高中生物選擇性必修三第三章·第二節第二節基因工程的基本操作程序GeneticallyengineeredBasicoperatingprocedures核心素養結合實例，采用文字和圖示方式說明基因工程的基本操作程序。生命觀念01科學探究02社會責任03運用結構與功能觀等觀念理解PCR技術的過程、原理、條件等。利用基因工程技術和方法獲得人類生產或生活所需產品。課標要求明確基因工程操作的涉及的技術以及方法。010203闡明基因工程的基本操作程序及其主要步驟。聯系基因工程與實際生產生活的關系及應用。基因表達載體的構建獲取了足夠量的Bt基因后，下一步就是要讓基因在受體細胞中穩定存在，并且遺傳給下一代。同時，使Bt基因能夠表達和發揮作用，這就需要構建基因表達載體。這一步是培育轉基因抗蟲棉的核心工作。目的基因表達載體的構建第二部分01020304簡述構建基因表達載體的意義。說出基因表達載體的結構組成及各個元件的作用。辨析啟動子和起始密碼子、終止子和終止密碼子。闡明基因表達載體的構建過程。基因表達載體的構建基因表達載體是載體的一種，除目的基因、標記基因外，它還必須有啟動子、終止子等。目的基因插入位點(多個酶切位點）基因表達載體的構建啟動子起始密碼子位于mRNA分子中，分別控制翻譯的開始和終止。啟動子終止子起始密碼子終止密碼子轉錄AUGUAG終止子終止密碼子有特殊序列結構的DNA片段，分別控制轉錄的開始和終止。構建流程1.用限制酶在載體的基因插入位點處切割質粒。2.用同種限制酶切割含有目的基因的片段，獲取目的基因。3.用DNA連接酶把目的基因和載體連接，構建重組DNA分子。構建流程構建過程中可能會遇到哪些問題？載體發生自身環化目的基因反向接入構建流程如何避免載體自身環化和目的基因反向接入？EcoRⅠNotⅠ受體質粒EcoRⅠ、NotⅠ分解EcoRⅠ、NotⅠ分解EcoRⅠNotⅠEcoRⅠNotⅠ受體質粒EcoRⅠNotⅠ供體質粒目的基因EcoRⅠNotⅠ重組質粒目的基因連接雙酶法。用兩種限制酶切割含有目的基因的DNA片段和質粒。小結確保目的基因在受體細胞中能夠穩定存在和表達，并能夠遺傳給下一代。目的組成目的基因標記基因啟動子終止子RNA聚合酶識別和結合的位點，驅動基因轉錄mRNA鑒別受體細胞是否含有目的基因終止基因轉錄mRNA所需的基因將目的基因導入受體細胞03將目的基因導入受體細胞構建好的基因表達載體需要通過一定的方式才能進入受體細胞。必修二中學習的格里菲思實驗：格里菲思在1928年利用肺炎鏈球菌與老鼠所進行的一系列生物學實驗。實驗結果顯示，細菌的遺傳訊息，會因為“轉化”作用而發生改變。將目的基因導入受體細胞轉化什么是轉化？針對不同的生物，采取的轉化手段一樣嗎？目的基因進入受體細胞，并且在受體細胞內維持穩定并表達的過程，稱為轉化。將目的基因導入植物細胞將目的基因導入動物細胞將目的基因導入微生物細胞將目的基因導入植物細胞花粉管通道法我國科學家獨創的一種方法，將Bt基因導入了棉花細胞。將目的基因導入植物細胞農桿菌轉化法將目的基因插入Ti質粒的T-DNA中，通過農桿菌的轉化作用，就可以使目的基因進入植物細胞。為什么農桿菌容易感染雙子葉植物？這種酚類化合物主要在雙子葉植物細胞壁中合成，單子葉植物通常沒有。科學研究發現，當植物體受到損傷時，傷口處的細胞會分泌大量的酚類化合物，吸引農桿菌移向這些細胞，這時農桿菌中的Ti質粒上的T-DNA(可轉移的DNA）可轉移至受體細胞，并整合到受體細胞染色體的DNA上。基因槍法單子葉植物中常用的一種基因轉化方法，成本較高。“基因槍法“又稱“微彈轟擊法”。它是利用壓縮氣體產生的動力，將包裹在金屬顆粒表面的表達載體DNA打入受體細胞中，使目的基因與其整合并表達的方法。應用將目的基因導入動物細胞如何將目的基因導入動物細胞呢？常用的方法是：顯微注射技術顯微注射是一種通過玻璃微量移液管將外來DNA遞送到活細胞的技術。取受精卵顯微注射移植到輸卵管、子宮受精卵發育新性狀的動物將目的基因導入微生物細胞受體細胞：原核細胞（常用大腸桿菌）選擇理由：繁殖快、多為單細胞、遺傳物質相對較少。方法流程：大腸桿菌感受態細胞CaCl2溶于緩沖液中的重組DNA分子易吸收外源DNA分子的狀態轉化(重組DNA分子進入受體細胞)小結轉化：目的基因進入受體細胞，并且在受體細胞內維持穩定并表達的過程，稱為轉化。常用轉化方法目的基因導入植物細胞目的基因導入動物細胞：目的基因導入微生物細胞：農桿菌轉化法基因槍法花粉管通道法顯微注射法Ca2+轉化法（感受態細胞）目的基因的檢測與鑒定04目的基因的檢測與鑒定目的基因進入受體細胞后，是否穩定維持和表達其遺傳特性，只有通過檢測與鑒定才能知道，這也是檢查轉基因抗蟲棉是否培育成功的一步。檢測水平DNA水平RNA水平蛋白質水平個體水平分子水平DNA水平檢測檢測目的檢測對象檢測方法檢測轉基因生物的DNA上是否插入了目的基因目的基因DNA分子雜交技術檢測工具基因探針帶有標記（放射性同位素標記、熒光分子標記等）的目的基因片段RNA水平檢測檢測目的檢測對象檢測方法檢測目的基因是否轉錄出mRNA目的基因轉錄的mRNARNA分子雜交技術檢測工具用探針和轉基因生物的mRNA雜交，若出現雜交帶，表明目的基因轉錄出了mRNA+蛋白質水平檢測檢測目的檢測對象檢測方法檢測目的基因