速53ml/min。2.3.2標準曲線的制作精密稱取冰片標準品0.25g,用無水乙醇溶于25ml的容量瓶中,再分別吸取0.5、1.5、2.5、3.5、5.0ml,用無水乙醇溶于5ml的容量瓶中,配制成濃度為1.0、3.0、5.0、7.0、10.0mg/ml的標準溶液,進樣1μl,按氣相色譜條件進行操作。以冰片的濃度(C)為橫坐標,龍腦和異龍腦的總峰高(△H)為縱坐標進行線性回歸,回歸方程為:H=111463C+17306r=0.9997在1.0～10.0mg/ml的范圍內,濃度與總峰高呈良好的線性關系。2.3.3揮發油含量的測定精密稱取3批揮發油樣品0.25g,用無水乙醇溶于5ml的容量瓶中,配制成濃度為50mg/ml,進樣1μl,按氣相色譜條件進行操作,將所得的總峰高帶入標準曲線,由求得的濃度得出3批揮發油中天然冰片的含量分別為6.3%、11.6%和12.6%。冰片標準品與揮發油樣品中天然冰片的色譜圖見圖3、圖4。2.4油包裝材料的制備2.4.1最佳工藝的確定根據文獻,通過對飽和溶液法和研磨法的優化篩選,結合工業上的特點,選擇最佳工藝為75%的乙醇混合β-CD((2∶1,V/W),滴入用無水乙醇稀釋的揮發油溶液(1∶1,V/V),β-CD與揮發油配比為6∶1(W/V),邊滴邊研磨,滴完后,再研磨30min,40℃下干燥,即可。2.4.2回汁添加量為5.將揮發油β-CD包合物通過做DSC圖譜與淀粉、β-CD及其混合物的DSC圖譜比較,結果見圖5。從圖5可知,β-環糊精和淀粉的DSC圖(a與e)不同,但它們二者與揮發油混合物的DSC圖(c與d)在大于120℃處都有一個尖峰出現,說明此尖峰是揮發油自身的DSC圖譜峰,當形成包合物后,尖峰消失(見b),確證β-環糊精與揮發油的包合物已經產生。2.4.3揮發油-cd包合物所含天然晶片的制備稱取3份揮發油各0.18g,制得3批揮發油β-CD包合物后,采取水蒸氣蒸餾方法獲得的揮發油分別收集于3個10ml容量瓶內,無水乙醇定容,按上述氣相條件操作,由標準曲線得揮發油β-CD包合物所含天然冰片分別為5.8、5.7、5.0mg。2.4.4揮發油-cd包合物含量的測定稱取2.4.3項下的3份揮發油,按上述氣相色譜條件測出其中所含的天然冰片的含量,則揮發油β-CD包合物所含天然冰片的含量于揮發油中所含天然冰片含量的比,即為β-CD包含物中揮發油的包合率,結果平均包合率為93.4%。3貯藏過程監控問題3.1因為天然冰片由龍腦和異龍腦組成,所以本文天然冰片的含量測定以龍腦與異龍腦的總和進行計算。從上述揮發油中的天然冰片所測的含量可知,干姜和白術揮發油中天然冰片含量較高,但每一批冰片所含的量差別較大,這主要與藥材的采收時間、產地、貯存時間、保留水分的多少等有關。隨著GAP標準的廣泛執行和藥材質量的進一步監控,這些問題最終將會得到很好的解決。3.2冰片的標準曲線采用龍腦與異龍腦的總高度作為縱坐標,是因為龍腦與異龍腦的峰面積值太大,所得的標準曲線誤差會大些。而龍腦與異龍腦的總高度數值相對較小,其與藥物濃度所得的標準曲線準確度則會相應提高。3.3揮發油的包合使得揮發油從液態轉為固態,提高了揮