1、潔凈室環境控制與檢測方法潔凈室環境控制與檢測方法一、目的對塵粒及微生物污染進行控制并監測，使被控制的房間或區域達到生產所需的潔凈度要求。二、相關術語1 .潔凈室（區）指對塵粒及微生物污染規定需進行環境控制的房間或區域。其建筑結構、裝備及其使用均具有減少對該區域內污染源的介入、產生和滯留的功能。其他相關參數如：溫度、濕度、壓力也有必要控制。2 .潔凈室狀態（1）空態（as-built）潔凈室（區）在凈化空氣調節系統已安裝完畢且功能完備的情況下，但是沒有生產設備、原材料或人員的狀態。（2）靜態（at-rest）靜態a潔凈室（區）在凈化空氣調節系統已安裝完畢且功能完備的情況下，生產工藝設備已安裝、潔

2、凈室（區）內沒有生產人員的狀態。靜態b潔凈室（區）在生產操作全部結束，生產操作人員撤離現場并經過20min自凈后。(3)動態(operational)潔凈室(區)已處于正常生產狀態，設備在指定的方式下進行，并且有指定的人員按照規范操作。3 .氣流形式(1) 單向流(unidirectionalairflow)沿單一方向呈平行流線并且與氣流方向垂直的斷面上風速均勻的氣流。與水平面垂直的叫垂直單向流(verticalunidirectionalairflow),與水平面平行的叫水平單向流(horizontalunidirectionalairflow)。(2)三營單向流(non-unidirect

3、ionalairflow)具有多個通路循環特性或氣流方向不平行的氣流。4 .潔凈工作臺(cleanbench)一種工作臺或者與之類似的一個封閉圍擋工作區。其特點是自身能夠供給經過過濾的空氣或氣體，按氣流形式分為垂直單向流工作臺、水平單向流工作臺等。5 .潔凈度(cleanliness)潔凈環境內單位體積空氣中含大于或等于某一粒徑懸浮粒子的統計數量來區分的潔凈程度6 .懸浮粒子(airborneparticle)用于空氣潔凈度分級的空氣懸浮粒子尺寸范圍在0.1-1000mm的固體和液體粒子。對于懸浮粒子計數測量儀，一個微粒球的面積或體積產生一個響應值，不同的響應值等價于不同的微粒直徑。7 .菌落

4、(colonyformingunits)微生物培養后，由一個或幾個微生物繁殖而形成的微生物集落，簡稱CFU8 .浮游菌(airbornemicrobe)按照標準(GBT16293-2010)提及的方法收集懸浮在空氣中的活微生物粒子，通過專門的培養基，在適宜的生長條件下繁殖到可見的菌落數。9 .浮游菌濃度(airbornemicrobeconcentration)單位體積空氣中含浮游菌菌落數的多少，以計數濃度表示，單位是CFU/m或CFU/L10 .沉降菌(settlingmicrobe)用標準(GBT16294-2010)提及的方法收集空氣中的活微生物粒子，通過專門的培養基，在適宜的生長條件下

5、繁殖到可見的菌落數。11 .沉降菌菌落數（settlingmicrobeplatecount）規定時間內每個平板培養皿收集到空氣中沉降菌的數目，以CFU血表示。三、潔凈室環境監測指標溫度、濕度、風速、靜壓差（預測試指標）懸浮粒子、沉降菌、浮游菌。四、預測試指標1 .溫度和相對濕度的測試潔凈室（區）的溫度和濕度應與其生產及工藝要求相適應（無特殊要求時，溫度在18-26C,相對濕度在45-65%為宜）。2 .靜壓差的測試潔凈室與非潔凈室之間的靜壓差應大于10Pa;相鄰不同潔凈級別的潔凈室之間的壓差應大于5Pa;潔凈區與室外壓差應大于12Pa。3 .風量、風速的測試（1）非單向流潔凈室系統的各項實測

