1、實(shí)驗(yàn)一植物葉綠素含量的測定（分光光度法）（張憲政，1992）、原理根據(jù)葉綠體色素提取液對可見光譜的吸收，利用分光光度計(jì)在某一特定波長測定其吸光度，即可用公式計(jì)算出提取液中各色素的含量。根據(jù)朗伯比爾定律，某有色溶液的吸光度與其中溶質(zhì)濃度和液層厚度成正比，即=式中：比例常數(shù)當(dāng)溶液濃度以百分濃度為單位，液層厚度為時(shí)，為該物質(zhì)的吸光系數(shù)。各種有色物質(zhì)溶液在不同波長下的吸光系數(shù)可通過測定已知濃度的純物質(zhì)在不同波長下的吸光度而求得。 如果溶液中有數(shù)種吸光物質(zhì)，則此混合液在某一波長下的總吸光度等于各組分在相應(yīng)波長下吸光度的總和。這就是吸光度的加和性。今欲測定葉綠體色素混合提取液中葉綠素、和類胡蘿卜素的含量，

2、只需測定該提取液在三個(gè)特定波長下的吸光度，并根據(jù)葉綠素、及類胡蘿卜素在該波長下的吸光系數(shù)即可求出其濃度。在測定葉綠素、時(shí)為了排除類胡蘿卜素的干擾，所用單色光的波長選擇葉綠素在紅光區(qū)的最大吸收峰。高等植物中葉綠素有兩種：葉綠素和，兩者均易溶于乙醇、乙醍、丙酮和氯仿。葉綠素和葉綠素的比值反映植物對光能利用效率的大小，比值高則大，則反之。二、材料、儀器設(shè)備及試劑試劑：）乙醇（或丙酮）三、實(shí)驗(yàn)步驟,提取直至無綠色為止稱取剪碎的新鮮樣品【比如陽生植物葉綠素和葉綠素的比值較大【】陰生植物葉綠素和葉綠素的比值較小、丙酮熔點(diǎn)；沸點(diǎn)；是一種無色透明液體，有特把葉綠體色素提取液倒入光徑的比色杯內(nèi)，以乙醇為空白，在

3、波長下測定吸光度。四、實(shí)驗(yàn)結(jié)果按計(jì)算丙酮法法）【可以用于丙酮乙醇混合法和丙酮提取法的計(jì)算】葉綠素注:葉綠素的含量（的總含量（公式葉綠素的含量（葉綠素、葉綠素和葉綠素的比值反映植物對光能利用率殊的辛辣氣味易溶于水和甲醇、乙醇、乙醍、氯仿、毗咤等有機(jī)溶劑下一步實(shí)驗(yàn)方法比較【】乙醇直接提?。╒ V）【乙醇加熱提?。T瑞云，）【】無水酒精和丙酮等體積混合提取實(shí)驗(yàn)二、不良環(huán)境對植物細(xì)胞膜的傷害（張憲政，I）原理植物組織在受到各種不利的環(huán)境條件（如干旱、低溫、高溫、鹽漬和大氣污染）危害時(shí)，細(xì)胞膜的結(jié)構(gòu)和功能首先受到傷害，細(xì)胞膜透性增大。若將受傷害的組織浸入無離子水中，其外滲液中電解質(zhì)的含量比正常組織外滲液

4、中含量增加，組織受傷害越嚴(yán)重，電解質(zhì)含量增加越多。用電導(dǎo)儀測定外滲液電導(dǎo)率的變化， 可反映出質(zhì)膜受傷害的程度。 在電解質(zhì)外滲透的同時(shí)， 細(xì)胞內(nèi)可溶性有機(jī)物也隨之滲出，引起外滲液可溶性糖、氨基酸、核甘酸等含量增加，氨基酸和核甘酸對紫外光有吸收，對紫外分光光度計(jì)測定受傷害組織外滲液消光值，同樣可反映出質(zhì)膜受傷害的程度。用電導(dǎo)儀法和紫外法測定結(jié)果有很好的一致性。二、方法步驟、取樣及處理采用電導(dǎo)法張憲政，：將選取的幼嫩葉片和成熟葉片剪下，包在密封袋內(nèi)置于冰盒中帶回實(shí)驗(yàn)室。將新鮮的葉樣先用自來水輕輕沖洗葉片，除去表面沾污物，再用去離子水沖洗次，用濾紙輕輕吸干葉片表面水分，稱并剪成切段,放入帶塞試管中，加

