1、分子生物學(xué)實驗室常用試劑配制方法（轉(zhuǎn)）一. 常用貯液與溶液 1mol/L亞精胺（Spermidine）: 溶解2.55g亞精胺于足量的水中，使終體積為10ml。分裝成小份貯存于-20。 1mol/L精胺（Spermine）：溶解3.48g精胺于足量的水中，使終體積為10ml。分裝成小份貯存于-20。 10mol/L乙酸胺（ammonium acetate）：將77.1g乙酸胺溶解于水中，加水定容至1L后，用0.22um孔徑的濾膜過濾除菌。 10mg/ml牛血清蛋白(BSA）：加100mg的牛血清蛋白（組分V或分子生物學(xué)試劑級，無DNA酶）于9.5ml水中（為減少變性， 須將蛋白加入水中，而不是

2、將水加入蛋白），蓋好蓋后，輕輕搖動，直至牛血清蛋白完全溶解為止。不要渦旋混合。加水定容到10ml，然后分裝成小份貯存于-20。 1mol/L二硫蘇糖醇（DTT）：在二硫蘇糖醇5g的原裝瓶中加32.4ml水，分成小份貯存于-20。或轉(zhuǎn)移100mg的二硫蘇糖醇 至微量離心管，加0.65ml的水配制成1mol/L二硫蘇糖醇溶液。 8mol/L乙酸鉀（potassium acetate）：溶解78.5g乙酸鉀于足量的水中，加水定容到100ml。 1mol/L氯化鉀（KCl）：溶解7.46g氯化鉀于足量的水中，加水定容到100ml。 3mol/L乙酸鈉（sodium acetate）：溶解40.8g的三

3、水乙酸鈉于約90ml水中，用冰乙酸調(diào)溶液的pH至5.2，再加水定容到100ml。 2H2O和20g的NaOH，并溶于水中，定容至1L。 1mol/L HEPES：將23.8gHEPES溶于約90ml的水中，用NaOH調(diào)pH（6.8-8.2），然后用水定容至100ml。 1mol/L HCl：加8.6ml的濃鹽酸至91.4ml的水中。 25mg/ml IPGT：溶解250mg的IPGT（異丙基硫代-D-半乳糖苷）于10ml水中，分成小份貯存于-20。 1mol/LMgCl2:溶解20.3g MgCl26H2O于足量的水中，定容到100ml。 100mmol/L PMSF：溶解174mg的PMSF

4、（苯甲基磺酰氟）于足量的異丙醇中，定容到10ml。分成小份并用鋁箔將裝液管包裹 或貯存于-20。 20mg/ml蛋白酶K（proteinase K）：將200mg的蛋白酶L加入到9.5ml水中，輕輕搖動，直至蛋白酶K完全溶解。不要渦旋混合。加水定容到10ml，然后分裝成小份貯存于-20。 10mg/mlRnase（無DNase）（DNasefree RNase）：溶解10mg的胰蛋白RNA酶于1ml的10mmol/L的乙酸鈉水溶液中（pH 5.0）。溶解后于水浴中煮沸15min，使DNA酶失活。用1mol/L的TrisHCl調(diào)pH至7.5，于-20貯存。（配制過程中要戴手套） 5mol/L氯化

5、鈉（NaCl）：溶解29.2g氯化鈉于足量的水中，定容至100ml。 10N氫氧化鈉（NaOH）：溶解400g氫氧化鈉顆粒于約0.9L水的燒杯中（磁力攪拌器攪拌），氫氧化鈉完全溶解后用水定容至1L。 10SDS（十二烷基硫酸鈉）：稱取100gSDS慢慢轉(zhuǎn)移到約含0.9L的水的燒杯中，用磁力攪拌器攪拌直至完全溶解。用水定容至1L。 2mol/L山梨（糖）醇（Sorbitol）：溶解36.4g山梨（糖）醇于足量水中使終體積為100ml。 100三氯乙酸（TCA）:在裝有500gTCA的試劑瓶中加入100ml水，用磁力攪拌器攪拌直至完全溶解。（稀釋液應(yīng)在臨用前配制） 2.5 Xgal（5-溴-4-氯