6、風量及換氣次數應大于各自的設計風量或換氣次數，但不應超過20%室內各風口的風量與各風口設計風量之差均不應超過設計風量的士15%(2)單向流凈室實測室內平均風速應大于設計風速，但不應超過15%五、懸浮粒子測試方法在空態或靜態測試時，懸浮粒子采樣點數目及其布置應力求均勻，并不得少于最少采樣點數目；在動態測試時，懸浮粒子采樣點數目及其布置應根據產品的生產及工藝關鍵操作區設置。1 .儀器光散射粒子計數器(用于粒徑大于或等于0.5um的懸浮粒子計數)、激光粒子計數器(用于粒徑大于或等于0.1um的懸浮粒子計數)2 .最少采樣點數目的確定方法(1)最少采樣點數目公式Nl=vA公式中：nl：最少采樣點數a:

7、潔凈室或潔凈區的面積(單位為m)0注：在水平單向層流時，面積A可以看作是與氣流方向呈垂直流動的空氣的截面積。(2)最少采樣點數目表-最少采樣點數回積m潔凈度級別10010000100000300000ar<102-3222>10-<204222>20-<408222>40-<10016422>100-<200401033>200-<400802066>400-<1000160401313>1000-<20004001003232>20008002006363注：對于100級的單向流潔凈室(區)，包括

8、100級潔凈工作臺，面積指的是送風口表面積；對于10000級以上的非單向流潔凈室(區)，面積指的是房間面積。3 .采樣點位置(1)采樣點一般在離地面0.8m高度的水平面上均勻布置。(2)采樣點多于5點時，也可以在離地面0.8-1.5m高度的區域內分層布置，但每層不少于5點。采樣點位置示意圖*14 .采樣次數的限定對任何小潔凈室（區）或局部空氣凈化區域,采樣點數目不得少于2個，總采樣點次數不得少于5次。每個采樣點的采樣次數可以多于1次，且不同采樣點的采樣次數可以不同。5.米樣量表-最小采樣量最小采樣量L/次潔凈度級別10010000100000300000>0.5m5.662.832.83

9、2.83>5m8.58.58.58.56 .采樣注意事項(1)對于單向流潔凈室(區)，粒子計數器的采樣管口應正對氣流方向；對于非單向流潔凈室(區)，粒子計數器的采樣管口宜向上。(2)布置采樣點時，應盡量避開回風口。(3)采樣時，測試人員應在采樣口的下風側，并盡量少活動。(4)采樣完畢后，宜對粒子計數器進行自凈。(5)應采取一切措施防止采樣過程的污染。7 .測試狀態(1)空態、靜態和動態三種狀態均可進行測試。(2)空態或靜態時，室內測試人員不得多于2人。8 .測試時間(1)在空態或靜態a測試時，對單向流潔凈室(區)而言，測試宜在凈化空氣調節系統正常運行時間不少于10min后開始。對非單向流

10、潔凈室，測試宜在凈化空氣調節系統正常運行時間不少于30min后開始。在靜態b測試時，對單向流潔凈室(區)，測試宜在生產操作人員撤離現場并經過10min自凈后開始；對非單向流潔凈室(區)，測試宜在生產操作人員撤離現場并經過20min自凈后開始。(2)在動態測試時，則須記錄生產開始的時間以及測試時間9 .采樣按照粒子計數器的操作規程，選擇合適的粒徑、采樣量、采樣時間及每個采樣點的采樣次數進行采樣。10 .結果計算(1)計算每個采樣點的平均懸浮粒子濃度(粒/m3)。(2)計算潔凈室的平均粒子濃度(粒/m3)。(3)計算標準差SE(4) 95婿信上限(UCL：UCL=M+t*SE表-95%置信上限的t

11、分布系數采樣點數23456789>9t6.312.922.352.132.021.941.901.86-注：當米樣點數多于9點時，不需要計算UCL11 .結果評定判斷懸浮粒子的潔凈度級別應同時滿足以下兩個條件：(1)每個采樣點的平均懸浮粒子濃度必須不大于規定的級別界限。(2)全部采樣點才懸浮粒子濃度平均值均值的95%!信上限必須不大于規定的級別界限。表-我國潔凈室（間）對懸浮粒子的技術要求（五個潔凈度等級）藥品生產質量管理規范（1998年修訂）無菌醫療器具生產管理規范YY0033-2000潔凈度級別靜態測試最大允許數（個/m3）潔凈度級別靜態測試最大允許數（個/m3）>0.5m&g