5、入去離子，浸沒樣品，各處理浸泡時(shí)間和測定溫度一致，在室溫下進(jìn)行，用型電導(dǎo)儀測其電導(dǎo)率，然后沸水浴,冷卻至室溫再測一次總電導(dǎo)率值。以相對電導(dǎo)率表示細(xì)胞質(zhì)膜透性大小。、計(jì)算:植物組織浸泡的電導(dǎo)率，特稱外滲電導(dǎo)率，此測定方法稱外滲電導(dǎo)率法。（）外滲電導(dǎo)率（測定電導(dǎo)率稱取質(zhì)量或（）測定電導(dǎo)率稱取質(zhì)量量取體積（）相對電解質(zhì)滲出率電解質(zhì)滲出率（）（浸泡液電導(dǎo)率）（煮沸后電導(dǎo)率）X電解質(zhì)滲出率浸泡液電導(dǎo)率本底電導(dǎo)率（煮沸后電導(dǎo)率）本底電導(dǎo)率X式中：組織殺死前外滲液的電導(dǎo)值；組織殺死后外滲液的電導(dǎo)值。注：、事先測定水的電導(dǎo)率、用吸水紙吸干探頭的水分實(shí)驗(yàn)三植物體內(nèi)游離脯氨酸含量的測定一、目的在逆境條件下（旱、熱

6、、冷、凍），植物體內(nèi)脯氨酸的含量顯著增加，植物體內(nèi)脯氨酸含量在一定程度上反映了植物的抗逆性，抗旱性強(qiáng)的品種積累的脯氨酸多。因此測定脯氨酸含量可以作為抗旱育種的生理指標(biāo)。另外，由于脯氨酸親水性極強(qiáng)，能穩(wěn)定原生質(zhì)膠體及組織內(nèi)的代謝過程，因而能降低冰點(diǎn)，有防止細(xì)胞脫水的作用。在低溫條件下，植物組織中脯氨酸增加，可提高植物的抗寒性，因此，亦可作為抗寒育種的生理指標(biāo)。二、原理磺基水楊酸對脯氨酸有特定反應(yīng)，當(dāng)用磺基水楊酸提取植物樣品時(shí)，脯氨酸便游離于磺基水楊酸溶液中。 然后用酸性苗三酮加熱處理后， 苗三酮與脯氨酸反應(yīng)， 生成穩(wěn)定的紅色化合物， 再用甲苯處理，則色素全部轉(zhuǎn)移至甲苯中，色素的深淺即表示脯氨酸含

7、量的高低。在波長下測定吸光度，即可從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出脯氨酸的含量,三、材料、儀器及試劑試劑及配制：%酸性苗三酮溶液配制：將苗三酮溶于冰醋酸和磷酸中（原液稀釋倍），攪拌加熱（C C）溶解，貯于 C C 冰箱中，日有效。（）%磺基水楊酸配配制：磺基水楊酸加蒸儲水溶解后定容至。（）（）W W 脯氨酸標(biāo)準(zhǔn)母液配制:I I 精確稱取脯氨酸，倒入小燒杯內(nèi)，用少量蒸儲水溶解，再倒入容量瓶中，加蒸儲水定容至刻度（為 W W-脯氨酸母液），再吸取該溶液，加蒸儲水稀釋定容至，即為1 1 脯氨酸標(biāo)準(zhǔn)液。四、實(shí)驗(yàn)步驟、脯氨酸標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作取支試管，編號？按下表配制每管含量為N N 的脯氨酸標(biāo)準(zhǔn)液。加入表中試劑后，置于沸

8、水浴中加熱。取出冷卻。以去離子水溶液為空白對照，在波長處測定吸光度（）值。（提取過程中要經(jīng)常搖動）一冷卻過濾于干凈的試管中一脯氨酸提取液。線氨橫光坐準(zhǔn)定試劑管號脯氨酸標(biāo)準(zhǔn)液（）蒸儲水（）冰醋酸（）磺基水楊酸%酸性苗三酮（）每管脯氨酸含量（W W）稱取脯氨酸的提取試管葉片于%磺基水楊酸溶液一沸水浴標(biāo)準(zhǔn)曲繪制品的測以脯為吸縱標(biāo)管量，為制。號含標(biāo)值繪線的%坐度阮曲樣測定吸取酶提取液冰醋酸酸性苗三酮一沸水浴一溶液呈紅色-冷卻一取上層液于比色杯處測定吸光度（）曲五、計(jì)算結(jié)果從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出樣品測定液中脯氨酸的含量，按下公式計(jì)算樣品中脯氨酸含量:X提取液總量（脯氨酸含量（樣品鮮重（）X測定時(shí)提取液用量（）

