細菌培養(yǎng)與革蘭氏染色第一頁，共二十三頁，2022年，8月28日1.細菌革蘭氏染色法了解革蘭氏染色原理

掌握革蘭染色的方法

Clicktoaddtitleinhere12一.實驗?zāi)康牡诙?，共二十三頁?022年，8月28日二、實驗材料菌種：大腸桿菌、土壤提取菌染料：草酸銨結(jié)晶紫液、盧戈氏碘液95％乙醇、番紅染液其他：顯微鏡、載玻片、接種環(huán)、酒精燈、無菌生理鹽水第三頁，共二十三頁，2022年，8月28日三、基本原理革蘭氏染色法是細菌學中廣泛使用的一種鑒別染色法。1884年由丹麥醫(yī)師Gram創(chuàng)立。細菌先經(jīng)堿性染料結(jié)晶紫染色，再經(jīng)碘液媒染后，用酒精脫色，在一定條件下有的細菌紫色不被脫去，有的可被脫去，因此可把細菌分為兩大類，前者叫做革蘭氏陽性菌（G+），后者為革蘭氏陰性菌（G-）。第四頁，共二十三頁，2022年，8月28日為觀察方便，脫色后再用一種紅色染料，如堿性番紅等進行復(fù)染。陽性菌仍帶紫色，陰性菌則被染上紅色。一般認為革蘭氏陽性菌體內(nèi)含有特殊的核蛋白質(zhì)鎂鹽與多糖的復(fù)合物，它與碘和結(jié)晶紫的復(fù)合物結(jié)合很牢，不易脫色，陰性菌復(fù)合物結(jié)合程度低，吸附染料差，易脫色，這是染色反應(yīng)的主要依據(jù)?；驹淼谖屙?，共二十三頁，2022年，8月28日四、方法與步驟操作過程如下：涂片→干燥→固定→草酸銨結(jié)晶紫染色（約1min）→水洗→盧戈氏碘液媒染（約1min）→水洗→95%乙醇脫色（約30s）→水洗→番紅復(fù)染（1min）→水洗→干燥→鏡檢第六頁，共二十三頁，2022年，8月28日方法與步驟第七頁，共二十三頁，2022年，8月28日關(guān)鍵點：

嚴格掌握乙醇脫色程度，如脫色過度，則陽性菌被誤染為陰性菌；而脫色不夠時，陰性菌被誤染為陽性菌；

菌齡也影響染色結(jié)果，如陽性菌培養(yǎng)時間很長，或已死亡及部分自行溶解了，都常呈陰性反應(yīng)。方法與步驟第八頁，共二十三頁，2022年，8月28日五、實驗內(nèi)容1.對大腸桿菌、土壤提取菌分別進行革蘭氏染色。2.對大腸桿菌、土壤提取菌混合涂片進行革蘭氏染色。第九頁，共二十三頁，2022年，8月28日革蘭氏陰性（G-）實驗內(nèi)容第十頁，共二十三頁，2022年，8月28日枯草芽孢桿菌（G+）實驗內(nèi)容第十一頁，共二十三頁，2022年，8月28日陽性菌第十二頁，共二十三頁，2022年，8月28日實驗內(nèi)容第十三頁，共二十三頁，2022年，8月28日一種未知的霉菌第十四頁，共二十三頁，2022年，8月28日二、細菌培養(yǎng)法實驗?zāi)康?、學習和掌握細菌分離與培養(yǎng)的各種基本技術(shù)2、進一步熟悉和掌握微生物的無菌操作技術(shù)第十五頁，共二十三頁，2022年，8月28日實驗儀器和材料1、儀器：接種環(huán)、酒精燈、記號筆、試管架等2、材料：普通瓊脂平板培養(yǎng)基、斜面培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基、大腸桿菌菌落、土壤提取菌落第十六頁，共二十三頁，2022年，8月28日2.細菌培養(yǎng)法平板劃線法斜面培養(yǎng)法液體培養(yǎng)法本實驗的細菌培養(yǎng)法細菌培養(yǎng)第十七頁，共二十三頁，2022年，8月28日平板劃線接種法步驟：

標記→滅菌接種環(huán)→取菌種→分離劃線接種細菌（分為四個區(qū)域）→劃線完畢，放入恒溫箱培養(yǎng)第十八頁，共二十三頁，2022年，8月28日平板劃線接種法恒溫箱培養(yǎng)第十九頁，共二十三頁，2022年，8月28日斜面培養(yǎng)基接種法步驟：標記滅菌接種環(huán)兩斜面并持接種細菌接種完畢，恒溫培養(yǎng)（注意無菌操作）第二十頁，共二十三頁，2022年，8月28日斜面培養(yǎng)基接種法第二十一頁，共二十三頁，2022年，8月28日液體培養(yǎng)基接種法步驟：標記滅菌接種環(huán)