基本操作技術與應用2010年2月23日-3月9日1精選PPT基本操作技術與應用2010年2月23日-3月9日1精選PPT基本操作技術與應用天然藥物活性成分的研究（了解內容）天然產物的提取方法（掌握內容）天然產物的分離方法（掌握內容）色譜分離法（掌握內容）天然產物的結構測定（熟悉內容）2精選PPT基本操作技術與應用天然藥物活性成分的研究（了解內容）2精選P研究途徑臨床調查收集原料成分提取分離成分預試驗活性篩選文獻資料調研結構確定動物試驗臨床試驗3精選PPT研究途徑臨床調查收集原料成分提取分離成分預試驗活性篩選文獻資提取的基本知識什么是提取？提取的思路（已知成分、未知成分）提取前預處理（一般過2號篩為宜，同時注意酶的影響）基本原理—相似相溶影響因素（溶劑的選擇、方法選擇、時間、溫度、粉碎度等）極性4精選PPT提取的基本知識什么是提取？4精選PPT極性常用溶劑極性排列順序：石油醚<苯<無水乙醚<氯仿<乙酸乙酯<正丁醇<丙酮<乙醇<甲醇<水官能團的極性排列順序：烷烴<鹵代烴<醚<酯<酮<醛<酰胺<胺<醇<水<酚<羧酸5精選PPT極性常用溶劑極性排列順序：5精選PPT溶劑分類與特點（一）水：價廉，安全，對細胞的穿透能力強。適用于無機鹽、糖類、鞣質、氨基酸與蛋白質、有機酸鹽、生物堿鹽、苷類化合物的提取。親水性有機溶劑：甲醇、乙醇、丙酮等。特點：可與水任意比混溶，毒性低、價廉、回收方便，對細胞的穿透能力強。適用于多種成分的提取，其中，乙醇又稱為“萬能溶劑”。6精選PPT溶劑分類與特點（一）水：價廉，安全，對細胞的穿透能力強。6精溶劑分類與特點（二）親脂性有機溶劑：石油醚、乙醚、苯、氯仿、乙酸乙酯等。特點：選擇性強、回收方便、但易燃、有毒、價貴。適用于揮發油、油脂、葉綠素、樹脂、游離生物堿、苷元等成分的提取。7精選PPT溶劑分類與特點（二）親脂性有機溶劑：石油醚、乙醚、苯、氯仿、提取技術與方法（一）溶劑法：僅限于低分子量、含量高的成分的提取。根據“相似相溶”的原則進行提取。（二）其他方法根據化合物的特殊性質選擇特殊的提取方法。水蒸氣蒸餾法升華法共9種方法8精選PPT提取技術與方法（一）溶劑法：共9種方法8精選PPT溶劑提取法浸漬法滲漉法煎煮法回流法連續回流法超聲提取法超臨界流體萃取法9精選PPT溶劑提取法浸漬法9精選PPT浸漬法分為冷浸法（室溫）和溫浸法（40~60℃）。常用溶劑：水、酸水、堿水、稀醇等。適用于遇熱易被破壞的成分或含大量淀粉、粘液質、果膠、樹膠等多糖類成分的提取。缺點：提取時間長、溶劑用量大、提取效率低、用水作溶劑時易發霉。10精選PPT浸漬法分為冷浸法（室溫）和溫浸法（40~60℃）。10精選P滲漉法適用范圍與提取溶劑同浸漬法。步驟：浸潤、裝筒、排氣、浸漬、滲漉。優點：提取效率較高。缺點：提取時間長、溶劑用量大。11精選PPT滲漉法適用范圍與提取溶劑同浸漬法。11精選PPT煎煮法藥房及家庭中最為常用的中藥提取方法。常用溶劑：水適用于對熱穩定的成分的提取。含多糖類成分量大的藥材因煎煮后呈糊狀，不宜用本法。12精選PPT煎煮法藥房及家庭中最為常用的中藥提取方法。12精選PPT回流法最常用的提取方法。對熱不穩定的成分不適用。提取效率較高。選擇什么試劑？適用于什么成分？13精選PPT回流法最常用的提取方法。13精選PPT連續回流法浸漬法和回流法的特點兼有。對熱不穩定的成分慎用。提取時間長。14精選PPT連續回流法浸漬法和回流法的特點兼有。14精選PPT超聲提取法利用超聲波振動產生的能量在提取液中產生“空化現象”提取有效成分。優點：操作簡便，幾乎適用于各種溶劑的提取，提取時間短，效率高。15精選PPT超聲提取法利用超聲波振動產生的能量在提取液中產生“空化現象”超臨界流體萃取法超臨界流體（supercriticalfluid，SF）：當某物質處于臨界溫度和臨界壓力以上時可形成一種既非液體又非氣體的單一相態，將這一狀態的物質稱為超臨界流體。目前最常用的是CO2-SFE技術。16精選PPT超臨界流體萃取法超臨界流體（supercriticalfl水蒸氣蒸餾法適用于具有揮發性，可與水蒸氣一起蒸餾出來，與水不反應，又難溶于水的化合物的提取。17精選PPT水蒸氣蒸餾法適用于具有揮發性，可與水蒸氣一起蒸餾出來，與水不升華法適用于有升華性，升華溫度適當，遇熱較穩定的化合物的提取。可分為常壓升華和減壓升華兩種。18精選PPT升華法適用于有升華性，升華溫度適當，遇熱較穩定的化合物的提取關于提取問題小結極性（溶劑的極性、化合物的極性）提取溶劑的分類與特點提取的原理提取的方法與適用范圍19精選PPT關于提取問題小結極性（溶劑的極性、化合物的極性）19精選PP分離方法（一）分離前處理（二）結晶與重結晶（三）分離方法系統溶劑分離法兩相溶劑萃取法沉淀法