9、公式中：從標(biāo)準(zhǔn)曲線中查得的脯氨酸含量（）實(shí)驗(yàn)四植物體內(nèi)丙二醛含量的測定一、原理丙二醛（）是由于植物官衰老或在逆境條件下受傷害，其組織或器官膜脂質(zhì)發(fā)生過氧化反應(yīng)而產(chǎn)生的。它的含量與植物衰老及逆境傷害有密切關(guān)系。測定植物體內(nèi)丙二醛含量，通常利用硫代巴比妥酸在酸性條件下加熱與組織中的丙二醛產(chǎn)生顯色反應(yīng)，生成紅棕色的三甲川（、一三甲基惡噪、一二酮），三甲川最大的吸收波長在。但是測定植物組織中時(shí)受多種物質(zhì)的干擾，其中最主要的是可溶性糖，糖與硫代巴比妥酸顯色反應(yīng)產(chǎn)物的最大吸收波長在處，在處也有吸收。植物遭受干旱、高溫、低溫等逆境脅迫時(shí)可溶性糖增加，因此測定植物組織中丙二醛與硫代巴比妥酸反應(yīng)產(chǎn)物含量時(shí)一定要

10、排除可溶性糖的干擾。此外在波長處尚有非特異的背景吸收的影響也要加以排除。低濃度的鐵離子能顯著增糖、丙二醛與硫代巴比妥酸顯色反應(yīng)中需要有一定的鐵離子，通常植物組織中鐵離子波長處測定吸光度值,即可計(jì)算出丙二醛含量二、實(shí)驗(yàn)步驟()提取度值,為的消光系數(shù)(方法二:加硫代巴比妥酸與蔗糖或丙二醛顯色反應(yīng)物在處的吸光度值，所以在蔗的含量為,根據(jù)植物樣品量和提取液的體積，加入終濃度為乙酸采用硫代巴比妥酸顯色法(趙世杰等,稱取樣品，加三氯和少量石英砂，研磨至勻漿，再加三氯乙酸進(jìn)一步研磨,勻漿后()顯色取上清液水浴上煮沸冰浴上冷卻后再離心一次。分別測定上清液在處的吸光方法一:質(zhì)量摩爾濃度式中:反應(yīng)液總量提取液體積

11、測定用用提取液量取樣葉鮮重波長下測得的吸光度值波長下測得的吸光度值為摩爾比吸收系數(shù)按下式計(jì)算提取液中濃度方程組:解得:公式中:波長下測得的吸光度值反應(yīng)液體積（）糖、分別是反應(yīng)混合液中可溶性糖、的濃度。提取液中濃度（W W 一）測定時(shí)提取液用量（）按下式計(jì)算樣品中含量提取液中濃度（W W 一）X X 提取液總量（含量（W,W,一）植物組織鮮重（試劑:實(shí)驗(yàn)五、活力測定還原法植物葉片在衰老過程中發(fā)生一系列生理生化變化，如核酸和蛋白質(zhì)含量下降、葉綠素降解、光合作用降低及內(nèi)源激素平衡失調(diào)等。這些指標(biāo)在一定程度上反映衰老過程的變化。近來大量研究表明，植物在逆境脅迫或衰老過程中， 細(xì)胞內(nèi)自由基代謝平衡被破壞

12、而有利于自由基的產(chǎn)生。 過剩自由基的毒害之一是引發(fā)或加劇膜脂過氧化作用，造成細(xì)胞膜系統(tǒng)的損傷，嚴(yán)重時(shí)會導(dǎo)致植物細(xì)胞死亡。自由基是具有未配對價(jià)電子的原子或原子團(tuán)。生物體內(nèi)產(chǎn)生的自由基主要有超氧自由基（一）、羥自由基%三氯乙酸：稱取三氯乙酸加水溶解定容至%硫代巴比妥酸（用三氯乙酸配制）：稱用少量氫氧化鈉溶解后加溶解定容至C C 貯存）（）、過氧自由基（）、烷氧自由基（）等。植物細(xì)胞膜有酶促和非酶促兩類過氧化物防御系統(tǒng)，超氧化物歧化酶（）、過氧化氫酶（）、過氧化物酶（）和還原型谷胱甘肽（）等是非酶促防御系統(tǒng)中的重要抗氧化劑。、等活性氧清除劑的含量水平和-、和等活性氧的含量水平可作為植物衰老的生理生化

