1、器材預備器材預備醫學微生物學實驗綜合性實驗一v膿汁和糞便標本中病原菌的檢測五v糖發酵實驗v藥敏實驗v血漿凝固酶實驗v半固體接種法糖發酵實驗v不同細菌具有不同的糖分解酶，分解各種糖的代謝產物也各不一樣，有的產酸，有的產酸又產氣，據此，可以鑒別各種細菌。v糖發酵管：葡萄糖、乳糖、麥芽糖、甘露醇和蔗糖。v指示劑：溴甲酚紫，PH6.8為紫色，5.2為黃色。v原理：多糖單糖丙酮酸、酸性產物(產氣) pH指示劑呈酸性變色。v結果:培育基變色無氣泡“+ ，培育基變色有氣泡“，培育基不變色“-。v運用：察看細菌對糖的分解情況，常用于腸道桿菌的鑒定。細菌的糖發酵實驗P16 甲,乙紫黑葡萄糖,乳糖丙,丁粉紅葡萄糖

2、,乳糖2-3cm37，24小時甲，乙，丙 ，丁實驗分組實驗分組v倆倆相對4人為一組,組號編在電源插座上。v每組按從前到后,從左到右的順序，分別編號為甲、乙、丙、丁。 甲 乙 4丙 丁甲 乙 3丙 丁甲 乙 2丙 丁甲 乙 1丙 丁甲 乙 5丙 丁甲 乙 8丙 丁甲 乙 7丙 丁甲 乙 6丙 丁甲 乙 10丙 丁甲 乙 9丙 丁 講 臺細菌藥物敏感性實驗P20v磺胺1907年發現，1935年臨床運用。青霉素1929年發現，1945年臨床運用。v我國住院病人抗菌素運用率達70%，新生兒病房抗菌素運用率達100%。v為了防止抗菌藥物運用的盲目性，防止因不合理用藥，導致耐藥性細菌的增多、藥物中毒、治療

3、失敗、菌群失調等問題的發生，用藥前時，做藥物敏感性實驗。藥物敏感性實驗紙片分散法將含有定量抗菌素的紙片，平貼在曾經接種了實驗細菌的平板上。紙片中的抗菌素吸收培育基的水分，溶解后不斷向周圍分散，構成遞減的梯度濃度。敏感細菌在紙片周圍的生長遭到抑制，而構成沒有細菌生長的抑菌圈依抑菌圈的有無、大小來判別敏感性。敏感Sensitive ：實驗細菌所引起的感染，可以用常用劑量的某種抗菌藥物治愈。耐藥Resistant ：實驗細菌引起的感染，不能用該種抗菌藥物治愈。實驗菌用量以對照瓊脂平板外表生長的菌落呈密集或半密集為宜。實驗分工每人實驗分工每人1 1塊平板塊平板v甲黃色菌液平板 + 青、鏈、慶紙片。v乙

4、白色菌液平板 + 青、鏈、慶紙片。v丙紫黑菌液平板 + 青、鏈、慶紙片。v丁粉紅菌液平板 + 青、鏈、慶紙片。實驗方法實驗方法v接種環取菌液36ul2環留意：操作時，不得同時握持菌液管和平板，以免菌液倒出來，呵斥污染。平板密集劃線接種細菌紗窗樣。設計三點，三點之間等邊三角間隔，點間隔平皿邊緣約15mm。作標志：青、鏈、慶。鑷子火焰消毒，夾取相應的藥物紙片，平貼在已設定的位置上，按壓，最后鑷子火焰滅菌。371824小時培育，察看結果。v實驗菌用量以對照瓊脂平板外表生長的菌落呈密集或半密集為宜。滅菌滅菌 取樣取樣甲甲黃色菌液黃色菌液乙乙白色菌液白色菌液丙丙紫黑菌液紫黑菌液丁丁粉紅菌液粉紅菌液 6u

5、l+6ul紙片分散法：菌液 密集涂布平板 標志:青、鏈、慶 貼青霉素、鏈霉素、慶大霉素紙片 按壓 倒置培育1824小時 察看結果。青青鏈鏈慶慶青青鏈鏈慶慶標志標志貼抗菌素紙片貼抗菌素紙片血漿凝固酶實驗血漿凝固酶實驗P17v致病性葡萄球菌能產生血漿凝固酶，使血漿中的纖維蛋白原轉變為纖維蛋白,附著于細菌外表,產生凝固。v葡萄球菌產生兩種凝固酶:一種是與細胞壁結合的凝固酶,為結合凝固酶;另一種是細胞釋放于培育基中,為游離凝固酶；二者抗原性不同。v在體內，凝固的血漿堆積在菌體外表，妨礙吞噬細胞的吞噬和殺菌物質的破壞，從而有利于細菌的生長繁衍、引起感染。v體外實驗有試管法和玻片法兩種。v試管法檢測游離凝

