1、測定工業廢水的發育毒性試驗樣品的采集通過對江蘇省常州市各典型企業工業污水處理工藝流程、污水處理量以及排放情況進行現場走訪調研，選取8 家工廠為采樣點。采集各工廠污水處理系統的進出水水樣，用棕色瓶分裝并貼好標簽， 4 下保存。工業廢水常規項目的測定現場測量采樣點的常規理化數據(溫度、pH值、電導率等)，并將樣品 帶回實驗室，按照水質pH值的測定玻璃電極法(GB6920-86)水 質化學需氧量的測定重鉻酸鹽法(GB11914 89) 水質五日生化需氧量(BOD5H勺測定稀釋與接種法(HJ505 2009)水質氨氮的測定納氏試劑分光光度法(HJ535 2009) 水和廢水監測分析方法(第4 版)分別

2、測定pH值、COD BOD5氨氮和電導率。工業廢水發育毒性的測定熱帶爪蟾胚胎的獲取挑選實驗室養殖的性成熟熱帶爪蟾15對，采用人工注射人絨毛膜促性腺激素(HCG羽方法誘導產卵，每對爪蟾各 注射2次(初次注射20IU, 36h后注射100IU)。待爪蟾抱對產卵結束后， 從產卵較好的3對爪蟾中，挑選出達到NF10-11階段且發育正常的胚 胎。暴露實驗采用 ringer 溶液作為對照組，與試驗組各設4 個平行。在24孔板上試驗，每孔放入10個胚胎，加入3mL水樣。暴露條件： 25多功能培養箱，24h 后換液，記錄孵化個數，并將未孵化的胚胎挑出， 48h 后統計死亡個數。胚胎的觀察與分析將存活胚胎用10

3、0mg/LMS 222麻醉處理后固定于4%的甲醛溶液中。取出經固定的胚胎，在解剖鏡下觀察胚胎的發育狀況，用顯微照相系統(ZEISSAxioCamICc3)拍照。相關指標有 4個:孵化率（ 孵化出的幼體占受精卵的百分比）; 存活率 （ 胚胎在 48h 內存活個體數占孵化出總個體數的百分比 ）; 體長 （ 胚胎頭部至尾尖的直線長度 ）; 畸形率 （48h 后胚胎畸形個體數占總存活個體數的百分比 ） 。數據處理以每孔中的胚胎為一個平行樣，數據以平均值標準差（SD）表示，n=4。用SPSS16 0分析差異性，其中所有百分比數據的差異性均先平方根，反正弦轉換后再用 Tukey-test 分析，方差齊時用

4、Dunnett檢驗組間差異，不齊時用 Dunnett，sT3檢驗。結果工業廢水水質狀況參照太湖地區城鎮污水處理廠及重點工業行業主要水污染物排放限值 （DB32/1072 2007）和污水綜合排放標準（GB8978 1996），通過對比 8 組水樣的進出水理化指標，發現經污水處理系統處理后，水質明顯好轉：S1、S2、S3和S4PH值分別由1.30、11.97、10.05和84恢復到了 69之間;S3、S4、S5和S8的氨氮值以及S& S7和 S8的BOD5直均明顯下降，滿足達標排放標準；COD值也顯著降低，可 S2、S3和S6的COD直均已超過太湖地區城鎮污水處理廠及重點工業行 業主要水污染物排

5、放限值，超標量分別為 53 8%、 36 2%和 78 0%。污水處理系統進出水對熱帶爪蟾胚胎的影響熱帶爪蟾胚胎測定污水處理系統進出水發育毒性。各進水水樣測定結果：S1、S2、S4和S6水樣中的胚胎均未孵化，S3的孵化率為27. 5% S5、S7和S8的胚胎全部孵化；S7的存活率為97. 5%其余點位全部死 亡。各出水水樣測定結果： S1、 S2 和 S4 水樣中的胚胎孵化率為100%，S6水樣中的胚胎孵化率較進水水樣增加了7. 5%;S8水樣中出水存活率與進水相比增加了 25% S5水樣中的胚胎也由進水的全部死亡變為全 部存活。各點位水樣對胚胎造成不同水準的畸形，主要特征有色素減少、鰭變窄、