6.透析法

9.色譜法吸附法（補充）7.分餾法鹽析法（補充）8.升華法20精選PPT分離方法（一）分離前處理20精選PPT分離前處理提取液一般體積較大，目標成份濃度低，需要先濃縮提高濃度，然后再進行分離工作。濃縮的方法常壓蒸餾減壓蒸餾薄膜蒸發21精選PPT分離前處理提取液一般體積較大，目標成份濃度低，需要先濃縮提高常壓蒸餾適用于有效成分受熱不易分解，低沸點有機溶劑（氯仿、乙醚、石油醚等）的提取液的濃縮。22精選PPT常壓蒸餾適用于有效成分受熱不易分解，低沸點有機溶劑（氯仿、乙減壓蒸餾適用于溶劑沸點高，有效成分受熱易分解的提取液的濃縮。23精選PPT減壓蒸餾適用于溶劑沸點高，有效成分受熱易分解的提取液的濃縮。薄膜蒸發濃縮效率高，受熱時間短，特別適用于濃縮水或稀醇為溶劑的提取液。24精選PPT薄膜蒸發濃縮效率高，受熱時間短，特別適用于濃縮水或稀醇為溶劑結晶與重結晶（一）結晶的條件（掌握)（二）結晶溶劑的選擇

(熟悉）（三）制備結晶的方法

1.晶核的形成

2.晶鏈的延長（四）結晶純度的判斷(重點掌握）25精選PPT結晶與重結晶（一）結晶的條件（掌握)25精選PPT結晶的條件被分離化合物純度高；呈過飽和狀態；最適結晶溫度：5~10℃；充分放置。26精選PPT結晶的條件被分離化合物純度高；26精選PPT結晶溶劑的選擇（理想溶劑）一不與結晶物質起化學反應；雜質與結晶物質在溶劑中的溶解度相差大；目的物在溶劑中的溶解度隨溫度不同有顯著差別；溶劑沸點不宜太高或太低（可在60℃）；溶劑沸點低于化合物的熔點；溶劑沸點低于結晶溫度；能給出較好的晶形，無劇毒。27精選PPT結晶溶劑的選擇（理想溶劑）一不與結晶物質起化學反應；27精選結晶溶劑的選擇二常用溶劑：甲醇、乙醇、丙酮、氯仿、乙酸乙酯等。其他不常用溶劑：二甲基亞砜、乙腈、甲酰胺、二甲基甲酰胺、冰醋酸等。混合溶劑？如何選擇與使用水--乙醇；乙醇—乙醚；石油醚—苯；水—丙酮；乙醚—乙酸乙酯—乙醇等。28精選PPT結晶溶劑的選擇二常用溶劑：甲醇、乙醇、丙酮、氯仿、乙酸乙結晶純度的判斷一定的晶形、均勻的色澤；有固定的熔點，熔距較小；TLC：經過三種以上展開劑展開得均一圓形的斑點。29精選PPT結晶純度的判斷一定的晶形、均勻的色澤；29精選PPT系統溶劑分離法目前是研究成分不明的天然產物的最常用方法。選擇3~4種不同極性的溶劑，由低極性到高極性分步對粗提物進行分離。手續復雜、對化學性質不穩定，容易引起分解、異構化的產物應特別注意。30精選PPT系統溶劑分離法目前是研究成分不明的天然產物的最常用方法。30兩相溶劑萃取法（一）基礎知識原理分配系數與分離因子（二）萃取方法31精選PPT兩相溶劑萃取法（一）基礎知識31精選PPT基礎知識一、原理利用混合物中各成分在兩種互不混溶的溶劑中分配系數不同而達到分離的目的。二、分配系數與分離因子分配系數（K）K=C有機相/C水相分離因子（β）β=KA/KB32精選PPT基礎知識一、原理32精選PPT假設KA=10，KB=0.1，則β=100當β≥100時，一次簡單的萃取就可以完成分離；當10<β≤100，需萃取10~12次；當β≤2時，需要完成100次以上的萃取；當β≈1時，理論上無法完成萃取分離的目的。33精選PPT假設KA=10，KB=0.1，則β=10033精選PPT萃取方法簡單萃取法（掌握）pH梯度萃取法（重點掌握）（補充）逆流連續萃取法（了解）逆流分溶法（countercurrentdistributionCCD)（了解）液滴逆流分配法（dropletcountercurrentchromatogrophyDCCC）（了解）34精選PPT萃取方法簡單萃取法（掌握）34精選PPT簡單萃取法適用于分離因子較大的情況的分離。提取液的密度最好在1.1~1.2。“等量多次”原則（掌握）乳化現象（熟悉）35精選PPT簡單萃取法適用于分離因子較大的情況的分離。35精選PPT等量多次原則證明設Vml水中含有Wg溶質，用Sml有機溶劑萃取后，在水中尚有W1g溶質沒有被萃取出來，則分配系數KD為：整理得36精選PPT等量多次原則證明設Vml水中含有Wg溶質，用Sml有機溶劑萃第2次再用Sml有機溶劑萃取水中的溶質后仍有W2g沒有被萃取出來，則因此，若每次用Sml有機溶劑萃取，最后剩在Vml水中的溶質Wn為若一次用nSml有機溶劑萃取，剩余在水中的溶質37精選PPT第2次再用Sml有機溶劑萃取水中的溶質后仍有W2g沒有被萃取結論用總量相同的溶劑，分多次萃取的效率要比1次萃取的效率高。38精選PPT結論用總量相同的溶劑，分多次萃取的效率要比1次萃取的效率高。乳化現象產生原因天然產物中含有皂苷、蛋白質、植物膠質、鞣質等表面活性物質；兩相互不相溶的溶劑；振搖；少量輕質的沉淀等。39精選PPT乳化現象產生原因39精選PPT解決方案較長時間靜置；2.將乳狀液分出，再換新溶劑萃取；3.將乳狀液加溫或冷凍；4.將乳狀液抽濾；5.加入少量電解質（如NaCl等）；6.加入少量低級醇（如乙醇、戊醇等）。40精選PPT解決方案40精選PPTpH梯度萃取法是分離酸性、堿性、兩性有機化合物常用的手段。原理：由于溶劑系統PH的改變，改變了化合物的存在狀態（游離型或解離型），從而改變了化合物在溶劑系統中的分配系數。酸性化合物：pH=pka-2游離；

