受理號：CSZ2100041體外診斷試劑產品注冊技術審評報告產品中文名稱：人SDC2、NPY、FGF5PDX1基因甲基化檢測試劑盒（熒光PCR法）產品管理類別：第三類申請人名稱：安徽達健醫學科技有限公司國家藥品監督管理局醫療器械技術審評中心目錄基本信息.........................................................................................................3一、申請人名稱.............................................................................................3二、申請人住所.............................................................................................3..................................................................................................3技術審評概述.................................................................................................4..................................................................................................4....................................................................................7.........................................................................................12.................................................................................15綜合評價意見...............................................................................................18基本信息一、申請人名稱安徽達健醫學科技有限公司二、申請人住所蕪湖經濟技術開發區東區9#三、生產地址蕪湖經濟技術開發區東區9#技術審評概述一、產品概述（一）產品主要組成成分表1試劑盒主要組成成分試劑盒：亞硫酸氫鹽轉化試劑盒（離心柱型）體積組分主要成分20501.轉化液亞硫酸氫鈉2管5管2.緩沖液520L1.3mL3.結合液異硫氰酸胍20mL4.漂洗液純化水2.4mL5.脫磺液10mL6.洗脫液、600L1.5mL7.吸附柱硅膠膜20個50個8.收集管/20個50個試劑盒：熒光擴增試劑盒體積試劑組分主要成分2050dNTP、10×PCR、聚合酶400L1000L基因/NPY基因/引物探針混合液內標基因的引物和探I針100L250LPDX1基因/FGF5基因/引物探針混合Ⅱ內標基因的引物和探100250針陰性對照品正常人白細胞和1×TE60L100L陽性對照品腸癌細胞株和1×TE60L100L（二）產品預期用途本產品用于體外定性檢測人糞便脫落細胞中SDC2、NPY、FGF5、4種基因甲基化狀態。本產品適用于結直腸癌高危、臨床診斷需要進行結腸鏡檢查但因患者結腸鏡依從性差或其他醫學原因無法做結腸鏡檢查患者的輔助診斷。