家畜組織胚胎學第一章緒論第一節家畜組織胚胎學的研究內容和意義組織胚胎學包括組織學和胚胎學兩部分。組織學（histology）是研究動物體微細結構及功能的科學。動物體是由各種器官系統構成的，每個器官都包括幾種不同的組織，而每一種組織又是由細胞和細胞間質構成的。因此，組織學的研究內容包括細胞、基本組織和器官組織三個部分。胚胎學（embryology）是研究動物個體胚胎發育的科學。胚胎學的研究內容包括配子發生、受精、卵裂、原腸胚和神經胚形成、胎膜和胎盤以及器官發生等。組織胚胎學屬于動物科學和醫學專業的專業基礎課。只有掌握了動物的正常形態結構和胚胎發育規律，才能進一步了解動物的生理活動規律，并利用這些規律去合理地飼養、繁殖和改良動物以及防治各種疾病。因此，學好組織學與胚胎學是學好生理學、繁殖學、飼養學、動物生產學、病理學、免疫學和臨床醫學等課程所必不可少的基礎。第二節組織胚胎學研究方法及基本原理所有的組織胚胎學研究方法均需將有機體的器官和組織經過特殊處理，再應用各種顯微鏡進行觀察研究后得出科學的結果。1.組織學制片技術一般是先把組織制成薄片，最常用的是石蠟切片，其制備方法是：①取材與固定：把新鮮組織放到甲醛溶液等固定液中，使蛋白質等成分迅速凝固，盡可能保持其活體時的結構狀態。②脫水與透明：為使石蠟浸入組織內，把固定好的材料用乙醇逐級（70%-100%）脫水。用二甲苯或乙醚等石蠟溶劑使組織浸透，便于浸蠟。一、固定組織研究法③浸蠟與包埋：把組織放入融化（58-60℃）的石蠟中，進行浸透和包埋成蠟塊，目的是使石蠟進入細胞間隙和細胞內，以增加組織的硬度，便于切片。④切片與貼片：將蠟塊用切片機切成5-10μm厚的組織切片，并鋪展粘到載玻片上。⑤染色與封固：把粘好的切片脫蠟后，用適當的染料進行染色。染色后，再經脫水和透明，最后把組織用樹膠和蓋片封片。除了石蠟切片外，血液可以制成血涂片，疏松結締組織和腸系膜等薄層組織可制成鋪片，骨組織可制成磨片,然后固定和染色。

最常用的染色方法是蘇木精（hematoxylin）和伊紅（eosin）染色的染色方法，簡稱H.E.染色。蘇木精是堿性染液，可以使細胞核內的染色質和細胞質中的核糖體等成分染成藍紫色，故這些成分被說成是嗜堿性著色的。伊紅是酸性染料，可使多數細胞的細胞質染成粉紅色，這些細胞質被稱為嗜酸性的。對堿性和酸性染料親和力都不強的結構，稱為嗜中性的。染色方法染色方法HE染色蘇木精伊紅嗜堿性結構：細胞核粗面內質網游離核糖體等嗜酸性結構：細胞質基質溶酶體、線粒體等細胞器膠原纖維等染色方法HE染色法以外的所有染色法，通常是為了顯示某些用HE染色法顯示不出的細胞和結構。如：蘇丹法——顯示脂肪鍍銀法——顯示神經細胞、嗜銀顆粒鐵蘇木素法——顯示心肌閏盤馬氏三色法——顯示胰島細胞甲苯胺藍法——顯示糖胺多糖

特殊染色鍍銀染色，顯示大腦皮質神經元氯化金染色，顯示運動終板Hemalum染色，顯示心肌纖維及閏盤2、組織化學技術組織化學(histochemistry)：

通過化學或物理反應原理顯示組織或細胞內化學成分，通常是使其形成有色終末產物，以便在鏡下觀察，可進行定位和定量。1．一般組織化學術是利用化學試劑與組織內的某些物質進行化學反應，在局部形成能夠在顯微鏡下觀察到的沉淀物。例如，過碘酸雪夫氏反應（periodicacidchiff’sreaction,PAS反應）的基本原理是通過過碘酸的氧化作用，使多糖生成醛基，后者與雪夫氏試劑中的無色堿性品紅反應，在反應部位形成紫紅色沉淀，從而證明細胞內含有糖原或粘多糖成分。

HIO4Shiff試劑多糖醛紫紅色沉淀物（氧化）（堿性品紅）組織化學術PAS反應，顯示小腸上皮杯狀細胞的粘原顆粒組織化學術⒉免疫組織化學術（immunocytochemistry)

利用組織化學技術的原理，再結合免疫學方法，則為免疫細胞化學術。主要的檢測對象為肽和蛋白質。組織化學術免疫組織化學，顯示胰島B細胞組織化學術⒊原位雜交術（insituhybridization)

為核酸（DNA和RNA）組織化學術。用帶有標記物的已知堿基順序的核酸探針，與細胞內待測的核酸結合（雜交），從而在原位顯示該核酸。原位雜交，顯示臍靜脈內皮細胞的心房鈉尿肽陽性組織化學術活體組織研究法二、其它研究方法自學細胞培養術細胞融合組織工程術細胞電泳新的研究方法

放射自顯影術圖像分析術流式細胞術光學顯微鏡（lightmicroscopeLM）電子顯微鏡（electronmicroscopeEM）三、顯微鏡一．光學顯微鏡光鏡普通光學顯微鏡（lightmicroscope）的分辨率為0.2μm，可放大1000倍左右，能觀察組織和細胞的一般結構。分辨率是指能夠分辨兩顆粒之間的最小距離。顯微鏡下常用的長度單位在光鏡下所見的組織和細胞的結構叫做一般微細結構，而在電鏡下所見的結構則稱之為超微結構。在光鏡和電鏡下進行觀察時，常用的計量單位有：1μm（微米，micrometer）=1/1000mm（毫米，millimeter）1nm（納米，nanometer）=1/1000μm1pm（皮米）＝1/1000nm光鏡光學顯微鏡的分類1、生物顯微鏡2、熒光顯微鏡3、相差顯微鏡4、暗視野顯微鏡5、偏光顯微鏡6、激光共聚焦顯微鏡光鏡光鏡光鏡大鼠附睪上皮細胞微絲（肌動蛋白）及細胞核光鏡二電子顯微鏡技術常用的電鏡有透射電鏡和掃描電鏡兩種。與光鏡比較，電鏡的基本原理是以電子束代替光線，以電磁透鏡代替光學透鏡。電鏡透射電鏡（TEM）的分辨率已達到0.2nm左右，可放大幾萬到幾十萬倍。其工作原理是，電子束透過樣品后，投射到熒光屏上，形成物像。由于電子易散射和被物體吸收，所以必須制備超薄切片（90-100nm）。電鏡樣品的制備過程：取小材料塊（1mm3以內）用戊二醛和鋨酸雙重固定→環氧樹脂包埋→超薄切片機切片→鉛鈾重金屬電子染色→電鏡觀察。被金屬鹽所染的部位，因透過的電子束少而在熒光屏上顯得暗，稱為電子密度高，反之則稱為電子密度低。透射電鏡電鏡電鏡掃描電鏡（SEM） 是用極細的電子束在樣品表面進行掃描并用特定的探測器收集所發生的二次電子，形成電信號傳送到顯像管，在熒光屏上顯現出物體表面的立體圖象。掃描電鏡的樣品制備方法： 將較大的組織塊