pH=pka+2

解離。堿性化合物相反。41精選PPTpH梯度萃取法是分離酸性、堿性、兩性有機化合物常用的手段。4以酸性化合物HA為例酸性化合物在水中電離：電離常數取負對數42精選PPT以酸性化合物HA為例酸性化合物在水中電離：電離常數取負對數4逆流連續萃取法操作簡便；萃取完全，不易乳化；適合于兩相互不混溶的溶劑的密度相差較大的系統的分離。43精選PPT逆流連續萃取法操作簡便；43精選PPT逆流分溶法（CCD)適用于性質相似的異構體或同系物的分離。特點：條件溫和，樣品易于回收。注意：溶質濃度越低分離效果越好。44精選PPT逆流分溶法（CCD)適用于性質相似的異構體或同系物的分離。4液滴逆流分配法（DCCC）CCD的改進方法，不易乳化。特別適用于皂苷類化合物的分離。需要動力泵。45精選PPT液滴逆流分配法（DCCC）CCD的改進方法，不易乳化。45精沉淀法可以分為酸堿沉淀、試劑沉淀、鉛鹽沉淀。酸堿沉淀：適用于酸性、堿性物質的分離。試劑沉淀沉淀試劑沉淀有機溶劑沉淀3.鉛鹽沉淀中性醋酸鉛堿性醋酸鉛46精選PPT沉淀法可以分為酸堿沉淀、試劑沉淀、鉛鹽沉淀。46精選PPT吸附法（補充）選擇適宜吸附劑（如硅膠、Al2O3、活性炭）去除雜質或選擇性篩選目標成分。如用活性炭去除在提取液中的葉綠素等脂溶性成分。47精選PPT吸附法（補充）選擇適宜吸附劑（如硅膠、Al2O3、活性炭）鹽析法（補充）在水提液中加入NaCl、MgCl2等無機鹽促進極性稍大組分析出的方法。如鹽酸小檗堿易溶于熱水，在冷水中溶解度小，但在結晶冷卻過程中不易析出結晶，可通過加入NaCl固體的方法促進析晶。48精選PPT鹽析法（補充）在水提液中加入NaCl、MgCl2等無機鹽促進透析法49精選PPT透析法49精選PPT色譜法吸附色譜(adsorptionchromatography)分配色譜/液相色譜(patitionchr.)離子交換色譜(ionexchangechr.)大孔吸附樹脂法(macro-reticularresinemethod)凝膠色譜法(gelfiltrationchr.)氣相色譜法(gaschromatography)高效液相色譜（highperformanceliquidchromatography)50精選PPT色譜法吸附色譜(adsorptionchromatogra吸附色譜基本原理：利用混合物中不同組分分子、溶劑分子與吸附劑表面分子間的作用力不同，引起不同的吸附性能而進行分離。吸附劑色譜結果操作方式51精選PPT吸附色譜基本原理：利用混合物中不同組分分子、溶劑分子與吸附劑

極性吸附劑：硅膠、氧化鋁吸附劑非極性吸附劑：活性炭聚酰胺硅膠：微酸性，不宜直接用于堿性物質的分離。顆粒表面的硅醇基起吸附作用，需在105~110℃活化。氧化鋁：微堿性，不宜直接用于含醛基、羰基、酯基化合物的分離。活性炭：多用于水提液中脂溶性雜質的分離。52精選PPT極性吸附劑：硅膠、4、聚酰胺：酰胺基可以與羥基、羧基、硝基等形成氫鍵。分離規律（P67）

：氫鍵越多，吸附越牢，Rf越小。如易形成分子內氫鍵，Rf增大。芳香化程度越高，吸附越牢。各種溶劑的洗脫能力：水<甲醇<丙酮<NaOH水溶液<甲酰胺<二甲基甲酰胺<尿素水溶液53精選PPT4、聚酰胺：酰胺基可以與羥基、羧基、硝基等形成氫鍵。53精選操作方式薄層色譜（thinlayerchromatography,TLC)

操作步驟：制板點樣展開定位柱色譜操作步驟：吸附劑與洗脫劑選擇裝柱上樣洗脫分離注意活化54精選PPT操作方式薄層色譜（thinlayerchromatogr分配色譜（一）基本原理：根據被分離物質在兩相中的溶解性不同而進行分離（CCD）。（二）正相色譜與反相色譜（掌握）（三）支持劑：硅藻土、纖維素粉、濾紙、含水17%的硅膠等。（四）操作方式

1.紙層析(PC)2.TLC3.柱層析55精選PPT分配色譜（一）基本原理：根據被分離物質在兩相中的溶解性不同而正相色譜：固定相的極性大于流動相的極性。固定相多為強極性溶劑，如水、緩沖液等。反相色譜：固定相的極性小于流動相的極性。固定相多為親脂性溶劑。56精選PPT正相色譜：固定相的極性大于流動相的極性。固定相多為強極性溶劑支持劑的要求無吸附作用；不溶于兩相溶劑中；不與被分離物質發生化學反應；并能吸著一定的固定相；可以使流動相自由通過而不改變其組成。57精選PPT支持劑的要求無吸附作用；57精選PPT離子交換色譜（IEC）（一）分離原理：利用離子交換樹脂在水溶液中可以解離，并與溶液中其它離子產生可逆性的交換，達到分離離子型化合物的目的。（二）離子交換樹脂（熟悉）（三）分離結果（重點掌握）（四）離子交換樹脂的選擇（了解）（五）操作（了解）58精選PPT離子交換色譜（IEC）（一）分離原理：利用離子交換樹脂在水溶離子交換樹脂陽離子交換樹脂：能與溶液中陽離子進行交換，按交換活性分為強酸型陽離子交換樹脂和弱酸型陽離子交換樹脂兩類。如：RSO3H+NaClRSO3Na+HCl陰離子交換樹脂：能與溶液中陰離子進行交換，按交換活性分為強堿型陰離子交換樹脂和弱堿型陰離子交換樹脂兩類。如：RNOH+NaClRNCl+NaOH59精選PPT離子交換樹脂陽離子交換樹脂：能與溶液中陽離子進行交換，按交換樣品強酸型陽離子交換樹脂酸性及中性物質強堿型陰離子交換樹脂稀NH4OH洗脫洗脫液（堿性及兩性）

