1、紫外分光光度法測定不同產(chǎn)地附子(f z)中生物堿的含量【目的(md)】 紫外分光(fn un)光度法測定不同產(chǎn)地附子中生物堿的含量【實驗材料試劑】附子生藥材（產(chǎn)地：廣州、四川、成都、塘廈）烏頭堿對照品（中國藥品生物制品檢定所提供，批號：110720-201102）25%氨水（廣東光華化學(xué)廠有限公司，批號：20100806）三氯甲烷（廣州化學(xué)試劑廠，批號：20060403-2）硫酸（廣州化學(xué)試劑廠，批號：20070712-1）乙醚（天津市百世化工有限公司，批號：20091101）醋酸鈉（天津市百世化工有限公司，批號：20100503）冰醋酸（天津市百世化工有限公司，批號：20090320）硼砂（

2、天津市北聯(lián)精細化學(xué)品開發(fā)有限公司，批號：20090828）磷酸氫二鈉（天津市百世化工有限公司，批號：20090620）磷酸二氫鉀（天津市大茂化學(xué)試劑廠，批號：20100726）溴甲酚綠（天津市南開區(qū)紅旗路楚雄道119號，批號：20100802）無水乙醇（天津市百世化工有限公司，批號：20101028）pH3.0醋酸鹽緩沖液的配制：稱取無水醋酸鈉0.15 g，加水使溶解，加冰醋酸5.6 ml，用水稀釋到500 ml，并在pH計上校正（過濾）。儀器校正用的標(biāo)準(zhǔn)緩沖液的配制：磷酸鹽標(biāo)準(zhǔn)緩沖液：精密稱取在1155干燥23小時的無水磷酸氫二鈉3.55 g與磷酸二氫鉀3.40 g，加水使溶解并稀釋至100

3、0 ml。硼砂標(biāo)準(zhǔn)緩沖液：精密稱取硼砂3.81 g（注意避免風(fēng)化），加水使溶解并稀釋至1000 ml，置聚乙烯塑料瓶中，密塞，避免空氣中二氧化碳進入。0.1%溴甲酚綠的配制：0.2 g溴甲酚綠加0.05 mol/L NaOH溶液3.2ml溶解，用水稀釋200 ml?！驹O(shè)備(shbi)與玻璃儀器】紫外分析儀（華南國家(guji)計量測試中心，型號：UV-6112424）超聲波清洗儀（上海科導(dǎo)超聲儀器(yq)有限公司，型號：250H）十萬分之一分析天平（賽默飛世爾科技公司，型號:CP225D）恒溫水浴鍋（上海錦屏儀器儀表有限公司，型號：GKC-HOP2可控硅恒溫水浴鍋）旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器（鞏義市予華儀器有

4、限責(zé)任公司，型號：RE-52A）循環(huán)水式真空泵（鞏義市予華儀器有限責(zé)任公司，型號：SHZ-D）錐形瓶（100ml）4個圓底燒瓶（25ml）4個分液漏斗4個移液管25ml、2ml、3ml各1個容量瓶：10ml 7個【實驗步驟】1.測定條件的選擇1.1對照品溶液的制備精密稱取經(jīng)105干燥至恒重的烏頭堿對照品2.96 mg，置25ml量瓶中，加三氯甲烷溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得（每1ml中含烏頭堿0.1184 mg）。1.2最大吸收峰的確定用下述條件對供試品液及對照品液與溴甲酚綠形成的離子對的氯仿溶液，在紫外分光光度計上從340-520 nm的范圍內(nèi)掃描，其最大吸收峰位在415 nm，與文獻報道1

5、-2相同。1.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備精密吸取對照品溶液0,1,2,3,4,5,6 ml，分別置分液漏斗中。依次加入三氯甲烷至10 ml，再加入pH3.0的醋酸鹽緩沖液10 ml和0.1% 溴甲酚綠溶液2 ml ，強力振搖5 min，靜置10 min，分取三氯甲烷層，水層再用三氯甲烷提取2次，每次5 ml，用干燥濾紙過濾，濾液用分光光度計，分別在415 nm的波長處測定吸光度。以吸光度為縱坐標(biāo)，烏頭堿含量為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，測得線性范圍。結(jié)果見表1及圖1。表1 線性關(guān)系試驗(shyn)結(jié)果序號烏頭堿對照品量（mg/10ml）X對照品吸光度Y00010.11840.17620.23680.3643

