新一代肝癌標志物

-----甲胎蛋白異質體（AFP-L3）新一代肝癌標志物

-----甲胎蛋白異質體（AFP-目錄原發性肝癌及現行診斷甲胎蛋白異質體AFP-L32目錄原發性肝癌及現行診斷231、原發性肝癌及現行診斷31、原發性肝癌及現行診斷原發性肝癌（PRIMARYCARCINOMAOFTHELIVER）4轉移性原發性肝癌肝肉瘤上皮組織間葉組織肝惡性腫瘤來源于肝臟上皮的肝部惡性腫瘤，分為肝細胞癌（HCC，>90%）、膽管細胞癌(~5%)、混合細胞癌(~5%)。病因包括：病毒性肝炎和肝硬化；黃曲霉素；其他化學致癌物；飲水污染等。被稱為“癌中之王”原發性肝癌（PRIMARYCARCINOMAOFTHE臨床表現原發性肝癌早期多無典型癥狀，臨床就診者多為中晚期病人右上腹疼痛rightupperquadrantpain消化道癥狀digestivetractsymptom出血傾向hemorrhagictendency黃疸、發熱jaundiceandfebrile肝臟腫大livertumefaction轉移與旁癌綜合征metastasisandparacarcinomaSyndrome5臨床表現原發性肝癌早期多無典型癥狀，臨床就診者多為中晚期病人強調肝癌的早期發現，早診早治6早期中間階段進展期終末期單結節/3個結節=3cm；無衛星灶；無肝外轉移Child-PughA多結節；無肝外轉移門脈受累；肝外轉移Child-PughC標準治療方案根治性治療：切除及/或肝移植化療Sorafenib對癥治療預期生存時間>60個月~20個月~11個月<3個月肝癌所處階段與預后之間的關系由于肝癌的早期診斷對于有效治療和長期生存至關重要,因此,十分強調肝癌的早期篩查和早期監測。強調肝癌的早期發現，早診早治6早期中間階段進展期終末期單結節778現行診斷1：定位診斷A、超聲檢查B、放射性核素肝掃描C、CT檢查D、選擇性腹腔動脈或肝動脈造影檢查E、X線檢查F、磁共振成像（MRI）G、肝穿刺行針吸細胞學檢查H、剖腹探查ACBDE<1.0的病灶發現困難良、惡性結節鑒別困難影像學動態監測的高成本，患者難以承受肝癌發展至一定階段時,影像學檢查可有相應表現,但往往已發展至疾病中晚期,且對疾病早期診斷概率低8現行診斷1：定位診斷A、超聲檢查ACBDE<1.0的病9現行診斷2：實驗室輔助診斷實驗室輔助診斷：包括肝癌標志物、肝功能檢測、病毒性肝炎（乙型與丙型）有關指標、免疫指標、其他細胞因子等。肝癌標志物：甲胎蛋白（AFP）測定血清酶等其他腫瘤標記物檢查由于缺乏特異性，只作輔助診斷，如堿性磷酸酶、γ-谷胺酰轉肽酶、乳酸脫氫酶的某些同工異構酶谷氨酰轉肽酶（GGT）及其同工酶、α-L-巖藻苷酶(AFU)、異常凝血酶原（DCP）、高爾基體蛋白73(GP73)，5－核苷酸磷酸二酯酶(5'NPD)同工酶、醛縮酶同工酶A（ALD-A）和胎盤型谷胱甘肽S-轉移酶（GST）等，還有異常凝血酶原（DCP）、鐵蛋白(FT)和酸性鐵蛋白(AIF)等。部分HCC患者，可有癌胚抗原（CEA）和糖類抗原CA19-9等異常增高。9現行診斷2：實驗室輔助診斷實驗室輔助診斷：包括肝癌標志物、甲胎蛋白（AFP）AFP:一種糖蛋白。正常情況下，來自胚胎的肝細胞和卵黃囊，胎兒出生約兩周后甲胎蛋白從血液中消失。正常人血清中甲胎蛋白的含量尚不到20ug/L。1956年發現，60年代末應用于臨床，70年代用于自然人群與肝癌高危人群普查。至今被公認為優秀的肝癌診斷標記物而廣泛使用。一般認為，AFP是HCC相對特異的腫瘤標志物，AFP持續升高是發生HCC的危險因素。AFP臨床價值：a、目前較好的早期診斷方法，可在癥狀出現前6個月以上作出診斷，可與影像相互補充。b、為反映病情動態變化和評估療效的敏感指標。c、可檢查出根治切除術后亞臨床期復發與轉移10甲胎蛋白（AFP）AFP:一種糖蛋白。正常情況下，來自胚胎通過AFP診斷HCC的臨床標準《原發性肝癌診療規范（2011版）》：對于AFP≥400μg/L超過1個月，或≥200μg/L持續2個月，排除妊娠、生殖腺胚胎癌和活動性肝病，應該高度懷疑肝癌中國抗癌協會肝癌專委會：2001年提出了原發性肝癌的臨床與分期標準，AFP對原發性肝癌的診斷值定為400μg/L。11通過AFP診斷HCC的臨床標準《原發性肝癌診療規范（201112AFP的不足近年來有報道指出,以上述標準診斷原發性肝癌,敏感性為39-64%,特異性為76-91%,對早期肝癌具有9-32%陽性預測值有近1/3的HCC患者AFP為陰性（敏感性不足），同時20-50%的慢性肝炎、肝硬化也合成AFP（特異性不足）,這給HCC的診斷帶來了困難。特異性不足20-50%的慢性肝炎、肝硬化也合成AFP2010版美國肝病研究學會(AASLD)指南已不再將AFP作為篩查指標但我國的HCC大多與HBV感染相關，與西方國家HCC致病因素不同（多為HCV、酒精和代謝性因素），結合國內隨機研究(RCT)結果和實際情況，目前對HCC的常規監測篩查指標中繼續保留AFP。12AFP的不足近年來有報道指出,以上述標準診斷原發性肝癌,132、甲胎蛋白異質體AFP-L3132、甲胎蛋白異質體AFP-L3甲胎蛋白異質體：AFP-L3AFP是糖蛋白，其蛋白上含有不同糖鏈依據不同糖鏈與小扁豆凝集素LCA親和力，可將總AFP分為