6、-3-吲哚-半乳糖苷）：溶解25mg的Xgal于1ml的二甲基甲酰胺（DMF）,用鋁箔包裹裝液管，貯存于-20。 100×Denhardt試劑（Denhardts regent） 成分及終濃度 配制100ml溶液各成分的用量 2%聚蔗糖（Ficoll，400型） 2%聚乙烯吡咯烷酮（PVP-40） 2%BSA（組分V） 水 2g 2g 2g 加水至總體積為100ml ,依照上表稱取各組分，溶于水中定容。過濾除菌及雜質(zhì)，分裝成小份于-20貯存。 10×標(biāo)準(zhǔn)DNA連接酶緩沖液（standard DNA ligase buffer）（粘端、平端連接） 成分及終濃度 配制10ml溶

7、液各成分的用量 0.5mol/L Tris-HCl:5ml1mol/L 貯液 ,100mmol/L MgCl2:1ml 1mol/L 貯液,100mmol/L DTT:1ml 1mol/L 貯液,2mmol/L ATP: 200ul 100 mmol/L 貯液,5mmol/L 鹽酸亞精胺（可選）:50ul 1 mmol/L 貯液,0.5mg/ml BSA（組分V）（可選）:0.5ml 10 mg/mL 貯液 ,水: 2.25ml 將配制好的緩沖液分裝成小份，貯存于-20 。 100 mmol/L dNTP 溶液（dNTP solutions） 可以購買到100mmol/L純dNTPs貯液，-8

8、0可貯存至少6個月。 10mmol/L dNTP混合液 成分及終濃度 配制20ul溶液各成分的用量 10mmol/L dATP 10mmol/L dCTP 10mmol/L dGTP 10mmol/L dTTP 水 2ul 100 mmol/L dATP 貯液 2ul 100 mmol/L dCTP 貯液 2ul 100 mmol/L dGTP 貯液 2ul 100 mmol/L dTTP 貯液 12ul 20PEG 8000/2.5M NaCl 成分及終濃度 配制10ml溶液各成分的用量 質(zhì)量濃度為20聚乙二醇 水 20g 50ml 5 mol/L 氯化鈉 或 14.6g 固體氯化鈉 補(bǔ)足1

9、00ml 加聚乙二醇于含有氯化鈉的燒杯中，加水至終體積100ml，用磁力攪拌器攪拌溶解。 20×SSC 成分及終濃度 配制1L溶液各成分的用量 300mmol/L 檸檬酸三鈉（二水） 3mol/L 氯化鈉 水 88.2g 175.3g 補(bǔ)足1L 溶解檸檬酸三鈉（二水）和氯化鈉于約0.9L水中，加幾滴10N NaOH溶液調(diào)pH為7.0，用水補(bǔ)足體積至1L。 DEPC（焦碳酸二乙酯）處理水 加100ul DEPC 于 100ml 水中，使DEPC的體積分?jǐn)?shù)為0.1。在37溫浴至少12h，然后在15 psi 條件下高壓滅菌20min，以使殘余的DEPC失活。DEPC會與胺起反應(yīng)，不可用DE

10、PC處理Tris緩沖液。 甲酰胺（deionized formamide） 直接購買或加Dowex XG8 混合樹脂于裝有甲酰胺的玻璃燒杯中，用磁力攪拌器輕輕攪拌1h，可去除甲酰胺中的離子。經(jīng)Whatman 1號濾紙過濾除去樹脂后分成小份，充氮氣于-80貯存（防止氧化）。 磷酸緩沖液（phosphate buffer） 按照下表所給定的體積，混合1 mol/L 的磷酸二氫鈉（單堿）和1mol/L 磷酸氫二鈉（雙堿）貯液，獲得所需pH的磷酸緩沖液。配制1 mol/L 的磷酸二氫鈉（NaH2PO4H2O）貯液：溶解138g于足量水中，使終體積為1L;1mol/L 磷酸氫二鈉（Na2HPO4）貯液:

11、溶解142g于足量水中使終體積為1L。 1mol/L 磷酸二氫鈉（ml） 1mol/L 磷酸氫二鈉（ml） 最終pH值 TE（用于懸浮和貯存DNA） 成分及終濃度 配制100ml溶液各成分的用量 10mmol/L TrisHCl 1mmol/L EDTA 水 1ml 1mol/L Tris-HCl（pH7.4-8.0，25） 200ul 0.5 mol/L EDTA（pH 8.0） 98.8ml Tris緩沖液（Tris-HCl buffer） 將121g的Tris堿溶解于約水中，再根據(jù)所要求的pH（25下）加一定量的濃鹽酸（11.6N），用水調(diào)整終體積至1L。 濃鹽酸的體積（ml） pH 相

12、關(guān)回復(fù)：作者: happyboy2100 發(fā)布日期: 2006-08-22二.電泳緩沖液、染料和凝膠加樣液 電泳緩沖液 50×Tris-乙酸（TAE）緩沖液 成分及終濃度 配制1L溶液各成分的用量 2mol/L Tris堿 1mol/L 乙酸 100 mmol/L EDTA 水 242g 57.1 ml的冰乙酸（17.4 mol/L） 200ml的0.5 mol/L EDTA（pH 8.0） 補(bǔ)足1L 5×Tris-硼酸（TBE）緩沖液 成分及終濃度 配制1L溶液各成分的用量 445 mmol/L Tris堿 445 mmol/L 硼酸鹽 10 mmol/L EDTA 水

13、54g 27.5g 硼酸 20 ml的0.5 mol/L EDTA（pH 8.0） 補(bǔ)足1L 染料 1溴酚藍(lán)（bromophenol blue） 加1g水溶性鈉型溴酚藍(lán)于100ml水中，攪拌或渦旋混合直到完全溶解。 1二甲苯青FF（xylene cyanole FF） 溶解1g二甲苯青FF于足量水中，定容到100ml。 10mg/ml的溴化乙錠（ethidium bromide） 小心稱取1g溴化乙錠，轉(zhuǎn)移到廣口瓶中，加100ml水，用磁力攪拌器攪拌直到完全溶解。用鋁箔包裹裝液管，于4貯存。 凝膠上樣液（gel loading solutions） 6×堿性凝膠上樣液（室溫貯存） 成

14、分及終濃度 配制10ml溶液各成分用量 0.3 N 氫氧化鈉 6 mmol/L EDTA 18聚蔗糖（400型） 0.15溴甲酚綠 0.25二甲苯青FF 水 300ul 10N 氫氧化鈉 120ul 0.5mol/L EDTA（pH8.0） 1.8g 15mg 25mg 補(bǔ)足到10ml 6×聚蔗糖凝膠上樣液（室溫貯存） 成分及終濃度 配制10ml溶液各成分用量 0.15溴酚藍(lán) 0.15二甲苯青FF 5 mmol/L EDTA 15聚蔗糖（400型） 水 1.5ml 1溴酚藍(lán) 1.5ml 1二甲苯青FF 100ul 0.5mol/L EDTA（pH8.0） 1.5g 補(bǔ)足到10ml 6

15、×溴酚藍(lán)/二甲苯青/聚蔗糖凝膠上樣液（室溫貯存） 成分及終濃度 配制10ml溶液各成分用量 0.25溴酚藍(lán) 0.25二甲苯青FF 15聚蔗糖（400型） 水 2.5ml 1溴酚藍(lán) 2.5ml 1二甲苯青FF 1.5g 補(bǔ)足到10ml 6×甘油凝膠上樣液（4貯存） 成分及終濃度 配制10ml溶液各成分用量 0.15溴酚藍(lán) 0.15二甲苯青FF 5 mmol/L EDTA 50甘油 水 1.5ml 1溴酚藍(lán) 1.5ml 1二甲苯青FF 100ul 0.5mol/L EDTA（pH8.0） 3ml 3.9ml 6×蔗糖凝膠上樣液（室溫貯存） 成分及終濃度 配制10ml溶