檢測結果不作為腸癌早期診斷或確診的依據且不能替代結腸鏡檢查，僅作為輔助診斷供臨床醫師參考。不能用于普通人群的腫瘤篩查。SDC2（黏結蛋白多糖2胞遷移、與細胞外基質蛋白相互作用等，其甲基化被多項研究PDX1（胰十二指腸同源盒蛋白1）是胚胎消化道發育分化和維持胰島功能的關鍵轉錄因子。FGF5（纖維原細胞生長因子層和神經外胚層細胞的生長和分化，也被發現可以致癌并在多種腫瘤細胞株中表達。NPY（神經肽Y蛋白偶聯、NPY、FGF5、4種基因的甲基化狀態可以通過對甲基化、、FGF5、4種基因呈高甲基化狀態。（三）產品包裝規格20人份/盒、50人份盒（四）產品檢驗原理本產品包括兩個步驟：步驟I，用試劑盒I將提取的基因組DNA進行亞硫酸氫鹽轉化，未發生甲基化的胞嘧啶被轉化為尿嘧啶，而甲基化的胞嘧啶不變。步驟中亞硫酸氫鹽轉化后的DNA（Bis-DNA試劑盒進行多重熒光定量PCR探針能與甲基化目的基因CpG中特異性地檢測出甲基化CpG控每個樣本的提取效果及PCR反應的擴增情況，從而有效避免假陰性或部分抑制結果的出現。另外，試劑盒中提供了陰性對照品和陽性對照品，需在每一次檢測中同時檢測陰性對照品和陽性對照品。二、臨床前研究概述（一）主要原材料主要原材料的選擇本產品的主要原材料包括dNTP物和探針。這些原材料均是通過外購的方式獲得。酶由原材料供應商克隆表達后獲得；dNTP、亞硫酸氫鹽由供應商化學合成獲得。申請人對主要原材料進行了供應商的選擇，通過功能性篩選出合格供應商，制定了主要原材料的技術要求和質量標準并經檢驗合格。考品以及檢出限參考品。DNA括各基因相應位點甲基化陽性和陰性，這些樣本各基因的甲基化狀態均經過數字方法驗證。陽性參考品包括8P1-P8定濃度下各基因不同甲基化比例的樣本。陰性參考品包括3種，分別命名為陰性參考品，為一定濃度下含有低于檢測靈敏度的樣本。精密度參考品包括3種，分別命名為J1-J3。檢出限參考品包括8L1-L8比例和濃度的樣本。本試劑盒同時設置了陽性對照和陰性對照，用于檢測過程中的試劑和儀器的質量控制。此外，每個樣本均檢測內參基因，用于結果的判讀及評估樣本的質量。（二）生產工藝及反應體系研究申請人對試劑盒反應體系的研究包括引物探針濃度的確定、聚合酶用量的確定、用量的確定、鎂離子濃度的確定、dNTP濃度的確定、反應體積的確定、模板體反應條件的研究包括退功能性實驗，最終確定了最佳反應體系。申請人根據試劑盒中試劑及組件的主要生產工藝的研究結果，確定了最佳的生產工藝。（三）分析性能評估本產品分析性能評估內容包括準確度、精密度、分析靈敏究，同時對糞便樣本穩定性、糞便樣本核酸提取液穩定性及糞便樣本核酸轉化后穩定性進行了研究。準確度研究中，申請人分別使用三批試劑盒對陽性參考品和陰性參考品進行檢測，檢測結果顯示陽性符合率、陰性符合率均為進行研究，研究結果顯示試劑盒檢測結果與測序結果陽性符合率均為100%、陰性符合率均大于96%。20天進行連續的檢測。結果顯示試劑盒對精密度參考品的批內、日5%。分析靈敏度研究中，以陰性糞便樣本為基質，采用不同濃度、不同甲基化比例的模擬樣本，每個濃度梯度的樣本檢測次進行最低檢出限的確認。使用三個批次的試劑盒，用多例真實臨床樣本在最低檢出限濃度水平上進行最低檢出限驗證。明確了試劑盒的最低檢出限為10ng/uL的野生型背景下，5%的各基因甲基化DNA。分析特異性研究包含交叉反應和干擾研究，交叉反應研究包括其他基因甲基化的樣本和常見腸道微生物樣本、轉化前結用三批試劑盒檢測其他惡行腫瘤患者糞便樣本，包括口腔癌、干擾試驗結果顯示，糞便樣本中含有以下干擾物：膽紅素（5mg/mL5.00mg/mL1.50mg/mLDNA500ng/ml植物500ng/ml素如四環素（10.65mg/ml）、青霉素（2.56mg/ml）等，常用胃藥嗎丁啉（0.14mg/ml）、胃藥斯達舒（6.84mg/ml），甘露醇（7.25mg/ml24.75mg/ml布洛芬膠囊、奧美拉唑（）、頭孢克肟（20.5mg/ml0.15mg/ml）以及腫瘤治療藥物去氧氟尿苷片（）、貝伐珠單抗（9.23mg/ml1注意勿服用藥物黃連素。