1、LOGO測定奶粉中三聚氰胺的含量測定奶粉中三聚氰胺的含量高效液相色譜法高效液相色譜法生物工程生物工程1001班班目錄目錄三鹿毒奶粉事件1液相色譜法簡介2樣品檢測方案3結論與反思4毒奶粉事件回顧毒奶粉事件回顧v2008年年7月，舉國上下正在為剛剛過去的月，舉國上下正在為剛剛過去的汶川大地震默哀紀念的時候，正在為即將到汶川大地震默哀紀念的時候，正在為即將到來的北京奧運會而歡慶的時候，一則新聞報來的北京奧運會而歡慶的時候，一則新聞報道了大量嬰兒因喝了某品牌奶粉而患上了腎道了大量嬰兒因喝了某品牌奶粉而患上了腎結石。隨后三鹿集團被推上了風口浪尖，一結石。隨后三鹿集團被推上了風口浪尖，一時間包括蒙牛、伊利

2、在內的全國各大品牌奶時間包括蒙牛、伊利在內的全國各大品牌奶粉均被查出粉均被查出“毒奶粉毒奶粉”，引起了全國恐慌，引起了全國恐慌，三鹿集團因此也破產倒閉。而這一毒奶粉事三鹿集團因此也破產倒閉。而這一毒奶粉事件的罪魁禍首件的罪魁禍首三聚氰胺也隨之為大眾知三聚氰胺也隨之為大眾知曉。曉。高效液相色譜法原理高效液相色譜法原理 高效液相色譜法是在經典色譜法的基礎上，引用了氣相色譜的理論，高效液相色譜法是在經典色譜法的基礎上，引用了氣相色譜的理論，在技術上，流動相改為高壓輸送（最高輸送壓力可達在技術上，流動相改為高壓輸送（最高輸送壓力可達4.9107Pa）;色譜色譜柱是以特殊的方法用小粒徑的填料填充而成，從

3、而使柱效大大高于經典柱是以特殊的方法用小粒徑的填料填充而成，從而使柱效大大高于經典液相色譜（每米塔板數可達幾萬或幾十萬）；同時柱后連有高靈敏度的液相色譜（每米塔板數可達幾萬或幾十萬）；同時柱后連有高靈敏度的檢測器，可對流出物進行連續檢測。檢測器，可對流出物進行連續檢測。 高效液相色譜法，只要求試樣能制成溶液，而不需要氣化，因此不受高效液相色譜法，只要求試樣能制成溶液，而不需要氣化，因此不受試樣揮發性的限制。對于高沸點、熱穩定性差、相對分子量的有機物試樣揮發性的限制。對于高沸點、熱穩定性差、相對分子量的有機物，原則上都可應用高效液相色譜法來進行分離、分析。原則上都可應用高效液相色譜法來進行分離、

4、分析。 三聚氰胺是一種低毒的化工原料，動物實驗結果表明，其在動物體內三聚氰胺是一種低毒的化工原料，動物實驗結果表明，其在動物體內代謝很快且不會存留，主要影響泌尿系統。乳制品中添加三聚氰胺會使代謝很快且不會存留，主要影響泌尿系統。乳制品中添加三聚氰胺會使得食品的蛋白質測試含量偏高，從而使劣質食品通過食品檢驗機構的測得食品的蛋白質測試含量偏高，從而使劣質食品通過食品檢驗機構的測試，就送檢的奶粉樣品，采用高效液相色譜法（試，就送檢的奶粉樣品，采用高效液相色譜法（HPLC）測定其中的三）測定其中的三聚氰胺的含量。聚氰胺的含量。 因此，在該對奶粉樣品的檢測實驗中，由于樣品不耐高溫，宜采用此因此，在該對奶

5、粉樣品的檢測實驗中，由于樣品不耐高溫，宜采用此法分析。法分析。高效液相色譜法的特點高效液相色譜法的特點 高壓：流動相為液體，流經色譜柱時，受到的阻力較大，高壓：流動相為液體，流經色譜柱時，受到的阻力較大，為了能迅速通過色譜柱，必須對載液加高壓。為了能迅速通過色譜柱，必須對載液加高壓。 高效：分離效能高?？蛇x擇固定相和流動相以達到最佳高效：分離效能高?？蛇x擇固定相和流動相以達到最佳分離效果，比工業精餾塔和氣相色譜的分離效能高出許多倍。分離效果，比工業精餾塔和氣相色譜的分離效能高出許多倍。 高靈敏度：紫外檢測器可達高靈敏度：紫外檢測器可達0.01ng，進樣量在，進樣量在L數量數量級。級。 應用范圍

