1、支原體、衣原體檢測(cè)第1頁(yè)實(shí)驗(yàn)?zāi)空莆罩гw、衣原體檢測(cè)方法，結(jié)果判斷、臨床意義和注意事項(xiàng)。熟悉支原體、衣原概念分類(lèi)及其對(duì)應(yīng)檢測(cè)原理了解衣原體、支原體檢測(cè)臨床意義，分泌物采集、培養(yǎng)方法。第2頁(yè)支原體概念和分類(lèi)支原體是一類(lèi)無(wú)細(xì)胞壁，形態(tài)上呈多形性，可經(jīng)過(guò)除菌器，能在無(wú)生命培養(yǎng)基生長(zhǎng)繁殖最小原核細(xì)胞型微生物。 肺炎支原體 、生殖器支原體 、 穿通支原體 人型支原體（Mh）、溶脲脲原體（Uu）第3頁(yè)衣原體概念和分類(lèi)衣原體是一類(lèi)能經(jīng)過(guò)除菌器，專(zhuān)性細(xì)胞內(nèi)寄生，有獨(dú)特周期生活原核細(xì)胞微生物。 沙眼衣原體、鸚鵡熱衣原體、肺炎衣原體第4頁(yè)支原體檢測(cè)臨床意義支原體臨床意義： 能夠引發(fā)呼吸道感染支原體肺炎，泌尿生殖道

2、非淋病性尿道炎，男性前列腺炎、附睪炎、不育，女性陰道炎、宮頸炎、盆腔炎、輸卵管炎、流產(chǎn)等，還可造成新生兒感染如腦膜炎、腦膿腫、硬腦膜下膿腫。第5頁(yè)衣原體臨床意義 沙眼衣原體不但可致眼部感染，而且可引發(fā)生殖泌尿系統(tǒng)感染、性病淋巴肉芽腫以及其它器官疾病，為人類(lèi)發(fā)病率最高性傳輸疾病；鸚鵡熱衣原體可引發(fā)肺炎和毒血癥；肺炎衣原體主要引發(fā)青少年急性呼吸道感染。衣原體檢測(cè)臨床意義第6頁(yè)支原體、衣原體檢測(cè)標(biāo)本采集支原體標(biāo)本 棉拭子樣本尿道棉拭子 、宮頸管棉拭子、咽拭子 液體樣本精液、羊水、前列腺液、血清標(biāo)本衣原體標(biāo)本 主要為無(wú)菌棉拭子采集宮頸分泌分或尿道分泌物 還可有咽拭子、眼結(jié)膜拭子、黏稠膿液、血液、痰液等

3、第7頁(yè)支原體、衣原體檢測(cè)原理支原體檢測(cè)原理 Uu含有脲酶分解尿素產(chǎn)生NH3， Mh含有精氨酸脫羧酶分解精氨酸也產(chǎn)生NH3，使培養(yǎng)基PH值升高，培養(yǎng)基由黃色變?yōu)榧t色。藥敏試驗(yàn)板上包被有抗生素，若所測(cè)支原體對(duì)包被抗生素敏感，其酶活性受到抑制，不引發(fā)顏色改變。衣原體檢測(cè)原理 金標(biāo)法：利用已知特異性鼠抗衣原體抗體來(lái)檢測(cè)標(biāo)本中衣原體抗原。第8頁(yè)檢測(cè)試劑和器材1、微生物試驗(yàn)常規(guī)工具2、支原體、衣原體棉拭子標(biāo)本3、支原體、衣原體檢測(cè)試劑盒4、一次性無(wú)菌吸管和試管5、匯報(bào)簽第9頁(yè)支原體試劑盒組成 培養(yǎng)基 判定藥敏一體板 無(wú)菌吸管 無(wú)菌礦物油第10頁(yè)衣原體試劑盒組成 第11頁(yè)一、支原體試驗(yàn)步驟1、從冰箱中取出支

4、原體試劑盒恢復(fù)室溫2、從試劑盒中取出UU-Mh培養(yǎng)瓶一瓶，反應(yīng)板一條，在 反應(yīng)板寫(xiě)上病人姓名。3、取一只一次性無(wú)菌塑料吸管，然后吸收100ul培養(yǎng)液加入反應(yīng)板上左上第一孔 (作為空白對(duì)照)。4、將采集標(biāo)本拭子插入培養(yǎng)瓶，在靠近液面上方瓶壁擠壓旋轉(zhuǎn)拭子數(shù)次，使拭子中樣本滲透，然后將拭子取出；5、充分混勻接種了標(biāo)本后培養(yǎng)基，然后分別吸收100ul加入反應(yīng)板各孔。(空白孔除外) 6、各孔滴加2滴無(wú)菌液體石臘，蓋上反應(yīng)板蓋，置35-37C孵箱，培養(yǎng)24-48小時(shí)。第12頁(yè)臨床實(shí)際操作過(guò)程示范 1、設(shè)陰性對(duì)照孔 2、樣本處理3、加樣本液 4、加礦物油第13頁(yè) 5、加蓋標(biāo)識(shí) 6、恒溫孵育 7、孵育后判定板

5、可出現(xiàn)現(xiàn)象第14頁(yè)支原體檢測(cè)操作簡(jiǎn)化示意圖第15頁(yè)判定藥敏一體板模型圖第16頁(yè)支原體檢測(cè)結(jié)果判斷 依據(jù)臨床和標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照試驗(yàn)確定解脲脲原體（Uu）104ccu/ml、人型支原體（Mh） 104ccu/ml為Uu、 Mh非致病值，非Uu、 Mh感染正常人群定性試驗(yàn)陰性第17頁(yè)支原體藥敏結(jié)果分析第18頁(yè)支原體檢測(cè)結(jié)果匯報(bào)第19頁(yè)二、衣原體操作步驟1、取裂解管一支，豎立滴入裂解液A6滴，放入患者棉拭在管內(nèi)充分?jǐn)D壓，轉(zhuǎn)動(dòng)約15次，后放置2分鐘。2、再滴加裂解液B至刻度（約6滴），然后一樣操作上述擠壓步驟。3、擠壓棉簽（盡可能擠干），棄去棉簽，在反應(yīng)板加樣孔處滴加入3滴（約100ul）裂解后溶液。5-10分鐘后觀察結(jié)果。第20頁(yè)衣原體操作一第21頁(yè)衣原體操作二第22頁(yè)衣原體檢測(cè)結(jié)果判斷1、陽(yáng)性：有兩條紅色帶出現(xiàn)。一條位于測(cè)試區(qū)（T），另一條位于質(zhì)控區(qū)內(nèi)（C）。 解釋?zhuān)簶?biāo)本中含有沙眼衣原體抗原。2、陰性：僅在質(zhì)控區(qū)內(nèi)（C）出現(xiàn)一條紅色帶。解釋?zhuān)簶?biāo)本中檢測(cè)不出沙眼衣原體抗原。 （或是沒(méi)有、或是含量低于可檢測(cè)范圍）3、無(wú)效：質(zhì)控區(qū)內(nèi)（C）未出現(xiàn)一條紅色帶 第23頁(yè)結(jié)果現(xiàn)象第24頁(yè)注意事項(xiàng)1、本試驗(yàn)注意無(wú)菌操作，防止污染雜菌，故操作時(shí)請(qǐng)點(diǎn)燃酒精燈