申請人采用臨床糞便樣本進行了核酸提取試劑盒性能研究，并根據與該產品的組合性能研究結果，確定推薦的核酸提取試劑符合檢測要求。（四）陽性判斷值或參考區間研究本產品陽性判斷值的研究采用臨床來源糞便樣本。陽性判斷值研究入組（包括建立和驗證）有效樣本數共計胰腺癌患者、腸炎、腸道未見明細異常人群等。采用百分位數法確定內標基因的CtCt值≤25時判定樣本合格。使用風險值（P值）計算公式分析靶標基因檢測結果Ct值P指數來確定最合適的靈敏度和特異性所對應的法進行計算，測結果P值≥5.00P值＜5.00時，樣本檢測結果為陰性。（五）穩定性研究申請人對該產品的穩定性研究包括貨架效期穩定性、運輸定性。貨架有效期穩定性：將三批試劑盒置于規定儲存條件下放置02468劑盒的性能進行檢測，結果顯示試劑盒在生產后保存至8各項性能指標均符合產品技術要求，產品有效期6個月。性分別進行了研究。結果顯示，產品的性能均能滿足產品說明書的聲稱。三、臨床評價概述申請人在中山大學腫瘤防治中心、安徽省腫瘤醫院和哈爾濱醫科大學附屬腫瘤醫院共三家臨床試驗機構開展臨床試驗。臨床試驗包括以下三方面：第一，采用試驗體外診斷試劑與相關疾病診斷的臨床參考其他腫瘤病例采用病理診斷確診，其他疾病根據相關診療指南進行綜合診斷確診。臨床試驗入組受試者主要為醫生建議進行結腸鏡檢查的患者，具體包括不同分期結直腸癌患者、結直腸癌前病變患者、消化道良性疾病患者等，同時納入部分其他消化道腫瘤患者進行特異性評價。樣本類型為人糞便樣本。臨床試驗共納入結直腸癌患者419例（覆蓋結直腸癌III期），癌前病變患者172例（包括進展期腺瘤患者中高級別瘤變患者33856例（包括各種消化道良性疾病病例和其他消化道腫瘤病例91.17%（95%CI88.07%93.53%臨床靈敏度為67.44%95%CI60.12%74.00%期腺瘤患者臨床靈敏度為75.81%（95%CI67.57%82.50%對于高級別瘤變患者臨床靈敏度為84.85%（95%CI：69.08%，93.35%）。對于非結直腸癌或癌前病變的其他病例臨床特異度為91.12%（95%CI：89.03%，92.85%第二，采用試驗體外診斷試劑與Sanger測序對比，評價四驗體外診斷試劑與Sanger測序法分別檢測受試者糞便樣本，評價兩種方法檢測四項基因甲基化的一致性。臨床試驗共入組需進行腸鏡檢查患者182SDC2、NPY、FGF5、PDX1四基因甲基化的陽性符合率分別為（95%CI94.80%100%98.75%（95%CI93.25%99.78%100%（95%CI93.58%100%98.32%（94.08%，99.54%（95%CI95.12%99.84%、98.04%（95%CI93.13%99.46%99.21%（95%CI95.64%，99.86%（95%CI91.54%99.72%驗體外診斷試劑與Sanger測序法分別檢測受試者糞便樣本和同源結直腸病變組織樣本中的四項基因甲基化，并進行一致性評價。臨床試驗共入組需進行結腸鏡檢查患者例，試驗結果PDX1四基因甲基化的陽性符合率點估計值不低于97%，陰性符合率點估計值均為100%。47例結直腸癌患者手術前后樣本進42例患者，37例術后檢測結果為陰性。上述結果顯示試驗體外診斷試劑臨床檢測性能滿足要求。四、產品受益風險判定根據YY/T0316-2016《醫療器械風險管理對醫療器械的應用》對人、、FGF5基因甲基化檢測試劑盒（熒光法）進行產品受益風險判定。