中性物質稀堿洗脫洗脫液（酸性物質）強堿型陰離子交換樹脂堿性物質稀酸洗脫洗脫液（兩性物質）流出液流出液流出液60精選PPT樣品強酸型陽離子交換樹脂酸性及中性物質強堿型陰離子交換樹脂稀離子交換樹脂的選擇根據被分離物質選擇樹脂，如分離生物堿選擇陽離子交換樹脂。根據被分離物質的解離常數選擇，如堿性強選擇弱酸型陽離子交換樹脂。根據化合物大小選擇，如分離大分子化合物可選擇交聯度3~6%的樹脂。61精選PPT離子交換樹脂的選擇根據被分離物質選擇樹脂，如分離生物堿選擇陽操作預處理：水浸泡（溶脹）酸堿處理（洗去雜質）水洗至中性裝柱上樣與洗脫再生62精選PPT操作預處理：水浸泡（溶脹）酸堿處理（洗去雜質）大孔吸附樹脂法

主要用于水溶性化合物的提取分離。大孔吸附樹脂（吸附性與范德華力、氫鍵有關）大孔吸附樹脂類型影響因素：1.分子極性大小；2.分子體積大小；3.pH值的影響。預處理與再生63精選PPT大孔吸附樹脂法主要用于水溶性化合物的提取分離。63精選PP大孔吸附樹脂的特點吸附性和篩選性相結合的分離材料選擇性好吸附容量大機械強度高再生處理方便吸附速度快解吸容易不易受到無機鹽等離子或小分子化合物的影響64精選PPT大孔吸附樹脂的特點吸附性和篩選性相結合的分離材料64精選PP大孔吸附樹脂類型非極性吸附樹脂（芳香族吸附劑）：以苯乙烯為單體，二乙基苯為交聯劑。中極性吸附樹脂（脂肪族吸附劑）：以甲基丙烯酸酯作為單體和交聯劑。極性吸附樹脂：結構中含有硫氧、酰胺、氮氧等極性基團。65精選PPT大孔吸附樹脂類型非極性吸附樹脂（芳香族吸附劑）：以苯乙烯為單預處理與再生預處理：水洗、溶脹后用甲醇或95%的乙醇浸泡24小時，至洗滌液加水后不呈白色渾濁，最后用蒸餾水洗掉有機溶劑。再生：蒸餾水、甲醇、乙醇反復洗滌，必要時可用3%的鹽酸水溶液或3%的氫氧化鈉溶液再生。66精選PPT預處理與再生預處理：水洗、溶脹后用甲醇或95%的乙醇浸泡24凝膠色譜法（GFC）原理：“分子篩”凝膠的種類1.葡聚糖凝膠（SephadexG）2.羥丙基葡聚糖凝膠（LH-20）67精選PPT凝膠色譜法（GFC）原理：“分子篩”67精選PPT氣相色譜法：適用于沸點低，易揮發，對熱穩定的化合物的分離。HPLC電泳技術68精選PPT氣相色譜法：適用于沸點低，易揮發，對熱穩定的化合物的分離。6結構測定(一)鑒定天然產物化學成分的一般步驟1.化合物純度測定2.初步推測化合物類型3.測定分子式、計算不飽和度4.確定官能團或結構片斷5.確定分子的平面結構6.確定分子的立體結構(二)結構測定中波譜知識回顧69精選PPT結構測定(一)鑒定天然產物化學成分的一般步驟69精選PPT純度測定方法1.結晶的性質2.層析行為（PC、TLC）3.GC4.HPLC5.電泳……70精選PPT純度測定方法1.結晶的性質70精選PPT分子式測定方法、不飽和度的計算分子式測定方法（MS）：1.元素定性分析2.高分辨質譜法（HR-MS)不飽和度的計算