13、指標(biāo)。超氧自由基（一）是生物細(xì)胞某些生理生化反應(yīng)常見的中間產(chǎn)物。自由基是本身帶有不成對價(jià)電子的分子、原子、原子團(tuán)或離子，化學(xué)性質(zhì)非?；顫?，是活性氧的一種。如果細(xì)胞中缺乏清除自由基的酶時(shí)，機(jī)體就會受到各種損傷。超氧化物歧化酶（），簡稱，能通過歧化反應(yīng)清除生物細(xì)胞中的超氧自由基（一），生成和。由過氧化氫酶（）催化生成和，從而減少自由基對有機(jī)體的毒害。一、原理超氧物歧化酶（，）普遍存在于動、植物體內(nèi)，是一種清除超氧陰離子自由基的酶。本實(shí)驗(yàn)依據(jù)超氧物歧化酶抑制氮藍(lán)四晚（）在光下的還原作用來確定酶活性大小。在有氧化物質(zhì)存在下，核黃素可被光還原，被還原的核黃素在有氧條件下極易再氧化而產(chǎn)生，可將氮藍(lán)四晚還原

14、為藍(lán)色的甲腺，后者在處有最大吸收。而可清除，從而抑制了甲腺的形成。于是光還原反應(yīng)后， 反應(yīng)液藍(lán)色愈深， 說明酶活性愈低， 反之酶活性愈高。 據(jù)此可以計(jì)算出酶活性大小。、試劑和抗壞血酸過氧化物酶）等是酶促防御系統(tǒng)的重要保護(hù)酶?？箟难幔ǖ{(lán)四口坐溶液：稱取頁腳內(nèi)容用磷酸緩沖液定容至（一）試劑（）磷酸鈉（）緩沖液：液（溶液）：準(zhǔn)確稱?。ǎ┯谛?，用少量蒸儲水溶解后，移入容量瓶中用蒸儲水定容至刻度，充分混勻。C C 冰箱中保存?zhèn)溆?。液（溶液）：?zhǔn)確稱取（）于小燒杯中，用少量蒸儲水溶解后，移入容量瓶中用蒸儲水定容至刻度，充分混勻。C C 冰箱中保存?zhèn)溆?。取上述液與液充分混勻后即為一 I I 的磷酸

15、鈉緩沖液。c c 冰箱中保存?zhèn)溆?。磷酸鈉緩沖液取的磷酸鈉緩沖液，移入容量瓶中用蒸儲水定容至刻度，充分混勻。C C 冰箱中保存?zhèn)溆?。（）蛋氨酸（）磷酸鈉緩沖液準(zhǔn)確稱取蛋氨酸（，）于小燒杯中，用少量的磷酸鈉緩沖液溶解后，移入容量瓶中并用的磷酸鈉緩沖液定容至刻度，充分混勻（現(xiàn)用現(xiàn)配）?！救苡谒?，C,C,不溶于有機(jī)溶劑】c c 保存可用水定容三、實(shí)驗(yàn)步驟酶液提取磷酸緩沖液在冰浴上研磨成漿，加緩沖液使終體積為,上清液即為粗提液。顯色反應(yīng)取試管支，支為測定管，另支為對照管，按下列加入一依次加入各溶液:名稱樣品管對照管對照管磷酸緩沖液()溶避光 c c 保存，先用現(xiàn)配溶液：稱取用水定容至【稱取用水定容至用水

16、定容存【稱取核黃素溶液：稱取核黃素用蒸儲水定容至避光保核黃素用少量溶解并用蒸儲水定容至天。取植物葉片于預(yù)冷的研缽中，加預(yù)冷的液（）溶液()一液（）去離子水（）核黃素()（酶液）（緩沖液）（緩沖液）混勻后將支對照管置暗處，其它各管于日光下反應(yīng)，然后立即遮光，以遮光管為對照調(diào)零，于下測定光密度。（要求各管受光情況一致，溫度高時(shí)間縮短，低時(shí)延長）?；钚詼y定與計(jì)算至反應(yīng)結(jié)束后，以不照光的對照管做空白，分別測定其它各管的吸光度。四、結(jié)果計(jì)算已知活性單位以抑制光化還原的為一個(gè)酶活性單位表示，按下式計(jì)算活性。總活性=比活力=總活性蛋白質(zhì)含量蛋白表示實(shí)驗(yàn)六、過氧化物酶活性測定一、試驗(yàn)?zāi)康模哼^氧化物酶是植物體內(nèi)