（一）受益評估本產品適用于結直腸癌高危、臨床診斷需要進行結腸鏡檢查但因患者結腸鏡依從性差或其他醫學原因無法做結腸鏡檢查患者的輔助診斷，檢測結果不作為腸癌早期診斷或確診的依據且不能替代結腸鏡檢查，僅作為輔助診斷供臨床醫師參考。不能用于普通人群的腫瘤篩查。具體臨床應用時，臨床醫生必須結合病例實際情況判斷。其臨床應用的主要受益在于：該產品作為臨床醫生建議做腸鏡檢查的患者提供一種無創的結直腸癌輔助診斷方法的選擇，檢測結果為陽性的患者體內有結直腸癌獲得及時的診斷和治療。依據現有的臨床試驗結果，其對結直腸癌患者臨床靈敏度為91.17%床特異性為91.12%，對進展期腺瘤的靈敏度為75.81%。（二）風險評估該試劑盒已知和可預見的安全風險主要有以下幾個方面：1早期診斷或確診的依據，臨床醫生未結合其他診斷方法進行綜合診斷。2．與生產過程相關的風險，例如說明書印刷錯誤。3條件下儲存、運輸試劑。4定量5用過程中產生的廢棄物未按照要求按醫療廢棄物統一銷毀處理。通過對人SDC2FGF5基因甲基化檢測試劑及企業規章制度對產品質量的全過程控制和風險防控措施，已將產品的風險系數降低到了驗收準則規定的可接受范圍內，同時采取降低風險的措施后沒有引入新的風險。在目前認知水平上，認為該產品上市帶來的受益大于風險。盡管目前認為該試劑盒的受益大于風險，但是為保障用械安全，基于對主要剩余風險的控制已在該試劑盒說明書提示以下信息：預期用途本試劑盒用于體外定性檢測人糞便脫落細胞中SDC2、FGF5、4種基因甲基化。該產品適用于結直腸癌高危、臨床診斷需要進行結腸鏡檢查但因患者結腸鏡依從性差或其他醫學原因無法做結腸鏡檢查患者的輔助診斷。檢測結果不作為腸癌早期診斷或確診的依據且不能替代結腸鏡檢查，僅作為輔助診斷供臨床醫師參考。不能用于普通人群的腫瘤篩查。具體臨床應用時，臨床醫生必須結合病例實際情況判斷。陽性結果需要進一步接受腸鏡檢查；陰性結果表示受檢者體內有結直腸癌和/或進展期腺瘤的可能性本產品不能替代腸鏡，不能用于普通人群的結直腸癌篩查。警示及注意事項：該試劑盒說明書中明確了該試劑盒檢測方法的局限性及使用中的注意事項。綜合評價意見本申報項目為境內第三類醫療器械產品注冊，屬于境內同注冊管理辦法》（國家食品藥品監督管理總局令第5號）等相關醫療器械法規與配套規章，經系統評價后，建議準予注冊。2023年7月10日附件：產品說明書人SDC2、、、基因甲基化檢測試劑盒（熒光法）說明書【產品名稱】通用名稱：人SDC2、NPY、、基因甲基化檢測試劑盒（熒光PCR法）【包裝規格】20人份/盒、50人份/盒【預期用途】本產品用于體外定性檢測人糞便脫落細胞中SDC2、NPY、、4種基因甲基化狀態。本產品適用于結直腸癌高危、臨床診斷需要進行結腸鏡檢查但因患者結腸鏡依從性差或其他醫學原因無法診斷供臨床醫師參考。不能用于普通人群的腫瘤篩查。（黏結蛋白多糖2（胰十二指腸同源盒蛋白1（纖維原細胞生長因子5的生長和分化，也被發現可以致癌并在多種腫瘤細胞株中表達。NPY（神經肽Y）屬于神經肽家族，是中樞神經系統分布最豐富的神經遞質及血管收縮素，與G蛋白偶聯受體結合參與細胞生長、粘附及血管生成等。本產品檢測SDC2、NPY、、4種基因的甲基化狀態可以通過的特異擴增而被檢測到。研究發現，在大腸癌患者中，SDC2、NPY、FGF5、4種基因呈高甲基化狀態。【檢驗原理】本產品包括以下兩個步驟：步驟I，用試劑盒I將提取的基因組DNA進行亞硫酸氫鹽轉化，未發生甲基化的胞嘧啶被轉化為尿嘧啶，而甲基化的胞嘧啶不變。步驟III中亞硫酸氫鹽轉化后的（Bis-DNA）用試劑盒II進行多重熒光定量PCR中甲基化特異性引物探針能與甲基化目的基因CpG序列特異性結合，可以在PCR反應中專一地檢測出甲基化CpGGAPDHPCR陽性對照品。