色譜法定量分析方法及原理l=J定量分析就是要確定樣品中某一組分的準確含量。色譜定量分析與絕大部分的儀器定量分析一樣，是一種相對定量方法，而不是絕對定量方法。它是根據儀器檢測器的響應值與被測組分的量，在某些條件限定下成正比的關系來進行定量分析的。也就是說，在色譜分析中，在某些條件限定下，色譜峰的峰高或峰面積(檢測器的響應值)與所測組分的數量(或濃度)成正比。一、 原理色譜法定量分析的根據是組分i通過檢測器時產生的信號大小，即組分i的峰面積A(或組分i的峰高h)與進入檢測器的組分i的質量m成正比A-mi i i ii或h.^m.，由此得到：A=Sm；h=Sm或者m=A/S=Af；m=h/S=hfiiiii(h)i iiiiiiii(h)ii(h)式中a. 組分i的峰面積，mm2；mi 組分i進入檢測器的量，g或mol數；h, 組分i的峰高，mm；s. 組分i的絕對響應值；fi 組分i的絕對校正因子；Si(h) 組分i的峰高絕對響應值；fi(h) 組分i的峰高絕對校正因子。二、 色譜定量分析的方法1、歸一化法定量分析。歸一化法定量是色譜分析法中常用而且簡單準確的方法。歸一化法只適用于樣品中所有組分都能從色譜柱流出并被檢測器檢出，且都在線性范圍內，同時又能測定或查出所有組分相對校正因子的樣品。各組分含量的計算公式為：X0X100%fAi式中，X.，f.，A.分別為試樣中被測組分的百分含量、相對質量校對因子和色譜峰面積，這個式子也稱為面積校正歸一化法。歸一化法定量的特點是比較簡單、方便，其結果與進樣量無關，儀器的操作條件稍有變動對結果影響不大。當所有組分的校正因子都相同時，上式可簡化為：X. 4x100%'=ZA.I此式又稱為面積歸一化法，在FID上，各種烴類的二都很相近，在計算時采用此式給定量分析帶來了極大的方便。2、 內標法。內標法即是將一種純物質作為標準物加入到待測樣品中，進行色譜定量的一種方法。內標法是色譜分析法中常用而且準確的定量方法，進樣量的準確性和操作條件的波動對測定結果的影響較小，此法不要求出全峰，但待測的組分必須出色譜峰。應用內標法定量必須向樣品中加入一定量的內標物質純品，此內標物質應該是樣品中不存在的，且與待測組分性質相近的純物質，加入的內標物質量應與待測物質的質量分數相近，內標物的色譜峰應位于待測組分峰的附近，或位于幾個待測組分峰的中間，并與待測組分峰完全分離。具體方法是：準確稱取一定質量的內標物質，加入到準確稱取的一定質量的樣品中去，混合均勻，在一定的色譜操作條件下，將混合物注入色譜儀，分離出峰后，分別測量組分i和內標物S的峰面積或峰高，組分含量的計算為：Xj=m］：x100%式中，ms，m分別為加入內標物的量和試樣的質量；i代表被測峰；E代表內標峰。內標法定量的特點是準確，沒有歸一化法的那些限制，只要所需分析組分在選定色譜條件下有信號，而且峰面積可測量并在線性范圍內即可。對內標物的要求是既能和被測樣品互溶，又能和被測的各組分在色譜圖上分開，內標物的濃度應與被測組分濃度相近。3、 外標法。外標法又稱標準工作曲線法或已知樣校正法。此法是先配制一系列不同濃度的標樣進行色譜分析，作出峰面積對濃度的工作曲線，在嚴格相同的色譜條件下，注射相同量或已知量的試樣進行色譜分析，求出峰面積后根據工作曲線求出被測組分的含量。若工作曲線通過原點，可配制與所測組分濃度相近的一個標樣進行色譜分析。在相同進樣量的條件下，被測組分含量可直接用下式計算:X=EAiae此方法的特點是操作簡單，計算方便，但要求分析組分與其他組分完全分離、色譜分析條件也必須嚴格一致；而且標準物的色譜純度要求高（或用準確知道濃度的標準物，配置濃度時進行折算）。當配制標樣的化合物與所測組分不同時，則峰面積必須進行校正：Xj=XEfAi式中，Xi,fi,Ai分別為被測組分含量、相對校正因子及峰面積；%,%%分別為外標物的濃度、相對校正因子及峰面積。色