U=(2+2n4+n3-n1)/271精選PPT分子式測定方法、不飽和度的計算分子式測定方法（MS）：71精例1：元素定性分析定量分析結果：C：79.35%，H：10.21%所以，O=100-79.35-10.21=10.44%三元素在結構中所占比例為：C=79.35/12.01=6.6110.16H=10.21/1.008=10.1315.58O=10.44/16.00=0.651分子式為（C10H16O1）n如MS的分子離子峰為456，則n=372精選PPT例1：元素定性分析定量分析結果：C：79.35%，H：10.例2：高分辨質譜法以12C=12.000000為基準，1H=1.00782514N=14.00307，16O=15.99491故：C8H12N4164.1063C9H12N2O164.0950C10H12O2164.0837C10H16N2164.1315分子量均為164，但精確質量不一樣，可用于區別化合物。73精選PPT例2：高分辨質譜法以12C=12.000000為基準，1H=常用波譜知識回顧紫外光譜(UV)紅外光譜(IR)核磁共振(NMR)質譜(MS)練習74精選PPT常用波譜知識回顧紫外光譜(UV)74精選PPT紫外光譜用不同波長的紫外光為光源（200~400nm），依次照射一定濃度的樣品溶液，分別測定其吸光度（A），并用波長對吸光度（或摩爾吸光系數）作圖，得紫外吸收光譜圖。應用：定性鑒別、純度檢查、單組分的定量分析以及結構解析（輔助手段）。只能顯示分子中部分結構的特征。75精選PPT紫外光譜用不同波長的紫外光為光源（200~400nm），依次可鑒定的結構片斷某種發色團的存在；順反異構體的鑒定；吸收帶R帶：雜原子的不飽和基團，波長>270nm,弱吸收；可隨溶劑極性的不同而移動。K帶：共軛結構，強吸收。B帶：芳香化合物，似掌狀，256nm左右，弱吸收。E帶：芳香化合物，強吸收，可分為E1（180nm)和E2(200nm)兩個峰。76精選PPT可鑒定的結構片斷76精選PPT紅外光譜廣泛用來鑒定化合物的結構，簡單迅速，可靠。用波長2.5-15um（4000-667cm-1）的光波為光源依次照射樣品，以波數（或波長）為橫坐標，百分透光度為縱坐標繪制的譜圖。與紫外光譜的區別：IR為振動-轉動光譜適用范圍廣特征性強77精選PPT紅外光譜廣泛用來鑒定化合物的結構，簡單迅速，可靠。77精選PIR的九個重要區段：3750~3000cm-1:-OH,-NH3300~3000cm-1:≡CH,=CH,Ar-H3000~2700cm-1:飽和CH,-CHO2400~2100cm-1:-C≡C,-C≡N1900~1650cm-1:C=O1675~1500cm-1:C=C,C=N1475~1300cm-1:CH1300~1000cm-1:C-O(酚、醇、醚）1000~650cm-1：=CH78精選PPTIR的九個重要區段：78精選PPT影響峰位的因素誘導因素：如吸電子誘導效應使峰向高頻方向移動。共軛因素：使峰向低頻方向移動。氫鍵：使峰向低頻方向移動。79精選PPT影響峰位的因素誘導因素：如吸電子誘導效應使峰向高頻方向移動。核磁共振用60cm~300m波長的無線電波照射樣品，只能引起原子核的自旋能級的躍遷。1H-NMR、13C-NMR、二維核磁共振譜（N+1)律峰位：烷基H~1ppm，ArH~7ppm等。80精選PPT核磁共振用60cm~300m波長的無線電波照射樣品，只能引起質譜主要特點：靈敏度高分析速度快測定對象廣主要用途：測定準確的分子量鑒定化合物測定分子中Cl,Br等原子數81精選PPT質譜主要特點：81精選PPT光譜解析練習一某未知化合物的分子式為C14H14,通過光譜解析推測結構。82精選PPT光譜解析練習一某未知化合物的分子式為C14H14,通過光譜解光譜解析練習二化合物分子式如下，指出下列各峰歸屬。δ1.2CH2CH3δ2.0COCH3δ4.0OCH2CH3δ6.8~7.6C6H4δ9.8NH83精選PPT光譜解析練習二化合物分子式如下，指出下列各峰歸屬。δ1.2光譜解析練習三化合物分子式為C10H10Br2O，推測其結構式。84精選PPT光譜解析練習三化合物分子式為C10H10Br2O，推測其結構小結常用溶劑的分類與極性比較。常用的提取、分離技術與選擇原則。濃縮方式。結晶純度的判斷。乳化現象的產生與消除。pH梯度萃取法。85精選PPT小結常用溶劑的分類與極性比較。85精選PPT常用吸附劑與使用注意。吸附色譜、分配色譜、離子交換色譜、凝膠色譜分離化合物的原理。化合物結構測定的一般步驟。CCD、DCCC、HPLC、GC、IEC、GFC、UV、IR、NMR、MS的含義。86精選PPT常用吸附劑與使用注意。86精選PPT基本操作技術與應用2010年2月23日-3月9日87精選PPT基本操作技術與應用2010年2月23日-3月9日1精選PPT基本操作技術與應用天然藥物活性成分的研究（了解內容）天然產物的提取方法（掌握內容）天然產物的分離方法（掌握內容）色譜分離法（掌握內容）天然產物的結構測定（熟悉內容）88精選PPT基本操作技術與應用天然藥物活性成分的研究（了解內容）2精選P研究途徑臨床調查收集原料成分提取分離成分預試驗活性篩選文獻資料調研結構確定動物試驗臨床試驗89精選PPT研究途徑臨床調查收集原料成分提取分離成分預試驗活性篩選文獻資提取的基本知識什么是提取？提取的思路（已知成分、未知成分）提取前預處理（一般過2號篩為宜，同時注意酶的影響）基本原理—相似相溶影響因素（溶劑的選擇、方法選擇、時間、溫度、粉碎度等）極性90精選PPT提取的基本知識什么是提取？4精選PPT極性常用溶劑極性排列順序：石油醚<苯<無水乙醚<氯仿<乙酸乙酯<正丁醇<丙酮<乙醇<甲醇<水官能團的極性排列順序：烷烴<鹵代烴<醚<酯<酮<醛<酰胺<胺<醇<水<酚<羧酸91精選PPT極性常用溶劑極性排列順序：5精選PPT溶劑分類與特點（一）水：價廉，安全，對細胞的穿透能力強。適用于無機鹽、糖類、鞣質、氨基酸與蛋白質、有機酸鹽、生物堿鹽、苷類化合物的提取。親水性有機溶劑：甲醇、乙醇、丙酮等。特點：可與水任意比混溶，毒性低、價廉、回收方便，對細胞的穿透能力強。適用于多種成分的提取，其中，乙醇又稱為“萬能溶劑”。92精選PPT溶劑分類與特點（一）水：價廉，安全，對細胞的穿透能力強。6精溶劑分類與特點（二）親脂性有機溶劑：石油醚、乙醚、苯、氯仿、乙酸乙酯等。特點：選擇性強、回收方便、但易燃、有毒、價貴。適用于揮發油、油脂、葉綠素、樹脂、游離生物堿、苷元等成分的提取。93精選PPT溶劑分類與特點（二）親脂性有機溶劑：石油醚、乙醚、苯、氯仿、提取技術與方法（一）溶劑法：僅限于低分子量、含量高的成分的提取。根據“相似相溶”的原則進行提取。（二）其他方法根據化合物的特殊性質選擇特殊的提取方法。水蒸氣蒸餾法升華法共9種方法94精選PPT提取技術與方法（一）溶劑法：共9種方法8精選PPT溶劑提取法浸漬法滲漉法煎煮法回流法連續回流法超聲提取法超臨界流體萃取法95精選PPT溶劑提取法浸漬法9精選PPT浸漬法分為冷浸法（室溫）和溫浸法（40~60℃）。常用溶劑：水、酸水、堿水、稀醇等。適用于遇熱易被破壞的成分或含大量淀粉、粘液質、果膠、樹膠等多糖類成分的提取。缺點：提取時間長、溶劑用量大、提取效率低、用水作溶劑時易發霉。96精選PPT浸漬法分為冷浸法（室溫）和溫浸法（40~60℃）。10精選P滲漉法適用范圍與提取溶劑同浸漬法。步驟：浸潤、裝筒、排氣、浸漬、滲漉。優點：提取效率較高。缺點：提取時間長、溶劑用量大。97精選PPT滲漉法適用范圍與提取溶劑同浸漬法。11精選PPT煎煮法藥房及家庭中最為常用的中藥提取方法。常用溶劑：水適用于對熱穩定的成分的提取。含多糖類成分量大的藥材因煎煮后呈糊狀，不宜用本法。98精選PPT煎煮法藥房及家庭中最為常用的中藥提取方法。12精選PPT回流法最常用的提取方法。對熱不穩定的成分不適用。提取效率較高。選擇什么試劑？適用于什么成分？99精選PPT回流法最常用的提取方法。13精選PPT連續回流法浸漬法和回流法的特點兼有。對熱不穩定的成分慎用。提取時間長。100精選PPT連續回流法浸漬法和回流法的特點兼有。14精選PPT超聲提取法利用超聲波振動產生的能量在提取液中產生“空化現象”提取有效成分。優點：操作簡便，幾乎適用于各種溶劑的提取，提取時間短，效率高。101精選PPT超聲提取法利用超聲波振動產生的能量在提取液中產生“空化現象”超臨界流體萃取法超臨界流體（supercriticalfluid，SF）：當某物質處于臨界溫度和臨界壓力以上時可形成一種既非液體又非氣體的單一相態，將這一狀態的物質稱為超臨界流體。目前最常用的是CO2-SFE技術。102精選PPT超臨界流體萃取法超臨界流體（supercriticalfl水蒸氣蒸餾法適用于具有揮發性，可與水蒸氣一起蒸餾出來，與水不反應，又難溶于水的化合物的提取。103精選PPT水蒸氣蒸餾法適用于具有揮發性，可與水蒸氣一起蒸餾出來，與水不升華法適用于有升華性，升華溫度適當，遇熱較穩定的化合物的提取。可分為常壓升華和減壓升華兩種。104精選PPT升華法適用于有升華性，升華溫度適當，遇熱較穩定的化合物的提取關于提取問題小結極性（溶劑的極性、化合物的極性）提取溶劑的分類與特點提取的原理提取的方法與適用范圍105精選PPT關于提取問題小結極性（溶劑的極性、化合物的極性）19精選PP分離方法（一）分離前處理（二）結晶與重結晶（三）分離方法系統溶劑分離法兩相溶劑萃取法沉淀法