6、泄殖腔膨大、體軸彎曲和眼睛畸形等，見圖 1。進水中，僅S7有存活，畸形率為2. 5%與對照組相當。出水中，S2、S5和S7 與對照相比無顯著差異，S1的畸形率為25% S4和S8則分別達到了5%和 58 3%，試驗表明，經過污水處理系統處理后，出水水質的整體狀況變好。熱帶爪蟾胚胎對工業廢水毒性的表征在監測的 8 個點位中，進水水樣總體孵化率極低，表明未經處理的工業廢水具有很強的生態毒性，嚴重影響胚胎孵化。電子和電鍍行業廢水pH值過高或過低是導致胚胎均未孵化的主要原因。S5和S8的高氨氮也致使熱帶爪蟾胚胎在孵化后全部死亡。S6較S7的各項理化指標值 均較低，胚胎孵化率卻分別為 0和100%這可能

7、是S6（印染企業）的進 水中含有較多難降解有毒污染物所致。污水經處理后，S3和S6的出水存活率依然為0,這與出水中較高的CO麗BODK平相關。S1、S4和S8 出水胚胎畸形率較高，表明廢水經污水系統處理后依然具有較強的毒性，而理化指標卻顯示水樣治理效果良好，已達到排放標準。 S1 和S4出水理化指標值較低，卻產生了較高的胚胎畸形率，表明出水水樣中可能水有未列入監測范圍的有毒污染物，因此常規理化監測有時無法反映廢水的毒性。鄒葉娜等采用成組生物毒性測試 （ 包括發光細菌急性毒性實驗、大型溞急性毒性試驗和單細胞凝膠電泳試驗）研究了常州市典型企業污水處理廠進出水的綜合毒性，同樣表明理化指標達到排放標準

8、的出水，卻仍然具有較大的急性毒性和遺傳毒性。這些工廠的廢水直接排入城市河道，勢必會對城市水生生態系統和水質安全產生威脅。綜上所述，S& S4 S6和S8的出水發育毒性明顯大于其他各樣 點，毒性大小順序為 S6 S3 S8 S4o S3. S4和S6分別為啤酒、電 鍍和印染工業，盡管我國也制定了相對應的行業污染物排放標準，可相對應的理化指標并不能反映出廢水排放到自然環境中對生物的綜合毒性。熱帶爪蟾胚胎檢測結果利用胚胎孵化率、死亡率、畸形率以及畸形類型等指標可以對不同點位的工業廢水水樣進行毒性表征。熱帶爪蟾胚胎在工業廢水監測中應用的可行性目前我國仍沒有工業廢水毒性測試方法及毒性排放控制標準。雖然，

9、利用生物檢測技術評價工業廢水的毒性已有大量試驗基礎，但仍需篩選多種代表性敏感水生生物才能更加客觀準確地評價廢水毒性。 FETAX對低濃度的污染物表現出較強的敏感性，已作為評價化合物發育毒性的有效方法，被用于多種不同類型環境樣品的生態毒性檢測，為工業廢水的毒性檢測提供了一種快速有效的毒性監測方法。此外，已有研究表明，不同的污染物導致熱帶爪蟾胚胎畸形現象也不一樣，且某些污染物能導致爪蟾胚胎產生獨特的畸形表型，如用環境濃度三丁基氯化錫(50ng/L400ng/LTBTCl)對熱帶爪蟾胚胎進行 24h, 36h和48h暴露能夠導致胚胎眼睛異常、泄殖腔突出和鰭變窄等多種畸形現象。隨著對不同污染物致畸機制的深入研究，熱帶爪蟾胚胎的畸形表型可為污染物識別提供幫助。盡管將熱帶爪蟾胚胎應用于工業廢水的生物監測尚處于起步階段，但其所需要的時間短、經濟成本低，暴露 48h 便可獲得各項評價指標，操作簡便易行，表現出巨大優勢。目前，僅參照現有的指標無法進一步區分不同工廠污水的水質狀況，在以后的研究中應考慮將畸形指標量化、各個類型的畸形水準等級化，并結合不同器官的致畸權重系數評判致畸等級。總之，熱帶爪蟾作為一種評價環境樣品毒性的生物已得到越來越多的認可，隨著熱帶爪蟾模式生物在各領域研究的發展，其在工業廢水監測中的應用也會更加廣泛深入。3 結語運用熱帶爪蟾胚胎檢測常州 8 家典型行