AFP-L1、AFP-L2、AFP-L3，其中：AFP-L1來源于良性肝病細胞（LCA非結合型）AFP-L2來源于孕婦（LCA弱結合型）AFP-L3來源于癌變肝細胞（LCA強結合型）14甲胎蛋白異質體：AFP-L3AFP是糖蛋白，其蛋白上含有不同如何使用這一指標？a.分別測定樣本中總AFP濃度及其異質體AFP-L3的濃度b.計算AFP-L3占總AFP比率（AFP-L3/AFP）

以下簡寫成AFP-L3%，簡稱異質體比率)c.以10%為Cutoff確認結果15陽性：AFP-L3%≥10%陰性：AFP-L3%＜10%如何使用這一指標？a.分別測定樣本中總AFP濃度及其異質體A美國：AFP-L3已獲得FDA批準16特異性不同的各類HCC診斷標志物文獻:RecentDevelopmentsintheFirstDetectionofHepatocellularCarcinomaJosephB.Lopez

ClinBiochemRevVol26,August2005I65美國：AFP-L3已獲得FDA批準16特異性不同的各類HCC中國:AFP-L3列入肝癌診斷標準AFP-L3已在1999年第四屆全國肝癌學術會議上獲得通過，確定為原發性肝癌臨床診斷標準的肝癌標記物之一。認為是比單純的AFP更為特異的原發性肝癌指標。17中國:AFP-L3列入肝癌診斷標準AFP-L3已在1999年18中國：

AFP-L3進入《原發性肝癌診療規范（2011版）》血清AFP及其異質體是診斷肝癌的重要指標和特異性最強的腫瘤標記物，國內常用于肝癌的普查、早期診斷、術后監測和隨訪。18中國：

AFP-L3進入《原發性肝癌診療規范（2011版19AFP-L3的臨床意義鑒別良惡性肝病更好的肝癌早期預警指標肝癌預后的評價指標腫瘤惡性程度指標19AFP-L3的臨床意義鑒別良惡性肝病20一、鑒別良惡性肝病國內外研究結果都一致表明：慢性肝病血清AFP-L3百分比很低,而原發性肝癌很高,表明AFP-L3測定非常有助于良、惡性肝病的鑒別診斷。應用AFP-L3鑒別良、惡性肝病應注意以下題:(1)AFP-L3上升與血清AFP值無關,只要AFP陽性,AFP-L3就可能高；(2)大量研究表明血清AFP為20～50ng/ml,而AFP-L3呈陽性，從而使肝癌得到及早診斷。因此,AFP-L3也非常適用于AFP低濃度陽性良、惡性肝病的鑒別診斷；(3)約有35%～45%小肝癌(直徑<2cm)病人已顯示AFP-L3顯著升高。因此,AFP-L3對肝癌早期診斷很有價值。20一、鑒別良惡性肝病國內外研究結果都一致表明：慢性肝病血清21鑒別良惡性肝病AFP-L3%對HCC檢測的特異性高達95%以上。《日本醫師會雄志》2004年第131卷第5期研究一：HCC與良性肝病21鑒別良惡性肝病AFP-L3%對HCC檢22AFP-L3%，AFP對肝病鑒別診斷的對比（檢驗科常規應用數據統計）