6.透析法

9.色譜法吸附法（補充）7.分餾法鹽析法（補充）8.升華法106精選PPT分離方法（一）分離前處理20精選PPT分離前處理提取液一般體積較大，目標成份濃度低，需要先濃縮提高濃度，然后再進行分離工作。濃縮的方法常壓蒸餾減壓蒸餾薄膜蒸發107精選PPT分離前處理提取液一般體積較大，目標成份濃度低，需要先濃縮提高常壓蒸餾適用于有效成分受熱不易分解，低沸點有機溶劑（氯仿、乙醚、石油醚等）的提取液的濃縮。108精選PPT常壓蒸餾適用于有效成分受熱不易分解，低沸點有機溶劑（氯仿、乙減壓蒸餾適用于溶劑沸點高，有效成分受熱易分解的提取液的濃縮。109精選PPT減壓蒸餾適用于溶劑沸點高，有效成分受熱易分解的提取液的濃縮。薄膜蒸發濃縮效率高，受熱時間短，特別適用于濃縮水或稀醇為溶劑的提取液。110精選PPT薄膜蒸發濃縮效率高，受熱時間短，特別適用于濃縮水或稀醇為溶劑結晶與重結晶（一）結晶的條件（掌握)（二）結晶溶劑的選擇

(熟悉）（三）制備結晶的方法

1.晶核的形成

2.晶鏈的延長（四）結晶純度的判斷(重點掌握）111精選PPT結晶與重結晶（一）結晶的條件（掌握)25精選PPT結晶的條件被分離化合物純度高；呈過飽和狀態；最適結晶溫度：5~10℃；充分放置。112精選PPT結晶的條件被分離化合物純度高；26精選PPT結晶溶劑的選擇（理想溶劑）一不與結晶物質起化學反應；雜質與結晶物質在溶劑中的溶解度相差大；目的物在溶劑中的溶解度隨溫度不同有顯著差別；溶劑沸點不宜太高或太低（可在60℃）；溶劑沸點低于化合物的熔點；溶劑沸點低于結晶溫度；能給出較好的晶形，無劇毒。113精選PPT結晶溶劑的選擇（理想溶劑）一不與結晶物質起化學反應；27精選結晶溶劑的選擇二常用溶劑：甲醇、乙醇、丙酮、氯仿、乙酸乙酯等。其他不常用溶劑：二甲基亞砜、乙腈、甲酰胺、二甲基甲酰胺、冰醋酸等。混合溶劑？如何選擇與使用水--乙醇；乙醇—乙醚；石油醚—苯；水—丙酮；乙醚—乙酸乙酯—乙醇等。114精選PPT結晶溶劑的選擇二常用溶劑：甲醇、乙醇、丙酮、氯仿、乙酸乙結晶純度的判斷一定的晶形、均勻的色澤；有固定的熔點，熔距較小；TLC：經過三種以上展開劑展開得均一圓形的斑點。115精選PPT結晶純度的判斷一定的晶形、均勻的色澤；29精選PPT系統溶劑分離法目前是研究成分不明的天然產物的最常用方法。選擇3~4種不同極性的溶劑，由低極性到高極性分步對粗提物進行分離。手續復雜、對化學性質不穩定，容易引起分解、異構化的產物應特別注意。116精選PPT系統溶劑分離法目前是研究成分不明的天然產物的最常用方法。30兩相溶劑萃取法（一）基礎知識原理分配系數與分離因子（二）萃取方法117精選PPT兩相溶劑萃取法（一）基礎知識31精選PPT基礎知識一、原理利用混合物中各成分在兩種互不混溶的溶劑中分配系數不同而達到分離的目的。二、分配系數與分離因子分配系數（K）K=C有機相/C水相分離因子（β）β=KA/KB118精選PPT基礎知識一、原理32精選PPT假設KA=10，KB=0.1，則β=100當β≥100時，一次簡單的萃取就可以完成分離；當10<β≤100，需萃取10~12次；當β≤2時，需要完成100次以上的萃取；當β≈1時，理論上無法完成萃取分離的目的。119精選PPT假設KA=10，KB=0.1，則β=10033精選PPT萃取方法簡單萃取法（掌握）pH梯度萃取法（重點掌握）（補充）逆流連續萃取法（了解）逆流分溶法（countercurrentdistributionCCD)（了解）液滴逆流分配法（dropletcountercurrentchromatogrophyDCCC）（了解）120精選PPT萃取方法簡單萃取法（掌握）34精選PPT簡單萃取法適用于分離因子較大的情況的分離。提取液的密度最好在1.1~1.2。“等量多次”原則（掌握）乳化現象（熟悉）121精選PPT簡單萃取法適用于分離因子較大的情況的分離。35精選PPT等量多次原則證明設Vml水中含有Wg溶質，用Sml有機溶劑萃取后，在水中尚有W1g溶質沒有被萃取出來，則分配系數KD為：整理得122精選PPT等量多次原則證明設Vml水中含有Wg溶質，用Sml有機溶劑萃第2次再用Sml有機溶劑萃取水中的溶質后仍有W2g沒有被萃取出來，則因此，若每次用Sml有機溶劑萃取，最后剩在Vml水中的溶質Wn為若一次用nSml有機溶劑萃取，剩余在水中的溶質123精選PPT第2次再用Sml有機溶劑萃取水中的溶質后仍有W2g沒有被萃取結論用總量相同的溶劑，分多次萃取的效率要比1次萃取的效率高。124精選PPT結論用總量相同的溶劑，分多次萃取的效率要比1次萃取的效率高。乳化現象產生原因天然產物中含有皂苷、蛋白質、植物膠質、鞣質等表面活性物質；兩相互不相溶的溶劑；振搖；少量輕質的沉淀等。125精選PPT乳化現象產生原因39精選PPT解決方案較長時間靜置；2.將乳狀液分出，再換新溶劑萃取；3.將乳狀液加溫或冷凍；4.將乳狀液抽濾；5.加入少量電解質（如NaCl等）；6.加入少量低級醇（如乙醇、戊醇等）。126精選PPT解決方案40精選PPTpH梯度萃取法是分離酸性、堿性、兩性有機化合物常用的手段。原理：由于溶劑系統PH的改變，改變了化合物的存在狀態（游離型或解離型），從而改變了化合物在溶劑系統中的分配系數。酸性化合物：pH=pka-2游離；

