1、天然藥化常見的鑒別反應(部分)一、顏色反應的對比(一)、三菇類的顏色反應1 .Liebermann-Burchard反應將樣品溶于乙酸酊中，加濃硫酸-乙酸酊(1:20)數滴，可產生黃-紅-紫-藍等顏色變化，最后褪色。2 .Kahldenberg反應將樣品的氯仿或醇溶液點于濾紙上，噴20%五氯化睇的氯仿溶液(或三氯化睇飽和的氯仿溶液)，干燥后60c70c加熱，顯藍色、灰藍色、灰紫色等多種顏色。3 .Rosen-Heimer反應將樣品溶液滴在濾紙上，噴25%三氯乙酸乙醇溶液，加熱至100C,呈紅色，逐漸變為紫色。4 .Salkowski反應將樣品溶于氯仿，加入濃硫酸后，在硫酸層呈現紅色或藍色，氯仿

2、層有綠色熒光出現。5.Tschugaeff反應將樣品溶于冰乙酸中，加乙酰氯數滴及氯化鋅結晶數粒，稍加熱，則呈現淡紅色或紫紅色。(二)、管體類化合物的顏色反應1 .Liebermann-Burchard反應將樣品溶于氯仿中，加濃硫酸-乙酸酊(1:20)數滴，可產生紅-紫-藍-綠-污綠等顏色變化，最后褪色。也可將樣品溶于冰乙酸，加試劑產生同樣的反應。2 .Kahldenberg反應將樣品的氯仿或醇溶液點于濾紙上，噴20%五氯化睇的氯仿溶液，干燥后60c70c加熱，樣品斑點顯藍色、灰藍色、灰紫色等多種顏色。3 .Rosen-Heimer反應將樣品溶液滴在濾紙上，噴25%三氯乙酸乙醇溶液，加熱至60C

3、,呈紅色，逐漸變為紫色。4 .Salkowski反應將樣品溶于氯仿，加入濃硫酸后，在硫酸層呈現紅色或藍色，氯仿層有綠色熒光出現。5.Tschugaeff反應將樣品溶于冰乙酸中，加乙酰氯數滴及氯化鋅結晶數粒，稍加熱，則呈現淡紅色或紫紅色。二、強心昔的顏色反應1 .C17位上不飽和內酯環的顏色反應甲型強心昔在堿性醇溶液中，五元不飽和內酯環上的雙鍵移位產生C22活性亞甲基，能與活性亞甲基試劑作用而顯色。乙型強心昔在堿性醇溶液中，不能產生活性亞甲基，無此類反應。所以，利用此類反應可區別甲、乙型強心昔。(1) Legal反應：又稱亞硝酰鐵氧化鈉試劑反應。取樣品12mg,溶于口比咤23滴中，加3%亞硝酰鐵

4、氧化鈉溶液和2mol/L氫氧化鈉溶液各1滴，反應液呈深紅色并漸漸退去。(2) Raymond反應：陽性反應是反應液呈紫紅色。(3) Kedd反應：又稱3,5-二硝基苯甲酸試劑反應。陽性反應是反應液呈紅色或紫紅色。(4) Baljet反應：又稱堿性苦味酸試劑反應。陽性反應是反應液呈現橙色或橙紅色。2 .a-去氧糖顏色反應(1) Keller-Kiliani(K-K)反應：此反應在冰乙酸溶液中進行，如有“-去氧糖，乙酸層顯藍色。界面的顏色隨昔元羥基、雙鍵的位置和數目不同而異，可顯紅色、綠色、黃色等。注意此反應只對游離的“-去氧糖或“去氧糖與昔元連接的昔顯色，對a-去氧糖和葡萄糖或其他羥基糖連接的二

5、糖、三糖及乙酰化的a-去氧糖不顯色。因它們在此條件下不能水解出a-去氧糖。此反應陽性可肯定a-去氧糖的存在，但對此反應不顯色的有時未必具有完全的否定意義。(2)咕噸氫醇反應：反應試劑為咕噸氫醇試劑，此反應極為靈敏，只要分子中有a-去氧糖即顯紅色，且分子中的“去氧糖可定量地發生反應，故還可用于定量分析。(3)對-二甲氨基苯甲醛反應：分子中若有a-去氧糖可顯灰紅色斑點。(4)過碘酸-對硝基苯胺反應：此反應可在濾紙或薄層板上進行，反應過程是先噴過碘酸鈉水溶液，再噴對硝基苯胺試液，則迅速在灰黃色背底上出現深黃色斑點，置紫外燈下觀察則為棕色背底上出現黃色熒光斑點。再噴以5%氫氧化鈉甲醇溶液，則斑點轉為綠