6、固酶，結果準確。v玻片法只能檢測結合凝固酶，比較簡便、常作為快速挑選技術金黃色葡萄球菌中有10%15%可呈陰性反響。凝固酶實驗試管法：游離凝固酶凝血酶 纖維蛋白原纖維蛋白血漿凝固凝固酶實驗玻片法： 結合凝固酶菌體外表 纖維蛋白原纖維蛋白細菌凝集玻片法v取二滴兔血漿置于干凈的玻片上。v分別用接種環取白色和黃色菌苔(23個菌落的菌量)與血漿研磨混合，立刻察看結果。v出現明顯凝塊為陽性，否那么為陰性。v白色菌苔容易混合均勻，黃色菌苔常涂抹不開。v反復旋轉或側傾載玻片，讓菌液流動起來，結果更明顯。載玻片1張兔血漿各15ul右側血漿與白色菌苔混合左側血漿與黃色菌苔混合半固體接種法半固體接種法P11P11

7、具有鞭毛可以真正運動的細菌，在半固具有鞭毛可以真正運動的細菌，在半固體培基中體培基中, , 能沖破低濃度瓊脂的阻力，自接種部能沖破低濃度瓊脂的阻力，自接種部位向周圍移位向周圍移 動分散生長，培育基呈分散云霧狀混動分散生長，培育基呈分散云霧狀混濁形狀。濁形狀。無鞭毛不能運動的細菌，只能沿著穿刺無鞭毛不能運動的細菌，只能沿著穿刺線生長線生長 繁衍，穿刺線邊緣明晰，周圍培育基繁衍，穿刺線邊緣明晰，周圍培育基清澈透明。清澈透明。方法：接種針斜面取菌，從半固體培育方法：接種針斜面取菌，從半固體培育基中心，垂直刺入，到達培育基底部基中心，垂直刺入，到達培育基底部4/54/5處，再循原來的道路，退出接種針。

8、處，再循原來的道路，退出接種針。 甲，乙甲，乙紫黑紫黑 。丙，丁。丙，丁粉紅。粉紅。半固體接種法P11甲，乙紫黑丙，丁粉紅標志:組號,顏色37,24小時平安警告v本次實驗糖發酵實驗、藥敏實驗、血漿凝固酶實驗和半固體接種操作一次，能夠產生幾百個微生物氣溶膠顆粒。v氣溶膠粒徑100um沉降很快,50um在0.4s內分散開,5um經過呼吸道直接到達肺泡。vPike博士對實驗室感染統計分析結果發現，不明緣由的感染高達82%，大多數是氣溶膠在空氣中分散引起的。v實驗時應坐著，在酒精燈半徑20厘米范圍內操作，堅持安靜、有序，盡量少說話、少走動，以免感染病原菌。思索題v細菌生化反響在感染性疾病診斷中有何重要

9、意義? v為什么要在發酵管液面上方大約23cm處切割？v培育時，微量糖發酵管管口不能朝上，為什么？v抗生素敏感性實驗有何實踐意義?v血漿凝固酶實驗察看終了，應將載玻片立刻放入消毒缸內，為什么?v半固體穿刺接種時，為什么要強調“原路前往?v為保證明驗結果的可靠性，他以為上述實驗應還設立哪些對照? v細菌的糖發酵實驗P16v 甲紫黑葡萄糖，乙 紫黑乳糖，v 丙粉紅葡萄糖，丁 粉紅乳糖 。v細菌的藥敏實驗P20菌液v 甲黃色平板 + 青、鏈、慶紙片v 乙白色平板 + 青、鏈、慶紙片v 丙紫黑平板 + 青、鏈、慶紙片 v 丁粉紅平板 + 青、鏈、慶紙片 v血漿凝固酶實驗P17v 兔血漿15ul+黃色,白色v半固體接種法P11v 甲,乙紫黑 v 丙,丁粉紅微量發酵管管口朝下，微量發酵管管口朝下，3737培育培育18182424小時。小時。常用器材擺放順序：電源插座常用器材擺放順序：電源插座試管架試管架酒精燈酒精燈污物盤。污物盤。試管架上器材：按接