pH=pka+2

解離。堿性化合物相反。127精選PPTpH梯度萃取法是分離酸性、堿性、兩性有機化合物常用的手段。4以酸性化合物HA為例酸性化合物在水中電離：電離常數取負對數128精選PPT以酸性化合物HA為例酸性化合物在水中電離：電離常數取負對數4逆流連續萃取法操作簡便；萃取完全，不易乳化；適合于兩相互不混溶的溶劑的密度相差較大的系統的分離。129精選PPT逆流連續萃取法操作簡便；43精選PPT逆流分溶法（CCD)適用于性質相似的異構體或同系物的分離。特點：條件溫和，樣品易于回收。注意：溶質濃度越低分離效果越好。130精選PPT逆流分溶法（CCD)適用于性質相似的異構體或同系物的分離。4液滴逆流分配法（DCCC）CCD的改進方法，不易乳化。特別適用于皂苷類化合物的分離。需要動力泵。131精選PPT液滴逆流分配法（DCCC）CCD的改進方法，不易乳化。45精沉淀法可以分為酸堿沉淀、試劑沉淀、鉛鹽沉淀。酸堿沉淀：適用于酸性、堿性物質的分離。試劑沉淀沉淀試劑沉淀有機溶劑沉淀3.鉛鹽沉淀中性醋酸鉛堿性醋酸鉛132精選PPT沉淀法可以分為酸堿沉淀、試劑沉淀、鉛鹽沉淀。46精選PPT吸附法（補充）選擇適宜吸附劑（如硅膠、Al2O3、活性炭）去除雜質或選擇性篩選目標成分。如用活性炭去除在提取液中的葉綠素等脂溶性成分。133精選PPT吸附法（補充）選擇適宜吸附劑（如硅膠、Al2O3、活性炭）鹽析法（補充）在水提液中加入NaCl、MgCl2等無機鹽促進極性稍大組分析出的方法。如鹽酸小檗堿易溶于熱水，在冷水中溶解度小，但在結晶冷卻過程中不易析出結晶，可通過加入NaCl固體的方法促進析晶。134精選PPT鹽析法（補充）在水提液中加入NaCl、MgCl2等無機鹽促進透析法135精選PPT透析法49精選PPT色譜法吸附色譜(adsorptionchromatography)分配色譜/液相色譜(patitionchr.)離子交換色譜(ionexchangechr.)大孔吸附樹脂法(macro-reticularresinemethod)凝膠色譜法(gelfiltrationchr.)氣相色譜法(gaschromatography)高效液相色譜（highperformanceliquidchromatography)136精選PPT色譜法吸附色譜(adsorptionchromatogra吸附色譜基本原理：利用混合物中不同組分分子、溶劑分子與吸附劑表面分子間的作用力不同，引起不同的吸附性能而進行分離。吸附劑色譜結果操作方式137精選PPT吸附色譜基本原理：利用混合物中不同組分分子、溶劑分子與吸附劑

極性吸附劑：硅膠、氧化鋁吸附劑非極性吸附劑：活性炭聚酰胺硅膠：微酸性，不宜直接用于堿性物質的分離。顆粒表面的硅醇基起吸附作用，需在105~110℃活化。氧化鋁：微堿性，不宜直接用于含醛基、羰基、酯基化合物的分離。活性炭：多用于水提液中脂溶性雜質的分離。138精選PPT極性吸附劑：硅膠、4、聚酰胺：酰胺基可以與羥基、羧基、硝基等形成氫鍵。分離規律（P67）

：氫鍵越多，吸附越牢，Rf越小。如易形成分子內氫鍵，Rf增大。芳香化程度越高，吸附越牢。各種溶劑的洗脫能力：水<甲醇<丙酮<NaOH水溶液<甲酰胺<二甲基甲酰胺<尿素水溶液139精選PPT4、聚酰胺：酰胺基可以與羥基、羧基、硝基等形成氫鍵。53精選操作方式薄層色譜（thinlayerchromatography,TLC)