AFP

ROC曲線AFP-L3%

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數據來源：福建省福州傳染病醫院研究三：綜合性能對比22AFP-L3%，AFP對肝病鑒別診斷的對比23二、AFP-L3：更優秀的早期預警指標AFP-L3隨肝細胞癌變在血中升高。研究發現AFP-L3升高較影像學檢查陽性早出現3～28個月,AFP-L3陽性預測肝癌發生的正確率為94%［1］。AFP-L3升高的肝硬化病人大多數在3～18個月內被診斷為肝癌［2］；另外，在影像學檢查尚未發現肝癌特征性占位性病變時,對AFP低濃度陽性病例進行AFP-L3檢測可以早期預警肝癌發生［3］。［1］ChinMedSciJ,1992,7(4):191-195［2］NEnglJMed,1993,328(25):1802-1806［3］Hepatology,1995,22(3):802-807.23二、AFP-L3：更優秀的早期預警指標AFP-L3隨肝24AFP＜400ng/mlAFP-L3%＞10％CT陰性AFP＜400ng/mlAFP-L3%＞10％CT陰性AFP＜400ng/mlAFP-L3%＞10％CT陽性AFP＜400ng/mlAFP-L3%＞10％CT陽性研究一：半年及三年隨訪各1例

哈爾濱鐵路中心醫院24AFP＜400ng/mlAFP＜400ng/mlAFP＜25解放軍第302醫院臨床主診斷AFP陽性、AFP-L3%陽性AFP陽性、AFP-L3%陰性初次診斷非肝癌21626個月后肝癌123肝癌發生率57.1%4.8%危險率增加倍數12倍該研究揭示AFP-L3與AFP值無相關性，可以作為一個獨立肝細胞癌診斷因素。AFP-L3%對于AFP陽性時良、惡性肝病的鑒別及肝癌的早期預警診斷具有重要意義研究三：臨床隨訪實例25解放軍第302醫院臨床主診斷AFP陽性、AFP陽性、初次26三、AFP-L3：肝癌預后評價指標肝癌術后AFP-L3陽性組平均生存期顯著低于陰性組,術后

AFP-L3仍很高的患者其肝癌多灶性復發或門靜脈瘤栓發生率明顯高于AFP-L3正常者；AFP-L3正常的患者存活率高于AFP-L3升高的患者；大量的研究報道認為AFP-L3是惡性生物學的良好指標,可作為一個獨立的肝癌預后標志物指標。26三、AFP-L3：肝癌預后評價指標肝癌術后AFP-L3陽27總生存率比較圖術后AFP-L3%陰性32例HCC患者術后AFP-L3%陽性23例HCC患者P=0.000627總生存率比較圖術后AFP-L3%陰性32例HCC患者術后28上海東方肝膽醫院AnnSurgOncol(2011)AFP-L3/總AFP高比值，是病理侵犯性的一個指標。與那些術前陰性患者相比，術前AFP-L3陽性患者復發時間顯著較早復發時間中位數為22.0±2.4個月vs45.0±6.9個月

28上海東方肝膽醫院AnnSurgOncol(201129手術后，與AFP-L3持續陰性結果的患者相比，AFP-L3持續陽性或陰性轉陽性結果患者中，復發人數顯著較多，尤其是遠處轉移。

29手術后，與AFP-L3持續陰性結果的患者相比，AFP-L如果術前AFP-L3陽性和術后AFP-L3持續陽性或陰性轉陽性，那么我們可以預測腫瘤行為更加具有侵犯性的，腫瘤復發率較高，以及臨床結果較差。HCC患者的AFP-L3/總AFP比值越高，就越需要積極的治療及密切隨訪。如果術前AFP-L3陽性和術后AFP-L3持續陽性或31四、AFP-L3是腫瘤的惡性程度指標影像學研究發現AFP-L3%陽性的HCC通常有豐富的肝動脈血液供給，腫瘤的倍增時間較短。31四、AFP-L3是腫瘤的惡性程度指標影像學研究發現AFAFP-L3%的檢測決定于AFP-L3的分離水平傳統異質體測定方法對于技術的要求較高、操作繁瑣、試劑昂貴。主要采用親合電泳顯影技術熱景生物在科技部資金的支持下，獨家研發出捕獲AFP-L3的專利技術對比項目凝集素親和電泳法熱景生物產品操作繁瑣簡單、半自動時間48小時40分鐘回收率---≥92%