6、0.35520.50540.47360.68450.59200.87560.71041.064圖1 線性關(guān)系其回歸方程為Y = 1.483X0.0022；線性系數(shù)(xsh) = 0.9993。試驗結(jié)果表明：烏頭(w tu)堿含量在11.84-71.04g/ml范圍(fnwi)內(nèi)，其吸收度與烏頭堿濃度呈良好的線性關(guān)系。2. 含量(hnling)測定2.1供試品溶液的制備（氨水三氯甲烷冷浸法）生藥分別打粉，精密稱取藥材粉末 3 g（其中廣州附子取藥材粉末6g，北京附子取藥材粉末0.6g），于帶塞錐形瓶中，加10氨水5ml，加三氯甲烷10ml，振蕩5 min，冷浸6 h，過濾，濾渣用三氯甲烷洗2 次

7、，每次5ml，合并三氯甲烷層，減壓蒸干。加入乙醚-三氯甲烷-無水乙醇（16：8：1）的混合液25ml和濃氨試液1ml，稱定重量，強力振搖15min，浸漬過夜，用上述混合溶液補足減失的重量，振搖2min，靜置。傾取上清液，精密量取10ml置分液漏斗中，加乙醚5ml，用0.3mol/硫酸溶液提取4次，每次10ml，分取硫酸液，過濾，合并濾液，置另一分液漏斗中，加濃氨水約10ml，搖勻，用三氯甲烷提取4次，每次10ml，分取三氯甲烷液，過濾，合并濾液，回收溶劑至干，殘渣于于105加熱1h，取出，放冷，加三氯甲烷分2次溶解，每次5ml，全部轉(zhuǎn)入分液漏斗中，再加入PH3.0的醋酸鹽緩沖液10ml和0.1

8、% 溴甲酚綠溶液2ml ，強力振搖5min，靜置10min，分取三氯甲烷層，水層再用三氯甲烷提取2次，每次5ml，用干燥濾紙過濾，合并濾液，濾液用分光光度計，分別在415nm的波長處測定吸光度。并從標(biāo)準(zhǔn)曲線上求得供試品中總烏頭堿相當(dāng)于烏頭堿的量，再計算含量。結(jié)果見表2。表2 不同產(chǎn)地附子的實驗結(jié)果批次吸光度總堿含量(mg/g)RSD/%廣州0.5310.5530.5610.05990.06230.06332.8成都0.3850.3810.3600.08700.08610.08143.6北京0.3860.3930.3640.43530.44340.41163.8塘廈0.4710.4590.493

9、0.10630.10370.11133.72.2 精密度實驗(shyn)精密量取烏頭堿對照品溶液(rngy)2 ml，按標(biāo)準(zhǔn)曲線項下操作，測定吸光度5次，并計算RSD值。計算平均吸光度。結(jié)果(ji gu)見表2。表2 精密度實驗結(jié)果(n=5)吸光度平均值RSD（%）0.3650.3650.20.3650.3640.3640.3652.3 重復(fù)性實驗稱取同一批號的藥材粉末(附子1號)1 g，精密稱定，按供試品溶液制備項下操作制備供試品，測定吸光度，平行制備6份。結(jié)果見表4。表4 重復(fù)性實驗結(jié)果(n=6) Table.4 Experiment results of repeatability (n

10、=6) 樣品號取樣量/g吸光度含量/%11.01180.3280.022121.00240.3280.022231.04700.3280.021841.02290.3290.022051.01620.3240.021861.00780.3290.0222 EQ s0.02200.0002RSD/%0.802.4 穩(wěn)定性實驗(shyn)精密稱取藥材粉末(附子1號)1 g，按供試品溶液制備項下操作(cozu)，并依法測定吸光度，每隔15 min測定1次，最后2h再測1次，共測定5次。結(jié)果見表6。表6 穩(wěn)定性試驗結(jié)果(ji gu)（附子1號）Table.5 Experiment results of

11、 stability（Aconite 1）時間（min）吸光度平均值RSD（%）00.3200.3240.29150.320300.323450.324500.327650.3271200.3272.5 加樣回收率實驗精密稱取已測定(cdng)含量的藥材1g，加入濃度為0.02368 mg/ml、0.03552 mg/ml、0.04736 mg/ml的烏頭堿對照品溶液1ml，照供試品溶液制備項下的方法制備，依法測定(cdng)吸光度，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出供試品溶液中烏頭堿的量（g/ml），并按下式計算(j sun)回收率:加樣回收率（%）=（測得量-樣品中含量）/加入量100%，結(jié)果見表6。表6

12、加樣回收實驗結(jié)果Table.6 Experiment results of recovery ratio序號樣品量/g原有量/mg加入量/mg測得量/mg回收率/%平均回收率/%RSD/%11.01170.22260.23680.458199.4699.731.821.00270.22060.23680.4583100.4031.02590.22570.23680.460199.0041.01580.22350.35520.573398.5051.02590.22570.35520.574198.1061.03560.22780.35520.573497.3071.02580.22570.47360.7012100.4081.01490.22330.47360.7122103.2491.03560.22780.47360.7071101.202.6樣