16、液各成分用量 0.15溴酚藍(lán) 0.15二甲苯青FF 5 mmol/L EDTA 40聚蔗糖 水 1.5ml 1溴酚藍(lán) 1.5ml 1二甲苯青FF 100ul 0.5mol/L EDTA（pH8.0） 4g 補(bǔ)足到10ml 10×十二烷基硫酸鈉/甘油凝膠上樣液（室溫貯存） 成分及終濃度 配制10ml溶液各成分用量 0.2溴酚藍(lán) 0.2二甲苯青FF 200 mmol/L EDTA 0.1SDS 50甘油 水 20mg 20mg 4ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0) 100ul 10 SDS 5ml 補(bǔ)足到10ml作者: happyboy2100 發(fā)布日期: 2006-08-2

17、2三.常用培養(yǎng)基 LB培養(yǎng)基 將下列組分溶解在0.9L水中： 蛋白胨 10g 酵母提取物 5g 氯化鈉 10g 如果需要用1N NaOH（1ml）調(diào)整pH至7.0，再補(bǔ)足水至1L。注：瓊脂平板需添加瓊脂粉12g/L,上層瓊脂平板添加瓊脂粉7g/L。 SOB培養(yǎng)基 將下列組分溶解在0.9L水中： 蛋白胨 20g 酵母提取物 5g 氯化鈉 0.5g 1 mol/L 氯化鉀 2.5ml 用水補(bǔ)足體積到1L。分成100ml的小份，高壓滅菌。培養(yǎng)基冷卻到室溫后，再在每100ml的小份中加1ml滅過菌的1mol/L氯化鎂。 SOC培養(yǎng)基 成分、方法同SOB培養(yǎng)基的配制，只是在培養(yǎng)基冷卻到室溫后，除了在每1

18、00ml的小份中加1ml滅過菌的1mol/L氯化鎂外，再加2ml滅菌的1mol/L葡萄糖（18g葡萄糖溶于足夠水中，再用水補(bǔ)足到100ml，用0.22um的濾膜過濾除菌）。 TB培養(yǎng)基 將下列組分溶解在0.9L水中： 蛋白胨 12g 酵母提取物 24g 甘油 4ml 各組分溶解后高壓滅菌。冷卻到60，再加100ml滅菌的170mmol/L KH2PO4/0.72 mol/L K2HPO4的溶液（2.31g的KH2PO4和12.54gK2HPO4溶在足量的水中，使終體積為100ml。高壓滅菌或用0.22um的濾膜過濾除菌）。 2×YT培養(yǎng)基 將下列組分溶解在0.9L水中： 蛋白胨 16

19、g 酵母提取物 10g 氯化鈉 4ml 如果需要用1N NaOH（1ml）調(diào)整pH至7.0，再補(bǔ)足水至1L。注：瓊脂平板需添加瓊脂粉12g/L,上層瓊脂平板添加瓊脂粉7g/L。 YPD培養(yǎng)基 將下列組分溶解在0.9L水中： 蛋白胨 20g 酵母提取物 10g 葡萄糖 20g 用水補(bǔ)足體積為1L后，高壓滅菌。建議在高壓滅菌之前，對色氨酸營養(yǎng)缺陷型每升培養(yǎng)基添加1.6g色氨酸，因為YPD培養(yǎng)基是色氨酸限制型培養(yǎng)基。為了配制平板，需要在高壓滅菌前加入20g瓊脂粉。 四.常用抗生素 氨芐青霉素（ampicillin）（100mg/ml） 溶解1g氨芐青霉素鈉鹽于足量的水中，最后定容至10ml。分裝成小