17、普遍存在的活性較高的一種酶，他與呼吸作用、光合作用以及生長素的氧化等都有密切關(guān)系。在植物生長發(fā)育過程中他的活性不斷發(fā)生變化，因此測量這種酶，可以反映某一時(shí)期植物體內(nèi)代謝的變化。通過本實(shí)驗(yàn)了解過氧化物酶的作用，掌握常用的測定過氧化物酶的方法愈創(chuàng)木酚法。二、實(shí)驗(yàn)原理：在過氧化物酶催化下，雙氧水將愈創(chuàng)木酚氧化成茶褐色產(chǎn)物，此產(chǎn)物在處有最大吸收峰，故可以通過測其吸光度的變化測定過氧化物酶的活性。三、實(shí)驗(yàn)試劑上式中：總活性以每克鮮重酶單位表示;比活力：單位以酶單位/:照光對照管的吸光度:樣品管的吸光度:樣品液總體積（）測定時(shí)樣品用量（的磷酸緩沖液:愈創(chuàng)木酚溶液：吸取毫升愈創(chuàng)木酚，加入少量酒精溶解，用水定

18、容,放于棕色試劑瓶中保存?zhèn)溆?、反?yīng)混合液取磷酸緩沖液（），過氧化氫，愈創(chuàng)木酚混合。四、操作步驟.酶液提?。呵逑锤蓛羧~片擦干，稱取葉片，剪成小片，放入研缽加入適量（除去酚類物質(zhì)）、石英沙、及的一的磷酸緩沖液 n n（）進(jìn)行研磨，磨碎后在加入溶液洗滌研缽一并裝入離心管內(nèi)，c c 下離心，收集上清液 c c 保存?zhèn)溆谩ｎ悇e對照管樣品管反應(yīng)液溫度C C緩沖液酶液測定波長混合用去離子水定容愈創(chuàng)木酚溶液：取定容雙氧水溶液：取用去離子水定容五、計(jì)算過氧化物酶活性（(X)(XXX式中：為反應(yīng)時(shí)間內(nèi)吸光度的變化，為葉片鮮重，為反應(yīng)時(shí)間為提取酶液總體積，為測定時(shí)取用的酶液體積。實(shí)驗(yàn)植物組織中可溶性蛋白質(zhì)含量的測定

19、I I 考馬斯亮藍(lán)染色法、原理考馬斯亮藍(lán)（，（，）法是利用蛋白質(zhì)染料結(jié)合的原理，定量地測定微量蛋白質(zhì)濃度的快速、靈敏的方法。考馬斯亮藍(lán)存在著兩種不同的顏色形式，紅色和藍(lán)色。它和蛋白質(zhì)通過范德瓦爾鍵結(jié)合，在一定蛋白質(zhì)濃度范圍內(nèi)，蛋白質(zhì)和染料結(jié)合符合比爾定律。此染料與蛋白質(zhì)結(jié)合后顏色由紅色形式轉(zhuǎn)變成藍(lán)色形式，最大光吸收由變成,通過測定處光吸收的增加量可知與其結(jié)合蛋白質(zhì)的量。蛋白質(zhì)和染料結(jié)合是一個(gè)很快的過程，約即可反應(yīng)完全，呈現(xiàn)最大光吸收，并可穩(wěn)定，之后，蛋白質(zhì)染料復(fù)合物發(fā)生聚合并沉淀出來。此法靈敏度高（比法靈敏倍），易于操作，干擾物質(zhì)少，是一種比較好的定量法。其缺點(diǎn)是在蛋白質(zhì)含量很高時(shí)線性偏低，且

20、不同來源蛋白質(zhì)與色素結(jié)合狀況有一定差異。二、實(shí)驗(yàn)材料、試劑與儀器設(shè)備（一）試劑標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)溶液（牛血清白蛋白）：加水溶解并定容至，吸取上述溶液，用蒸儲力考馬斯亮藍(lán)試劑:中，加入（常溫下可保存一個(gè)月。三、實(shí)驗(yàn)步驟標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制取支試管，按表加入試劑，搖勻，向各管中加入考馬斯亮藍(lán)試劑,豚取牛血清蛋白，k k 稀釋至即可。,溶于乙醇,貯于棕色瓶中。稱取考馬斯亮藍(lán)）的磷酸，再用蒸儲水定容到搖勻，并放置左右，以號試管為空白對照，在下比色測定吸光度。以蛋白質(zhì)含量為橫坐標(biāo)，以吸光度為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。試劑管號標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)（）蒸儲水量（）蛋白質(zhì)含量（）樣品測定（）樣品提取稱取鮮樣，用蒸儲水或緩沖液研磨成勻漿后，