12、t;5m>0.5m>5m10035000100350001000-1000-10000350000200010000350000200010000035000002000010000035000002000030000010500000600003000001050000060000表-ISO標準中潔凈室及潔凈區對懸浮粒子的技術要求ISO等級序（N）大于或等于表中被考慮的粒徑的最大濃度限值（pc/m3空氣）0.1m0.2m0.3m0.5m1m5mISOClass1102ISOClass210024104ISOClass31000237102358ISOClass4100002370

13、102035283ISOClass510000023700102003520832219ISOClass61000000237000102000352008320293ISOClass7352000832002930ISOClass8352000083200029300ISOClass9352000008320000293000AlA2A3A4A5A6A7A8A9房間面積為80m2(8m*10m)最少采樣點數目：9采樣點布置：代表采樣點位置，旁邊的數字代表采樣編號選擇0.5mm粒徑的粒子采樣量為2.83L采樣時間設為1min每個采樣點采樣次數為2次在粒子計數器上設置參數，開始采樣六、浮游菌測試

14、方法1 .儀器和試劑浮游菌采樣儀、培養皿、大豆酪蛋白瓊脂培養基（TS四、沙氏培養基（SDA、恒溫培養箱、高壓蒸汽滅菌器。2 .最少采樣點數目參照懸浮粒子測試方法。3 .采樣點的位置參照懸浮粒子測試方法。4 .采樣次數每個采樣點一般采樣一次。5 .采樣量不同潔凈度級別的最小采樣量見表。表-最小采樣量潔凈度級別米樣量L/次1001000100005001000001003000001006 .采樣注意事項(1)對于單向流潔凈室(區)或送風口，采樣器采樣口朝向應正對氣流方向；對于非單向流潔凈室(區)，采樣口向上。(2)布置采樣點時，應盡量避開塵粒較集中的回風口。(3)采樣時，測試人員應在采樣口的下風

15、側，并盡量少活動。(4)應采取一切措施防止采樣過程的污染和其他可能對樣本的污染。(5)培養皿在用于檢測時，為避免培養皿運輸或搬運過程造成的影響，宜同時進行陰性對照試驗，每次或每個區域取1個對照皿，與采樣皿同法操作但不需暴露采樣，然后與采樣后的培養皿一起放入培養箱內培養，結果應無菌落生長。7 .測試狀態(參照懸浮粒子測試方法)8 .測試時間(參照懸浮粒子測試方法)9 .采樣及培養按照浮游菌采樣器的操作規程進行采樣。全部采樣結束后，將培養皿倒置于恒溫培養箱中培養。采用大豆酪蛋白瓊脂培養基(TS網配置的培養基經采樣后，在30-35C培養箱中培養，時間不少于2d;采用沙氏培養基(SDA配置的培養基經采

16、樣后，在20-25C培養箱中培養，時間不少于5do用計數方法得出各個培養皿的菌落數，并計算出每個測點的浮游菌平均濃度（CFU/rn或CFU/L）。表-潔凈室（區）浮游菌技術要求潔凈度級別藥品生產質量管理規范（1998修訂）_3CFU/m100<510000<100100000<500七、沉降菌測試方法1 .儀器和試劑培養皿、大豆酪蛋白瓊脂培養基（TSA、沙氏培養基（SDA、恒溫培養箱、高壓蒸汽滅菌器。2 .最少采樣點數目（參照懸浮粒子測試方法）3 .采樣點的位置（參照懸浮粒子測試方法）4 .采樣次數（參照懸浮粒子測試方法）5 .最少培養皿數在滿足最少采樣點數目的同時，還宜滿足最少培養皿數。表-最少培養皿數潔凈度級別最少培養皿數10014100002100000230000026 .采樣注意事項（參照懸浮粒子測試方法）7 .測試狀態（參照懸浮粒子測試方法）8 .測試時間（參照懸浮粒子測試方法）9 .采樣及培