6、廣：百分之七十以上的有機化合物可用高效液應用范圍廣：百分之七十以上的有機化合物可用高效液相色譜分析，特別是高沸點、大分子、強極性、熱穩定性差相色譜分析，特別是高沸點、大分子、強極性、熱穩定性差化合物的分離分析，顯示出優勢?；衔锏姆蛛x分析，顯示出優勢。 分析速度快、載液流速快：較經典液體色譜法速度快得分析速度快、載液流速快：較經典液體色譜法速度快得多，通常分析一個樣品在多，通常分析一個樣品在1530分鐘，有些樣品甚至在分鐘，有些樣品甚至在5分分鐘內即可完成，一般小于鐘內即可完成，一般小于1小時。小時。樣品檢測方案樣品檢測方案高效液高效液相色譜相色譜法檢測法檢測樣品的來樣品的來源和預處源和預處理

7、方法理方法確定儀器確定儀器配置配置確定初始確定初始操作條件操作條件定性鑒定定性鑒定與與定量分析定量分析實驗結果實驗結果及判定及判定樣品的來源和預處理方法v高效液相色譜法要求試樣能制成溶液。這樣，我們在接到一個未知樣品時，就必須了解的來源，從而估計樣品可能含有的組分，以及樣品的溶解度范圍。如果樣品體系簡單，試樣組分可溶解則可直接分析。如果樣品中有不能用HPLC直接分析的組分，或樣品濃度太低，就必須進行必要的預處理，如采用吸附、解析、萃取、濃縮、稀釋、提純、衍生化等方法處理樣品。v原理：以三聚氰胺為原料制作的成型品經4%乙酸浸泡，浸泡液中三聚氰胺用高效液相色譜分離、測定，以保留時間定性、峰高或峰面

8、積定量。確定儀器配置1、主要儀器與設備v a高效液相色譜儀：配有紫外檢測器或二極管陣列檢測器v b分析天平：感量為0.0001g和0.01gv c離心機：轉速不低于4000r/minv d超聲波水浴v e固相萃取裝置v f氨氣吹干儀v 渦旋混合器2、材料與方法：以三聚氰胺為原料制作的成型品經4%乙酸浸泡，浸泡液中三聚氰胺用高效液相色譜分離、測定，以保留時間定性、峰高或峰面積定量。確定初始操作條件1 1、色譜條件、色譜條件 色譜柱：色譜柱：C18 4.6150mm，5m流動相：己烷磺酸鈉（流動相：己烷磺酸鈉（5mmol/L）-磷酸（磷酸（0.1%）溶液）溶液+甲醇（甲醇（90+10）；）； 流速

9、流速1.0mL/min。柱溫：柱溫：35紫外檢測器：波長為紫外檢測器：波長為235nm。進樣體積：進樣體積：10L2、測定、測定將儀器調至最佳狀態后，分別將濃度為將儀器調至最佳狀態后，分別將濃度為0.05g/mL，0.1g/mL，0.5g/mL，1g/mL，2g/mL的標準工作液和中樣品處理后的浸泡液的標準工作液和中樣品處理后的浸泡液注入色譜儀中，以保留時間定性，以色譜峰面積或峰高定量。注入色譜儀中，以保留時間定性，以色譜峰面積或峰高定量。 3、精密度、精密度在重復性條件下獲得的兩次獨立測定結果的絕對差值不得超過算術平均值在重復性條件下獲得的兩次獨立測定結果的絕對差值不得超過算術平均值的的15

10、%。1000100SVcX1000100SVcX三聚氰胺標準溶液的液相色譜圖三聚氰胺標準溶液的液相色譜圖min0246810mAU00.20.40.60.81.01.21.41.6三聚氰胺 7.401定性鑒定與定量分析定性鑒定與定量分析v 待測樣液中三聚氰胺的響應值應在標準曲線線性范圍內，超出線性范圍則應稀釋后再進樣分析。兩次進樣圖譜兩次進樣圖譜第一次進樣第一次進樣第二次進樣第二次進樣實驗結果及判定實驗結果及判定 按照上述步驟進行檢測，得出實驗結論，如：按照上述步驟進行檢測，得出實驗結論，如：v在符合要求的條件及規范的操作步驟的前提下，經檢驗該樣品的三聚氰胺含量為6.90mg/khv根據GB/T 22388-2008規定，該樣品三聚氰胺含量6.90mg/kg，大于規定的2mg/kg,產品不及格。結論與反思v 檢測是手段，乳制品的質量安全才是最終的目的。一旦發生食品質量安全事故，首先受害的是消費者。在受到傷害的情況下，消費者對食品質量安全事故做出的第一反應就是拒絕繼續消費問題產品。于是就造成了一系列的食品安全“傷害效應”，表現為對消費者的傷害效應，對加工企業和奶站生產的傷害效應和對廣大奶農產生了傷害效應。v 在總體