【主要組成成分】試劑盒：亞硫酸氫鹽轉化試劑盒（離心柱型）體積/數量組分主要成分20人份50人份1.轉化液亞硫酸氫鈉2管5管2.緩沖液NaOH520L1.3mL3.結合液異硫氰酸胍8mL20mL4.漂洗液純化水2.4mL6mL5.脫磺液NaOH4mL10mL6.洗脫液、600L1.5mL7.吸附柱硅膠膜20個50個8.收集管/20個50個試劑盒：熒光PCR擴增試劑盒體積試劑組分主要成分20人份50人份1.PCRMIXdNTP、10×PCR、DNA聚合酶40010002.引物探針混合液ISDC2基因/NPY基因/內標基因的引物和探針1002503.引物探針混合液II基因/基因/內標基因的引物和探針1002504.陰性對照品正常人白細胞和1×TE60L100L5.陽性對照品腸癌細胞株和1×TE60L100L注：1、不同批號的試劑盒中各組分不應互換使用。2柱型/糞便）》（備案號：皖蕪械備20220022號，貨號：）提取糞便脫落細胞樣本DNA。3、需要自備的試劑及耗材無水乙醇（分析純，濃度高于99.5%）●1.5mL、2mL收集管帶濾芯槍頭，包括100L、200L、1mL規格八聯管【儲存條件及有效期】1.試劑盒I置于15℃~25℃儲存，試劑盒II置于℃±5℃儲存，有效期為6個月。2.試劑盒II開封后在℃～℃24小時，避免反復凍融5次以上。3.試劑盒I常溫運輸；試劑盒II采用泡沫箱加干冰密封運輸、運輸時間不超過4天。4.生產日期及有效期至詳見產品標簽。【適用儀器】7500。【樣本要求】采樣方法：1、取樣前在病例信息采集卡上填寫個人信息。2、采集樣本最好為晨便。如果無晨便，亦可用其他時間段的糞便，糞便取樣量在1g~15g。3、擰開50mL照采集說明指引方法裝入糞便樣本保存管內，避免大便與小便混合。4、將糞便樣本裝入50mL離心管中，按要求使液面升到約35mL處，即采樣成功。注意事項：1、接便時避免尿液、紙巾、污水等非大便樣本混入糞便樣品中。2、完成取樣后確保擰緊采集管蓋子，以防止外泄。3、避免在肛腸疾病出血期取樣；女性避免在生理期間取樣。4、采樣前1個月內有服用化療藥物的受試者不宜采樣。5、避免采集水樣便或痢疾樣糞便樣本。保存條件：常溫保存不超過24小時；-20℃±5℃冰箱可以保存3-70℃及以下冰箱可以保存12個月。【檢驗方法】1.核酸提取使用安徽達健醫學科技有限公司生產的《核酸提取或純化試劑（離心柱型/糞便）》（備案號：皖蕪械備20220022號）操作流程見試劑盒說明書，簡要步驟如下：1.1糞便樣本使用混勻儀進行混勻后，4,200rpm離心30min，取上清液為糞便脫落細胞懸液；1.2取1mL100μL37℃消化20min4000rpm離心10min取上清；1.3取1mL上清轉移至新的離心管，加入500μL裂解液、60L蛋白酶K，震蕩混勻，70℃裂解40min；1.4加入500μl異丙醇，充分震蕩混勻后冰浴靜置10min。1.512000rpm離心1min，取上清液加入到吸附柱中，分兩次將上清液加入過濾柱吸附離心過柱。1.612000rpm離心1-2min800μl洗滌液I12000rpm離心1min重復一次。1.7加入800μl洗滌液II，12000rpm離心1min，更換外套管。重復一次。1.812000rpm室溫離心2min，將吸附柱放入1.5ml無菌離心管中。1.9開蓋，在抽風柜晾干5min，以徹底晾干吸附材料中殘余的漂洗液。1.10加入60μl的洗脫液，室溫靜置5-10min，12000rpm離心3min，收集。注：糞便脫落細胞在-20±5℃儲存應不超過30天。2.工作液的制備（在試劑準備區進行）2.120測試漂洗液的制備將9.6mL5時間，簽名并在已加入無水乙醇的方塊內標記“√”。2.250測試漂洗液的制備將24mL5時間，簽名并在已加入無水乙醇的方塊內標記“√”。