6、色。三、醍類化合物的顏色反應醍類的顏色反應主要基于其氧化還原性質以及分子中的酚羥基性質。(1)Feigl反應：所有醍類衍生物在堿性條件下經加熱能迅速與醛類及鄰二硝基苯反應生成紫色化合物。(2)無色亞甲藍顯色試驗：無色亞甲藍溶液為苯醍類及蔡醍類的專用顯色劑。藍色斑點，與蔥醍類化合物相區別。(3) Borntrger反應：羥基醍類在堿性溶液中發生顏色改變，會使顏色加深。多呈橙、紅、紫紅及藍色。羥基蔥醍以及具有游離酚羥基的蔥醍昔均可呈色，但慈酚、慈酮、二慈酮類化合物則需氧化形成羥基蔥醍類化合物后才能呈色也就是不顯色。(4) KestingCraven反應(活性亞甲基)：苯醍及蔡醍類化合物當其醍環上有

7、未被取代的位置時，可在堿性條件下與一些含有活性次甲基試劑(如乙酰乙酸酯、丙二酸酯、丙二睛等)的醇溶液反應，生成藍綠色或藍紫色。蔡醍的苯環上如有羥基取代，此反應即減慢反應速度或不反應。意醍類化合物因醍環兩側有苯環，不能發生該反應，故可加以區別。(5)與金屬離子的反應：在蔥醍類化合物中，如果有“-酚羥基或鄰二酚羥基結構時，則可與Pb2+、Mg2+等金屬離子形成絡合物。反應靈敏，生成的顏色因分子中羥基的位置不同而不同，有助于識別羥基位置顯的顏色不同：環上有1個a-羥基橙色鄰二酚羥基一一藍紫色對二酚羥基一一顯紫到紫紅色各有1個a-羥基或還有間位羥基一一橙紅色至紅色(6)對亞硝基二甲苯胺反應：9位或10

8、位未取代的羥基慈酮類化合物，尤其是1,8-二羥基衍生物，其厥基對位的亞甲基上的氫很活潑，可與0.1%對亞硝基-二甲苯胺毗咤溶液反應縮合而產生各種顏色。本反應可作為慈酮類化合物的定性鑒別反應，不受蔥醍類、黃酮類、香豆素類、糖類及酚類化合物的干擾。四、香豆素的顏色反應(1)異羥曲酸鐵反應香豆素類成分具有內酯結構，在堿性條件下開環，與鹽酸羥胺縮合生成異羥的酸，在酸性條件下再與Fe3+絡合而顯紅色。此反應為香豆素的檢識或結構鑒定。(2)酚羥基反應香豆素類成分常具有酚羥基取代，可與三氯化鐵溶液反應產生綠色至墨綠色沉淀。常利用與三氯化鐵溶液的反應判斷酚羥基的有無。四、黃酮類顏色反應HCl-Mg：多數黃酮、

9、黃酮醇、二氫黃酮及二氫黃酮醇類化合物顯紅紫紅色；四氫硼鈉還原反應：二氫黃酮類化合物專屬性較高；錯鹽-枸檬酸反應：3-OH,5-OH;氨性氯化鋰反應：鄰二酚羥基；五氯化睇：查耳酮。1.還原反應(1)鹽酸-鎂粉反應鑒定黃酮類化合物最常用的顏色反應；多數黃酮、黃酮醇、二氫黃酮及二氫黃酮醇類化合物顯紅紫紅色，少數顯藍色或綠色，分子中特別是當B-環上有-OH或-OCH3取代時，呈現的顏色亦即隨之加深。查耳酮、橙酮、兒茶素類無該顯色反應；異黃酮類除少數例外，也不顯色。注意事項：利用此反應進行黃酮類化合物的鑒別時，需注意花色素類及部分橙酮、查耳酮類等單純在濃鹽酸酸性下也會發生顏色變化，出現假陽性結果。操作：

10、必要時需預先作空白對照實驗，即在供試液中不加鎂粉，而僅加入濃鹽酸進行觀察，若產生紅色，則表明供試液中含有花色素類或某些橙酮或查耳酮類。(2)鈉汞齊還原反應黃酮、二氫黃酮、異黃酮、二氫異黃酮類顯紅色；黃酮醇類顯黃淡紅色；二氫黃酮醇類顯棕黃色。(3)四氫硼鈉還原反應四氫硼鈉(NaBH4)是對二氫黃酮類化合物專屬性較高的一種還原劑，此反應可在試管中或濾紙上進行。現象：二氫黃酮類或二氫黃酮醇類被還原產生紅紫紅色，其他黃酮類均為負反應。應用：可用于鑒別二氫黃酮類、二氫黃酮醇類和其他黃酮類化合物。2.與金屬鹽類試劑的絡合反應具有3-羥基、4-默基或5-羥基、4-默基或鄰二酚羥基等結構，則可以與許多金屬鹽類