操作步驟：制板點樣展開定位柱色譜操作步驟：吸附劑與洗脫劑選擇裝柱上樣洗脫分離注意活化140精選PPT操作方式薄層色譜（thinlayerchromatogr分配色譜（一）基本原理：根據被分離物質在兩相中的溶解性不同而進行分離（CCD）。（二）正相色譜與反相色譜（掌握）（三）支持劑：硅藻土、纖維素粉、濾紙、含水17%的硅膠等。（四）操作方式

1.紙層析(PC)2.TLC3.柱層析141精選PPT分配色譜（一）基本原理：根據被分離物質在兩相中的溶解性不同而正相色譜：固定相的極性大于流動相的極性。固定相多為強極性溶劑，如水、緩沖液等。反相色譜：固定相的極性小于流動相的極性。固定相多為親脂性溶劑。142精選PPT正相色譜：固定相的極性大于流動相的極性。固定相多為強極性溶劑支持劑的要求無吸附作用；不溶于兩相溶劑中；不與被分離物質發生化學反應；并能吸著一定的固定相；可以使流動相自由通過而不改變其組成。143精選PPT支持劑的要求無吸附作用；57精選PPT離子交換色譜（IEC）（一）分離原理：利用離子交換樹脂在水溶液中可以解離，并與溶液中其它離子產生可逆性的交換，達到分離離子型化合物的目的。（二）離子交換樹脂（熟悉）（三）分離結果（重點掌握）（四）離子交換樹脂的選擇（了解）（五）操作（了解）144精選PPT離子交換色譜（IEC）（一）分離原理：利用離子交換樹脂在水溶離子交換樹脂陽離子交換樹脂：能與溶液中陽離子進行交換，按交換活性分為強酸型陽離子交換樹脂和弱酸型陽離子交換樹脂兩類。如：RSO3H+NaClRSO3Na+HCl陰離子交換樹脂：能與溶液中陰離子進行交換，按交換活性分為強堿型陰離子交換樹脂和弱堿型陰離子交換樹脂兩類。如：RNOH+NaClRNCl+NaOH145精選PPT離子交換樹脂陽離子交換樹脂：能與溶液中陽離子進行交換，按交換樣品強酸型陽離子交換樹脂酸性及中性物質強堿型陰離子交換樹脂稀NH4OH洗脫洗脫液（堿性及兩性）

中性物質稀堿洗脫洗脫液（酸性物質）強堿型陰離子交換樹脂堿性物質稀酸洗脫洗脫液（兩性物質）流出液流出液流出液146精選PPT樣品強酸型陽離子交換樹脂酸性及中性物質強堿型陰離子交換樹脂稀離子交換樹脂的選擇根據被分離物質選擇樹脂，如分離生物堿選擇陽離子交換樹脂。根據被分離物質的解離常數選擇，如堿性強選擇弱酸型陽離子交換樹脂。根據化合物大小選擇，如分離大分子化合物可選擇交聯度3~6%的樹脂。147精選PPT離子交換樹脂的選擇根據被分離物質選擇樹脂，如分離生物堿選擇陽操作預處理：水浸泡（溶脹）酸堿處理（洗去雜質）水洗至中性裝柱上樣與洗脫再生148精選PPT操作預處理：水浸泡（溶脹）酸堿處理（洗去雜質）大孔吸附樹脂法

主要用于水溶性化合物的提取分離。大孔吸附樹脂（吸附性與范德華力、氫鍵有關）大孔吸附樹脂類型影響因素：1.分子極性大小；2.分子體積大小；3.pH值的影響。預處理與再生149精選PPT大孔吸附樹脂法主要用于水溶性化合物的提取分離。63精選PP大孔吸附樹脂的特點吸附性和篩選性相結合的分離材料選擇性好吸附容量大機械強度高再生處理方便吸附速度快解吸容易不易受到無機鹽等離子或小分子化合物的影響150精選PPT大孔吸附樹脂的特點吸附性和篩選性相結合的分離材料64精選PP大孔吸附樹脂類型非極性吸附樹脂（芳香族吸附劑）：以苯乙烯為單體，二乙基苯為交聯劑。中極性吸附樹脂（脂肪族吸附劑）：以甲基丙烯酸酯作為單體和交聯劑。極性吸附樹脂：結構中含有硫氧、酰胺、氮氧等極性基團。151精選PPT大孔吸附樹脂類型非極性吸附樹脂（芳香族吸附劑）：以苯乙烯為單預處理與再生預處理：水洗、溶脹后用甲醇或95%的乙醇浸泡24小時，至洗滌液加水后不呈白色渾濁，最后用蒸餾水洗掉有機溶劑。再生：蒸餾水、甲醇、乙醇反復洗滌，必要時可用3%的鹽酸水溶液或3%的氫氧化鈉溶液再生。152精選PPT預處理與再生預處理：水洗、溶脹后用甲醇或95%的乙醇浸泡24凝膠色譜法（GFC）原理：“分子篩”凝膠的種類1.葡聚糖凝膠（SephadexG）2.羥丙基葡聚糖凝膠（LH-20）153精選PPT凝膠色譜法（GFC）原理：“分子篩”67精選PPT氣相色譜法：適用于沸點低，易揮發，對熱穩定的化合物的分離。HPLC電泳技術154精選PPT氣相色譜法：適用于沸點低，易揮發，對熱穩定的化合物的分離。6結構測定(一)鑒定天然產物化學成分的一般步驟1.化合物純度測定2.初步推測化合物類型3.測定分子式、計算不飽和度4.確定官能團或結構片斷5.確定分子的平面結構6.確定分子的立體結構(二)結構測定中波譜知識回顧155精選PPT結構測定(一)鑒定天然產物化學成分的一般步驟69精選PPT純度測定方法1.結晶的性質2.層析行為（PC、TLC）3.GC4.HPLC5.電泳……156精選PPT純度測定方法1.結晶的性質70精選PPT分子式測定方法、不飽和度的計算分子式測定方法（MS）：1.元素定性分析2.高分辨質譜法（HR-MS)不飽和度的計算

U=(2+2n4+n3-n1)/2157精選PPT分子式測定方法、不飽和度的計算分子式測定方法（MS）：71精例1：元素定性分析定量分析結果：C：79.35%，H：10.21%所以，O=100-79.35-10.21=10.44