2.3轉化液的配制首先將轉化液離心30s，然后添加750L純化水和210L緩沖液到轉化液中，室溫下渦旋振蕩10min，使其充分溶解。制備好的轉化液對光很敏感，所以盡量減少在光下的暴露，一管轉化液為10測試用量，轉化液應當在制備后立刻使用，在-20℃±5℃可保存一周。冷凍保存后的轉化液，使用前常溫下充分溶解振蕩離心后使用。3.亞硫酸氫鹽轉化（在樣本處理區進行）3.1預先打開金屬浴，37℃恒溫。3.2室溫下解凍并混勻陽性對照品、陰性對照品和待測糞便樣本。各取15μL陽性對照品、陰性對照品和45μL待測糞便樣本（總量建議不高于2）于新的1.5mL離心管中。3.3每管加入5μL緩沖液于步驟中的1.5mL50μL純化水），渦旋混勻樣本，短暫離心。3.4將3.3步驟樣本置于金屬浴℃恒溫孵育15min。3.5孵育完成后，向每個樣本中加入100μL預先制備的轉化液，混勻并短暫離心。3.6金屬浴℃避光孵育12~16小時。3.7樣本置于冰上（0~4℃）孵育10min。3.8將吸附柱置于收集管中，向吸附柱中加入400μL結合液。3.9將步驟3.7中的樣本加入吸附柱中（含有結合液），蓋緊管蓋上下顛倒混勻數次。3.10全速（14000rpm）離心30s，棄廢液。3.11向吸附柱中加入100μL漂洗液，全速離心30s，棄廢液。3.12向吸附柱中加入200μL脫磺液，室溫（20℃～℃）孵育，之后全速離心30s，棄廢液。3.13向吸附柱中加入漂洗液，全速離心30s。重復加入漂洗液，全速離心30s，棄廢液及收集管。3.14將吸附柱放入無菌離心管中，向吸附膜的中間部位懸空滴加30μL洗脫液，洗脫轉化，全速離心1min，收集Bis-DNA。3.15獲取的Bis-DNA應立即用于后續實驗，或者-20±5℃保存不超過3天。4.PCR反應設置4.1PCR擴增試劑準備（在試劑準備區進行）從冰箱中取出試劑盒II，室溫下解凍，待完全融化，充分混勻后離心備用。按照表1配制PCR反應液1和2（每次反應均需要設置陽性對照品和陰性對照品）。表1：PCR反應液PCR反應液1PCR反應液2試劑成分用量/檢測次（μL）試劑成分用量/檢測次（μL）PCRMIX10PCRMIX10引物探針混合液I5引物探針混合液II5總量/測試15總量/測試15各PCR反應液充分混勻后，按每管15體積分裝于八聯管中，并做好標記后轉移至樣本處理區。4.2加樣（在樣本處理區進行）取5μLBis-DNA，分別加入到分裝好的PCR短暫離心，將管壁液體離心至管底。5.PCR擴增（在擴增檢測區進行）5.1將PCR八聯管放置在儀器樣本槽的相應位置，并記錄好擺放次序。5.2(SDC2/PDX1)QuencherDye1noneReporter(NPY)VIC，Quencher：none；Reporter(FGF5)：ROX，Dye3：none；Reporter(GAPDH)：CY5，Quencher：nonePassiveReference：none。5.3對應檢測孔的設定：在擴增反應開始前，將待檢樣本和質控品設定為“Unknown”。5.4按表2設置PCR表2PCR反應程序熒光程序溫度（℃）時間循環數熒光信號收集第一步955min1否第二步9515s否206630s否第三步9510s否405831s是【陽性判斷值】使用人SDC2NPYPCRNPY、4P值）計算公式分析靶標基因檢測結果CtPCut-off法進行計算，Cut-值為5.00時診斷效能最優。即樣本檢測結果P值≥5.00時，樣本檢測結果為陽性；樣本檢測結果P值＜5.00時，樣本檢測結果為陰性。P值計算公式=11.11-0.0302*FGF5Ct值-0.0427*NPYCt值-0.0811*PDX1Ct值-0.0571*SDC2Ct值【檢測結果的解釋】1.閾值設定件中讀取Ct值。