11、試劑如鋁鹽、錯鹽、鋸鹽等反應，生成有色的絡合物或有色沉淀，有的還產生熒光。(1)三氯化鋁反應生成的絡合物多呈黃色，置紫外燈下顯鮮黃色熒光，但4'-羥基黃酮醇或7,4'-二羥基黃酮醇顯天藍色熒光。(2)錯鹽-枸檬酸反應應用：利用此反應鑒別黃酮類化合物分子中3-或5-OH的存在與否。若出現黃色，說明3-OH或5-OH與錯鹽生成了絡合物。繼之再加入枸檬酸，如黃色不減褪，示有3-OH或3,5-二OH;如果黃色顯著減褪，示無3-OH,但有5-OH。原理：因為5-羥基、4-厥基與錯鹽生成的絡合物沒有3-羥基、4-厥基錯絡合物穩定。容易被弱酸分解。此反應也可在濾紙上進行，得到的錯鹽絡合物斑點

12、多呈黃綠色并有熒光。(3)氨性氯化鋰反應如產生綠色至棕色乃至黑色沉淀，則表示有鄰二酚羥基。(4)三氯化鐵反應多含有酚羥基，能與三氯化鐵水溶液或醇溶液發生顯色反應，可呈現紫、綠、藍等不同顏色。3 .堿性試劑反應生成黃色、橙色或紅色等。4 .硼酸顯色反應5-羥基黃酮、6'-羥基查耳酮，可與硼酸反應，產生亮黃色。一般在草酸存在下顯黃色并具有綠色熒光。在枸檬酸丙酮存在的條件下，則只顯黃色而無熒光。5 .五氯化睇反應查耳酮類則生成紅色或紫紅色沉淀，而黃酮、二氫黃酮及黃酮醇類顯黃色至橙色。應用：區別查耳酮類與其他黃酮類化合物。6 .其他顯色反應應用：Gibb's反應也可用于鑒別酚羥基對位是

13、否被取代。方法：酚羥基對位未被取代者在加入Gibb's試劑后即顯藍色或藍綠色。1 .還原反應(1)鹽酸-鎂粉反應鑒定黃酮類化合物最常用的顏色反應；多數黃酮、黃酮醇、二氫黃酮及二氫黃酮醇類化合物顯紅紫紅色，少數顯藍色或綠色，分子中特別是當B-環上有-OH或-0CH3取代時，呈現的顏色亦即隨之加深。查耳酮、橙酮、兒茶素類無該顯色反應；異黃酮類除少數例外，也不顯色。注意事項：利用此反應進行黃酮類化合物的鑒別時，需注意花色素類及部分橙酮、查耳酮類等單純在濃鹽酸酸性下也會發生顏色變化，出現假陽性結果。操作：必要時需預先作空白對照實驗，即在供試液中不加鎂粉，而僅加入濃鹽酸進行觀察，若產生紅色，則表

14、明供試液中含有花色素類或某些橙酮或查耳酮類。(2)鈉汞齊還原反應方法：樣品的乙醇溶液中加入鈉汞齊，放置數分鐘至數小時或加熱，過濾，濾液用鹽酸酸化。現象：黃酮、二氫黃酮、異黃酮、二氫異黃酮類顯紅色；黃酮醇類顯黃淡紅色；二氫黃酮醇類顯棕黃色。(3)四氫硼鈉還原反應四氫硼鈉(NaBH4)是對二氫黃酮類化合物專屬性較高的一種還原劑，此反應可在試管中或濾紙上進行。現象：二氫黃酮類或二氫黃酮醇類被還原產生紅紫紅色，其他黃酮類均為負反應。應用：可用于鑒別二氫黃酮類、二氫黃酮醇類和其他黃酮類化合物。2 .與金屬鹽類試劑的絡合反應黃酮類化合物分子中若具有3-羥基、4-默基或5-羥基、4-默基或鄰二酚羥基等結構，

15、則可以與許多金屬鹽類試劑如鋁鹽、錯鹽、鋸鹽等反應，生成有色的絡合物或有色沉淀，有的還產生火光。(1)三氯化鋁反應方法：此反應可在濾紙、薄層上或試管中進行。現象：生成的絡合物多呈黃色，置紫外燈下顯鮮黃色熒光，但4'-羥基黃酮醇或7,4'-二羥基黃酮醇顯天藍色熒光。(2)錯鹽-枸檬酸反應應用：利用此反應鑒別黃酮類化合物分子中3-或5-OH的存在與否。方法：是取樣品0.51mg,用甲醇10ml溶解，加2%二氯氧錯甲醇溶液1ml,若出現黃色，說明3-OH或5-OH與錯鹽生成了絡合物。繼之再加入2%枸檬酸甲醇溶液，如黃色不減褪，示有3-OH或3,5-二0H;如果黃色顯著減褪，示無3-OH