21、離心，上清液備用。（）吸取樣品提取液（視蛋白質(zhì)含量適當(dāng)稀釋），放入試管中（每個(gè)樣品重復(fù)次），加入考馬斯亮藍(lán)試劑，搖勻，放置后在下比色，測定吸光度，并通過標(biāo)準(zhǔn)曲線查得蛋白質(zhì)含量。四、結(jié)果計(jì)算樣品中卻質(zhì)的含量=竺一（）式中：查標(biāo)準(zhǔn)曲線值，。提取液總體積。樣品鮮重。測定時(shí)加樣量。注意點(diǎn)：,考馬斯亮藍(lán)所配溶液不穩(wěn)定，所以每次實(shí)驗(yàn)都必須新配，且必須新做標(biāo)準(zhǔn)曲線；,考馬斯亮藍(lán)配制完畢，如果發(fā)現(xiàn)溶液中有絮狀沉淀，可以試用濾紙過濾后使用，如果實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)使用過濾后的考馬斯亮藍(lán)溶液在與樣品接觸后短時(shí)間內(nèi)便又發(fā)生絮凝，基本上推測該考馬斯亮藍(lán)過期（比較容易出現(xiàn)）。實(shí)驗(yàn)七、過氧化氫酶的活性測定高鎰酸鉀滴定法【原理】過氧

22、化氫酶（）屬于血紅蛋白酶，含有鐵，它能催化過氧化氫分解為水和分子氧，在此過程中起傳遞電子的作用，過氧化氫則既是氧化劑又是還原劑。據(jù)此，可根據(jù)的消耗量或的生成量測定該酶活力大小。在反應(yīng)系統(tǒng)中加入一定量（反應(yīng)過量）的溶液，經(jīng)酶促反應(yīng)后，用標(biāo)準(zhǔn)高鎰酸鉀溶液（在酸性條件下）滴定多余的即可求出消耗的的量【:吸取濃硫酸用去離子水定容至【磷酸緩沖液；【】高鎰酸鉀標(biāo)準(zhǔn)液：稱?。ǎ?，用新煮沸冷卻蒸儲水配制成，用草酸溶液標(biāo)定；:市售大約等于，取溶液,稀釋至，用標(biāo)準(zhǔn)溶液（在酸性條件下）進(jìn)行標(biāo)定；【實(shí)驗(yàn)步驟】、酶液提取取葉片在加緩沖液定容轉(zhuǎn)移至為過氧化氫酶的粗提液。滴定反應(yīng)管號對照管樣品管粗酶液磷酸緩沖液加入后轉(zhuǎn)入離

23、心管中,的磷酸緩沖液少量研磨成勻漿，離心，上清液即(AB)VT1.7FWVIt式中一對照滴定毫升數(shù)；一酶反應(yīng)后滴定毫升數(shù);一酶液總量（）；一反應(yīng)所用酶液量（）一樣品鮮重（）；過氧化氫酶的活性測定一一紫外吸收法、原理在波長下有強(qiáng)烈吸收，過氧化氫酶能分解過氧化氫，使反應(yīng)溶液吸光隨反應(yīng)時(shí)間而降低。根據(jù)測量吸光率的變化速度即可測出過氧化氫酶的活性。二、實(shí)驗(yàn)步驟、酶液提取取葉片加入的磷酸緩沖液少量研磨成勻漿，在加緩沖液定容轉(zhuǎn)移至后轉(zhuǎn)入離心管中，離心，上清液即為過氧化氫酶的粗提液。c c 下保存?zhèn)溆?。測定：取試管支，其中號為樣品測定管，號為空白管，按表順序加入試劑。所用體積（）【結(jié)果計(jì)算】：酶活性用每克鮮重樣品內(nèi)分解的毫克數(shù)表示:酶活的相當(dāng)于表紫外吸收法測定樣品液配置表管號樣品管對照管粗酶液（煮死酶液）磷酸蒸儲水C C 預(yù)熱后，逐管加入的，每加完一管立即記時(shí)，并迅速倒入石英比色杯中，下測定吸光度，每隔讀數(shù)次，共測，待支