1、WORD格式類別：技術標準部門：生產技術部1. 目的 ：凍干生產線壓塞、扎蓋密封系統完好性驗證編碼：頁碼：共 4 頁，第 1 頁專業資料整理WORD格式1.1. 通過微生物侵入試驗確認凍干生產線中壓塞、扎蓋密封系統是否完好。2. 編制依據 ：2.1 ."藥品生產質量管理標準"2021年版2.2 ."中國藥典"2021 年版二部3. 支持性文件：標題文件編號存放地點4.概述：4.1. 微生物侵入試驗是對容器/密封系統完好性的挑戰性試驗。在驗證試驗中，取西林瓶，裝入培養基，在正常生產線上壓塞、扎蓋。此后，將容器密封面侵入高濃度運動菌液中， 取出、培養并檢查是

2、否有微生物侵入，以確認容器密封系統完好性。此同時，需作陽性對照試驗，確認培養基的促菌生長能力。5.X圍：本確認方案適用于本公司凍干生產線壓塞、扎蓋密封系統完好性驗證。6.實驗材料大豆胰蛋白胨肉湯培養基 SCDM/2 、銅綠假單胞菌 (ATCC 9027) 、革蘭染色、含 0.5的過乙酸的 70異丙醇、凍干粉針生產線西林瓶、膠塞、鋁蓋、凍干粉針生產線壓塞機及軋蓋機、盛菌懸液的容器、固*林瓶支架等。7.時間安排年月日年月日專業資料整理WORD格式類別：技術標準部門：生產技術部凍干生產線壓塞、扎蓋密封系統完好性驗證編碼：頁碼：共 4 頁，第 2 頁專業資料整理WORD格式8.試驗步驟8.1.試驗用培

3、養基的制備。8.1.1.在生產線上取足夠量按相應清潔滅菌規程制備好的西林瓶、灌裝已滅菌的 SCDM/2(大豆胰蛋白胨肉湯 )培養基，在凍干生產線上抽真空、壓塞及扎蓋將西林瓶密封。8.1.2.將密封良好的西林瓶取出，每一西林瓶倒轉，使培養基與容器內外表充分接觸，并小心去除至少50 個試樣的鋁蓋，注意不要破壞其密封口將去鋁蓋時不慎損壞容器密封性的所有試樣剔除，在 3035下豎放培養 14 天。8.1.3.承受標準：在培養期內，各試樣不生長菌。8.2.確認培養基促菌生長能力-營養性試驗8.2.1.所有試樣培養14天均不長菌時，隨機取出20個帶蓋試樣，每個試樣內接種 0.1ml 的銅綠假單胞菌 ATC

4、C 9027，菌液濃度： 10100CFU/0.1ML8.2.2.在3035下培養7天，或培養至所有試樣都呈陽性結果。8.2.3.假設7天內，所有接種銅綠假單胞菌的試樣中，微生物生長良好，那么容器內培養基的促菌生長能力合格。8.2.4.可是使用革蘭染色和紫外燈下肉湯呈藍綠色熒光的性質，來鑒定并確認試樣容器內生長的菌為接入的銅綠假單胞菌。8.3.挑戰菌懸浮液的制備8.3.1.從銅綠假單胞菌ATCC 9027的新鮮斜面上取一整環培養物，分別接入含 6ml 無菌培養基的試管中，在3035下培養 1618 小時。8.3.2.將每管的培養物分別轉入含600ml 一樣培養基 SCDM/2 的容器內，于 3

5、035下培養 2224 小時。在培養完畢時，能明顯見容器內培養基出現渾濁。8.3.3.在挑戰試驗開場時，挑戰用菌懸液濃度活菌數必須到達：1*10 6CFU/ml。8.3.4 培養完畢后的菌懸液即可用來作壓塞、扎蓋密封系統系統完好性試驗。8.4.微生物侵入試驗本試驗需在生物平安柜內或其他不影響生產環境的地方進展。專業資料整理WORD格式類別：技術標準部門：生產技術部凍干生產線壓塞、扎蓋密封系統完好性驗證編碼：頁碼：共 4 頁，第 3 頁專業資料整理WORD格式8.4.1.將新鮮的銅綠假單胞菌ATCC 9027菌懸液倒入適宜的盆中，用金屬支架固定試樣容器，使試樣倒置在菌懸液中。8.4.2.將50個

