1、實驗一、總糖和復原糖的測定 3,5-二硝基水楊酸法一、實驗目的1、掌握復原糖和總糖測定的根本原理；、掌握復原糖和總糖測定的根本原理；2、學慣用、學慣用3,5-二硝基水楊酸法測定復原二硝基水楊酸法測定復原糖的方法。糖的方法。 二、實驗原理二、實驗原理 復原糖是指含有自在醛基或者酮基的糖類，復原糖是指含有自在醛基或者酮基的糖類，單糖都是復原糖，雙糖和多糖不一定是復單糖都是復原糖，雙糖和多糖不一定是復原糖；利用糖的溶解度不同，可將植物樣原糖；利用糖的溶解度不同，可將植物樣品中的單糖、雙糖和多糖分別提取出來；品中的單糖、雙糖和多糖分別提取出來；對沒有復原性的雙糖和多糖，可用酸水解對沒有復原性的雙糖和多

2、糖，可用酸水解法使其降解成有復原性的單糖進展測定，法使其降解成有復原性的單糖進展測定，再分別求出樣品中復原糖和總糖的含量再分別求出樣品中復原糖和總糖的含量復原糖以葡萄糖含量計。復原糖以葡萄糖含量計。 復原糖在堿性條件下加熱被氧化成糖酸及復原糖在堿性條件下加熱被氧化成糖酸及其它產物，其它產物，3,5-二硝基水楊酸那么被復原二硝基水楊酸那么被復原為棕紅色的為棕紅色的3-氨基氨基-5-硝基水楊酸。硝基水楊酸。NaOH黃色黃色棕紅色棕紅色加熱加熱 在過量的在過量的NaOH堿性溶液中，堿性溶液中， 3-氨基氨基-5-硝硝基水楊酸呈橘紅色，在基水楊酸呈橘紅色，在540nm處有最大吸處有最大吸收，在一定的濃

3、度范圍內，復原糖的量與收，在一定的濃度范圍內，復原糖的量與光吸收值成線性關系。利用比色法，在光吸收值成線性關系。利用比色法，在540nm 波長下測定光密度值，查對規范曲波長下測定光密度值，查對規范曲線并計算，便可求出樣品中復原糖和總糖線并計算，便可求出樣品中復原糖和總糖的含量。的含量。三、實驗器材1、資料：山芋粉2、儀器：電子分析天平、水浴鍋、V-1100可見分光光度計、移液器3、其他：試管、容量瓶、三角燒瓶、量筒、吸管移液管、洗耳球、玻棒、洗瓶、漏斗、離心管、六凹反響盤、pH試紙114四、實驗試劑1、規范葡萄糖溶液1.0mg/ml2、DNS試劑3、6mol/L HCl4、6mol/L NaO

4、H5、I2-KI溶液五、操作1、樣品中復原糖的提取準確稱取0.5g山芋粉置于100ml三角燒瓶中加3ml蒸餾水，調成糊狀再加30ml蒸餾水50水浴，30min (不時攪拌)轉移至50ml離心管中，4000rpm，5min上清液1沉淀加20ml蒸餾水，洗滌沉淀，4000rpm，5min上清液2沉淀(棄)置于容量瓶中，蒸餾水定容至100ml,混勻，取1ml即可進展復原糖的測定。2、樣品中總糖的水解、提取準確稱取0.2g山芋粉置于100ml三角燒瓶中加3ml蒸餾水，調成糊狀再加12ml蒸餾水，5ml 6mol/L HCl沸水浴，30min (不時攪拌)取取12滴于六凹滴于六凹反響盤中，加反響盤中，加

5、1滴滴I2-KI溶液，假設溶液，假設完全不顯藍色，完全不顯藍色，即可進展下面的即可進展下面的操作。操作。冷卻至室溫用6mol/L NaOH調pH7.0 pH試紙蒸餾水定容至100ml,混勻濾紙過濾，取10ml濾液用蒸餾水定容至100ml，成稀釋1000倍的總糖水解液，混勻,取1ml總糖水解液，測定其復原糖的含量3、制造葡萄糖規范曲線及復原糖、總糖含量的測定。 取8支干凈的試管，分別用記號筆標上07號，按照下表進展操作。其中05管，用于規范曲線的制造,以吸光度為縱坐標，各規范液濃度mg/ml為橫坐標作圖得規范曲線用Excel表制造。六、計算 C1V1(復原糖)=100% m1 C2V2(總糖)=0.9100% m2附：相關儀器運用附：相關儀器運用1、移液管的運用、移液管的運用2、移液器的運用、移液器的運用3、離心機的運用、離心機的運用 留意配平，對稱放留意配平，對稱放4、V-1100可見分光光度計的運用可見分光光度計的運用 比色皿比色皿V-1100可見分光光度計可見分光光度計開機預熱30min測吸光度 選擇波長540nm