20、份于-20貯存。常以25ug/ml50ug/ml的終濃度添加于生長培養(yǎng)基。 羧芐青霉素（carbenicillin）（50mg/ml） 溶解0.5g羧芐青霉素二鈉鹽于足量的水中，最后定容至10ml。分裝成小份于-20貯存。常以25ug/ml50ug/ml的終濃度添加于生長培養(yǎng)基。 甲氧西林（methicillin）（100mg/ml） 溶解1g甲氧西林鈉于足量的水中，最后定容至10ml。分裝成小份于-20貯存。常以37.5ug/ml終濃度與100ug/ml氨芐青霉素一起添加于生長培養(yǎng)基。 卡那霉素（kanamycin）（10mg/ml） 溶解100mg卡那霉素于足量的水中，最后定容至10ml。

21、分裝成小份于-20貯存。常以10ug/ml50ug/ml的終濃度添加于生長培養(yǎng)基。 氯霉素（chloramphenicol）（25mg/ml） 溶解250mg氯霉素足量的無水乙醇中，最后定容至10ml。分裝成小份于-20貯存。常以12.5ug/ml25ug/ml的終濃度添加于生長培養(yǎng)基。 鏈霉素（streptomycin）（50mg/ml） 溶解0.5g鏈霉素硫酸鹽于足量的無水乙醇中，最后定容至10ml。分裝成小份于-20貯存。常以10ug/ml50ug/ml的終濃度添加于生長培養(yǎng)基。 萘啶酮酸（nalidixic acid）（5mg/ml） 溶解50mg萘啶酮酸鈉鹽于足量的水中，最后定容至1

22、0ml。分裝成小份于-20貯存。常以15ug/ml的終濃度添加于生長培養(yǎng)基。 四環(huán)素（tetracyyline）（10mg/ml） 溶解100mg四環(huán)素鹽酸鹽于足量的水中，或者將無堿的四環(huán)素溶于無水乙醇，定容至10ml。分裝成小份用鋁箔包裹裝液管以免溶液見光，于-20貯存。常以10ug/ml50ug/ml的終濃度添加于生長培養(yǎng)基。幾種溶液的配制方法1、PBS: 取ZLI-9061 PBS溶于1000ml的蒸餾水中，混勻，測pH值應(yīng)在7.27.4之間，若偏離此范圍，請用0.1N的HCL或NaOH調(diào)整。2、TBS： 2.1 Tris緩沖液配方：（0.5 M pH7.6） 1N HCL 約420ml

23、 雙蒸水 加至1000ml Tris緩沖液配制方法：先以少量雙蒸水（300500ml）溶解Tris，加入HCl后，用HCl（1N）或NaOH（1N）將pH調(diào)至7.6， 最后雙蒸水加至1000ml。此液為儲備液，4冰箱中保存。 2.2 TBS配方： Tris-HCI緩沖液（0.5M pH7.6） 100ml NaCI 8.59g (0.15mol/L) 雙蒸水 加至1000ml TBS配制方法：先以少量雙蒸水溶解NaCl，再加入Tris-HCl緩沖液，最后加雙蒸水至1000ml，充分搖勻。 3、檸檬酸鹽緩沖液（Citrate buffer）： 3.1 儲存液： A. 0.1M檸檬酸溶液：稱取21.01g檸檬酸（C6H8O7H20）溶于1000ml蒸餾水中。 B. 0.1M檸檬酸鈉溶液：稱取29.41g檸檬酸鈉（C6H5Na3O72H20）溶于1000ml蒸餾水中。 3.2 工作液： 取9ml A液和41ml B液加入450ml蒸餾水中，溶液pH值應(yīng)為 4、胰酶（Trypsin）： 4.1 ZLI-9011胰蛋白酶消化液： 常用濃度為0.125%，即使用前將一滴試劑1胰酶溶液和三滴試劑2胰酶稀釋液均勻混合（1:3稀釋），則可直接滴加使用。胰酶的最終濃