6、經過凍干線的抽真空、壓塞、扎蓋的西林瓶的試樣倒置入菌懸液中，該組試樣記為 A 組。同時，將 25 個去除鋁蓋的試樣容器倒置入菌懸液中，該組試樣記為 B 組。試樣容器內的無菌培養基應充分接觸封口內外表，樣品的頸部及封口的外外表應完全浸泡在懸液中 。8.4.3. 實驗開場時取一份菌懸液，平板計數每毫升所含的活菌數，并通過革蘭染色方法確認微生物是銅綠假單胞菌。8.4.4.將A組及B組試樣容器在菌懸液中持續浸泡約4 小時。8.4.5.浸泡完畢時，利用平板計數法計數菌懸液的濃度。從菌懸液中取出試樣，擦干試樣容器外的剩余菌懸液，然后用含 0.5的過乙酸的 70異丙醇消毒容器外外表。8.4.6.取裝滿培養基

7、的有鋁蓋和去鋁蓋的樣品各兩個，作為陽性對照。陽性對照試樣不經過菌懸液的浸泡，其外表用含0.5的過乙酸的 70異丙醇消毒，后接入 10100CFU 銅綠假單胞菌 ATCC 9027。8.4.7.將消毒后所有的試樣放在塑料袋中，在 3035下培養 7 天。在操作過程中不要損壞無鋁蓋試樣膠塞的密封性。8.4.8.培養7天后，對每一試樣進展觀察檢查，有微生物生長記作“+，無微生物生長記作 “。將結果記錄在"凍干生產線壓塞、扎蓋密封系統完好性試驗結果記錄"。專業資料整理WORD格式類別：技術標準部門：生產技術部凍干生產線壓塞、扎蓋密封系統完好性驗證編碼：頁碼：共 4 頁，第 4 頁專

8、業資料整理WORD格式8.4.9.如果容器中長菌，利用革蘭氏染色法鑒定所長菌為銅綠假單胞菌；如果容器中不長菌，那么從浸過菌懸液的A 組取 10 個試樣， B 組取 5 個試樣，分別進展微生物營養性試驗。注 1：在實驗的過程中所有的營養試驗必須都合格，這樣試樣的挑戰試驗才有效果。注 2：挑戰試驗所用菌懸液需經過滅菌后丟棄。注 3：在培養期內，發現任何帶蓋試樣長菌時，那么試驗無效，須棄去全部試樣，重新從頭開場 。9.接收標準9.1.微生物營養性試驗9.1.1.假設7天內，所有接種銅綠假單胞菌的試樣品中，微生物生長良好，那么容器內培養基的促菌生長能力可判為合格。 使用革蘭氏染色鏡檢， 并置于紫外燈下

9、，培養基呈藍綠色熒光， 那么確定試樣品容器內生長的菌為所接入的銅綠假單胞菌，即為陽性。9.1.2.假設7天內，所接種的銅綠假單胞菌的試樣品中，微生物生長不良好或鑒別后受其他的污染，那么試驗失敗，需重新做營養性試驗。9.2.微生物侵入試驗9.2.1 挑戰試驗中A組和B組如果長菌，需記錄長菌的試樣數 ，在A組中如出現長菌試樣那么需經過以下要求進一步調查。9.2.2.仔細去除微生物生長的容器的蓋和塞，檢查容器封口是否有缺損，造成微生物入侵，將檢查到試樣容器口缺損的應當詳細的記錄。9.2.3. 如果任何挑戰試驗中長菌的容器不是由于容器封口明顯的物理性缺損所致，那么說明容器 /密封系統挑戰試驗失敗。專業資料整理WORD格式表 1：微生物營養性試驗檢測記錄專業資料整理WORD格式接種日期接種人專業資料整理WORD格式接入菌種培養天數專業資料整理WORD格式檢查觀察結果檢查人復核人專業資料整理WORD格式表 2：凍干生產線壓塞、扎蓋密封系統完好性試驗結果記錄加塞扎蓋時間營養性試驗結論試樣浸泡時間試樣培養時間浸泡前菌液濃度浸泡后菌液濃度培養完畢后試樣容器內微生物的