16、,但有5-OH。原理：因為5-羥基、4-厥基與錯鹽生成的絡合物沒有3-羥基、4-厥基錯絡合物穩定。容易被弱酸分解。此反應也可在濾紙上進行，得到的錯鹽絡合物斑點多呈黃綠色并有熒光。(3)氨性氯化鋰反應黃酮類化合物的分子中如果有鄰二酚羥基，則可與氨性氯化鋰試劑反應，如產生綠色至棕色乃至黑色沉淀，則表示有鄰二酚羥基。(4)三氯化鐵反應多數黃酮類化合物分子中含有酚羥基，能與三氯化鐵水溶液或醇溶液發生顯色反應，可呈現紫、綠、藍等不同顏色。3 .堿性試劑反應現象：黃酮類化合物與堿性溶液可生成黃色、橙色或紅色等。應用：對于鑒別黃酮類化合物的結構類型有一定意義。還可幫助鑒別分子中某些結構特征。4 .硼酸顯色反

17、應5-羥基黃酮、6'夷基查耳酮類化合物在無機酸或有機酸存在條件下，可與硼酸反應，產生亮黃色。一般在草酸存在下顯黃色并具有綠色熒光。在枸檬酸丙酮存在的條件下，則只顯黃色而無熒光。5 .五氯化睇反應方法：樣品的無水四氯化碳溶液，加2%五氯化睇的四氯化碳溶液，若為查耳酮類則生成紅色或紫紅色沉淀，而黃酮、二氫黃酮及黃酮醇類顯黃色至橙色，應用：查耳酮類與其他黃酮類化合物。6 .其他顯色反應應用：Gibb's反應也可用于鑒別黃酮類化合物酚羥基對位是否被取代。方法：將樣品溶于毗咤中，酚羥基對位未被取代者在加入Gibb's試劑后即顯藍色或藍綠色。顯色總結：HCl-Mg：多數黃酮、黃酮醇

18、、二氫黃酮及二氫黃酮醇類化合物顯紅紫紅色；四氫硼鈉還原反應：二氫黃酮類化合物專屬性較高；錯鹽-枸檬酸反應：3-OH,5-OH;氨性氯化鋰反應：鄰二酚羥基；五氯化睇：查耳酮。膽汁酸類除具有管體母核的顏色反應外，尚具有以下顏色反應：(1) Pettenkofer反應：取膽汁加蒸儲水及10%蔗糖溶液搖勻，沿試管管壁加入濃硫酸，則在兩液分界處出現紫色環。其原理是蔗糖經濃硫酸作用生成羥甲基糠醛，后者可與膽汁酸結合成紫色物質。(2) GregoryPascoe反應：取膽汁加45%硫酸及0.3%糠醛，水浴加熱，膽酸存在的溶液顯藍色。本反應可用于膽酸的定量分析。(3) Hammarsten反應：取少量樣品，用

19、20%銘酸溶液(20gCrO3在少量水中，用乙酸加至100m1)溶解，溫熱，膽酸為紫色，鵝去氧膽酸不顯色。Molish反應-是糖和昔類的檢識反應。樣品+濃硫酸+a蔡酚=界面處紫色環。碳昔和糖醛酸與Molish陰性。Smith降解一檢測糖的種類，連接方式，氧環大小特點：反應條件溫和、易得到原昔元適用：昔元不穩定的昔和碳昔，不適合昔元上有鄰二醇羥基或易被氧化的基團的昔。樣品(含稀醇)+NaIO4哪開裂成醛+NaBH4=f白醇，再調pH=2,放置。Smith裂解獲得連一個醛基的昔元異羥的酸鐵反應-鑒定內酯環的存在：堿性條件下，香豆素內酯開環，并與鹽酸羥胺縮合成異羥的酸，再在酸性條件下與三價鐵離子絡合成鹽而顯紅色。酚羥基反應：具酚羥基取代的香豆素類在水溶液中可與三氯化鐵試劑絡合而產生不同的顏色。酚羥基的對位未被取代，6-位上沒有取代，內酯環堿化開環后，可與Gibb's試齊J、Emerson試劑反應。Gibb's反應：2,6-二氯(澳)苯醍氯亞胺試劑藍色。Emerson反應：2%的4-氨基安替匹林和8%的鐵氧化鉀試劑紅色。.Fe