若基因無擴增時，Ct值定為40。2.試劑盒有效性判定若試劑盒對照品滿足表3中所列標準，并且待檢樣本隨同陰性和陽性對照在同一個PCR反應中測定，則該PCR反應被視為有效。表3：試劑盒有效性判定對照品檢測結果目的基因的Ct值GAPDH的Ct值陽性對照品擴增曲線呈S型，Ct值≤25擴增曲線呈S型，Ct值≤25；或者無擴增曲線陰性對照品無擴增曲線或擴增曲線Ct值>25擴增曲線呈S型，Ct值≤253.樣本有效性判定若內標基因Ct值≤25，且擴增曲線呈S型，則可繼續分析。若內標基因Ct值>25或無擴增曲線，但目的基因Ct值≤20，則可繼續分析（可能由于目的基因擴增對內標基因擴增產生抑制）；若內標基因Ct值>25或無擴增曲線，而目的基因無擴增或有擴增但Ct值＞20，則無法繼續分析，需重復檢測。4.樣本檢測結果判定使用P值計算公式分析靶標基因檢測結果Ct值，獲得樣本檢測結果的P值：(1)樣本檢測結果P值≥5.00時，樣本檢測結果為陽性；(2)樣本檢測結果P值＜5.00時，樣本檢測結果為陰性。【檢測方法的局限性】1.本產品僅能檢測使用安徽達健醫學科技有限公司生產的一次性使用糞便采集器收集的糞便樣本。2.本產品兩組基因檢測必須聯合使用，以確保結果有效。3.該產品的使用者應該是接受過PCR反應技術訓練的技術操作者。4.由于大腸癌檢測依賴于樣本中腫瘤結果，導致假陰性的檢測結果。5.全結腸鏡進一步檢查確診。【產品性能指標】1.產品的性能指標1.1陽性符合率8份企業陽性參考品（CRC-P1～CRC-P8）陽性符合率（）為8/8。1.2陰性符合率3份企業陰性參考品（CRC-N1～CRC-N3）陰性符合率（-/-）為3/3，內參GAPDH基因擴增曲線正常。1.3最低檢出限1.3.1檢出限參考品（CRC-L1～CRC-L8）結果均為陽性；1.3.2使用臨床陰性糞便樣本為基質，添加不同比例的人甲基化全基因組，進行最低檢出限的確認；對臨床果表明：試劑盒可在10ng/μL基因組背景下檢測出不低于水平的基因甲基化。1.4精密度1.4.1檢測1份企業陰性精密度參考品，10次重復，同時內參GAPDH擴增曲線正常，結果全部為陰性。1.4.2檢測1份企業弱陽性精密度參考品，10次重復，，結果全部為陽性。1.4.3檢測1份企業中陽性精密度參考品，10次重復，結果全部為陽性。計算所測得SDC2、NPY、、4基因Ct值的變異系數（CV），均應不高于5%。1.4.4使用精密度參考品分別對三批試劑盒在ABI7500熒光儀上由兩位實驗人員在不同的實驗室進行連續20靶標基因Ct值的變異系數（CV）小于5%。2.其他干擾實驗干擾實驗顯示，糞便樣本中含有以下干擾物：膽紅素（0.20mg/mL）、膽固醇（5mg/mL），食物殘渣中動物DNA（500ng/ml物DNA（500ng/ml10μl/ml10.65mg/ml2.56mg/ml0.14mg/ml6.84mg/ml75mg/ml7.25mg/ml瘡24.75mg/ml75g/ml2.82mg/ml20.5mg/ml鹽酸左氧氟沙星（0.15mg/ml）、西咪替丁（2mg/ml）以及腫瘤治療藥物去氧氟尿苷片（3g/ml）貝伐珠單抗（2.5mg/ml7.5μg/ml9.23mg/ml取樣前1天應注意勿服用藥物黃連素。3.交叉反應本產品檢測轉化前的糞便樣本、其他甲基化基因陽性的糞便樣本、常見腸道微生物DNADNA、植物癌、膽囊癌）均未檢測出交叉反應。4.準確性收集56SDC2基因的陰性符合率為96.30%100%NPY基因的陰性符合率為96.43%100%PDX1基因的陰性符合率為96.43%、陽性符合率為100%FGF5基因的陰性符合率和陽性符合率均為100%。5.臨床有效性在31447直腸癌患者臨床靈敏度為91.17%、非結直腸癌或癌前病變患者臨床特異性