Mar4,2014地貧基礎知識與地貧篩查伯樂公司臨床診斷部鄭建樹當前第1頁\共有99頁\編于星期二\20點地中海貧血歷史回顧1925年，意大利醫生Cooley首次報道5例具有嚴重貧血、脾臟腫大、異常的骨骼病變以及外周血出現大量幼稚紅細胞的小兒病例,由于所有病人均來自地中海之濱的意大利和希臘，Cooley將其稱之為“地中海貧血”（mediterraneananemia）。1932年，Whipple和Brasford借用希臘語thalassa（,意為“海洋”）將地中海貧血定義為海洋性貧血（Thalassemia）。當前第2頁\共有99頁\編于星期二\20點地中海貧血歷史回顧1940年，美國血液學家Wintrobe報道地中海貧血患者的家族中存在輕型地中海貧血的患者，指出地中海貧血系常染色體不完全性顯性遺傳，有純合子與雜合子之分。在我國，長期以來多數學者一直將海洋性貧血的原文Thalassemia譯為“地中海貧血”.當前第3頁\共有99頁\編于星期二\20點地貧地域分布地中海沿岸國家：如意大利、希臘、塞浦路斯。非洲：主要在北非國家，阿爾及利亞及利比亞北部、埃及、蘇丹和索馬里北部亞洲：中東國家（沙特阿拉伯、伊朗、伊拉克）、中國、東南亞各國（印度、巴基斯坦、泰國、印度尼西亞、馬來西亞等）。中國：長江以南省份，尤其以廣東、廣西、海南、四川、云南、臺灣等省份為多發。當前第4頁\共有99頁\編于星期二\20點中國南方地中海貧血人群攜帶率地區Carrierrate(%)

a

地貧β地貧廣西17.556.43廣東8.532.54四川1.922.18臺灣4.21.1香港5.023.41Xu,etal.JClinPathol2004.

Xiongetal.ClinGenet.2010.當前第5頁\共有99頁\編于星期二\20點廣東省不同地區和地貧人群攜帶率地區

Carrierrate(%)a

地貧β地貧廣州8.792.85珠海8.932.21湛江8.863.28韶關10.243.44汕頭5.610.96平均數8.532.54JournalofClinicalPathology,2004;57(5):517-22.

當前第6頁\共有99頁\編于星期二\20點廣西地區地中海貧血的流行病學調查地區Carrierrate(%)

a地貧

β地貧賀州19.557.36防城港15.635.8玉林14.386.23柳州13.166.1百色21.76.95南寧16.425.97平均數16.976.43當前第7頁\共有99頁\編于星期二\20點地中海貧血定義定義：地中海貧血是常染色體隱性遺傳性慢性溶血性貧血。本質特征：由于珠蛋白基因的缺失或點突變使血紅蛋白中的珠蛋白肽鏈有一種或幾種合成減少或不能合成(mRNA↓,但肽鏈結構正常)，導致血紅蛋白的組分改變，肽鏈失平衡，導致RBC壽命縮短及過早破壞所致的慢性溶貧。當前第8頁\共有99頁\編于星期二\20點Hb的結構和功能結構：

Hb=血紅素+珠蛋白血紅素=原卟啉+Fe++

珠蛋白=1對類肽鏈+1對β類肽鏈每一條珠蛋白肽鏈結合一個血紅素分子，構成一個血紅蛋白單體，血紅蛋白是由兩種（類和β類）共4個血紅蛋白單體構成的四聚體。只有由兩條類肽鏈和兩條β類鏈組成的四聚體才是最穩定的。功能：攜帶O2和CO2當前第9頁\共有99頁\編于星期二\20點Hb的種類人類及各種動物的Hb其血紅素部分都是相同的，不同的只是珠蛋白。：珠蛋白肽鏈可分為兩大類α類肽鏈——α和ζβ類肽鏈——β、γ、δ和ε以上6種肽鏈組成了6種Hb,在發育不同階段出現。當前第10頁\共有99頁\編于星期二\20點正常人血紅蛋白組成的演變

當前第11頁\共有99頁\編于星期二\20點主要血紅蛋白成分1、HbA：2β2，成人血紅蛋白，在成人及6歲以上兒童的紅細胞中占95%以上，在胎兒、新生兒紅細胞中約20%；2、HbF：2γ2，胎兒血紅蛋白，出生前及新生兒期占80%，出生6個月后降至不足1%；3、HbA2：

2δ2，約占2.5%；β地貧病人中含量上升，地貧、缺鐵性貧血等病人中含量降低。當前第12頁\共有99頁\編于星期二\20點血涂片比較正常血象地貧血象地貧血象：紅細胞著色不足、異形紅細胞和骨髓成紅血細胞增多癥當前第13頁\共有99頁\編于星期二\20點

地中海貧血的病理生理一種或多種珠蛋白基因缺陷一種或多種珠蛋白肽鏈合成減少或缺如其他類型珠蛋白肽鏈相對過多珠蛋白肽鏈合成間的平衡異常正常Hb的生物合成降低--貧血過剩的珠蛋白肽鏈沉積于RBC，RBC被破壞–

無效造血和溶血骨髓造血代償性增強，腸道鐵吸收增加，輸血--繼發性鐵負荷增多癥當前第14頁\共有99頁\編于星期二\20點地中海貧血分類1、α肽鏈合成障礙—α地貧2、β肽鏈合成障礙—β地貧3、復合型肽鏈合成障礙---

αβ地貧當前第15頁\共有99頁\編于星期二\20點-地中海貧血

定義：

α地貧是由于16號染色體上α珠蛋白基因缺失（1~4個）或點突變，導致不同程度肽鏈合成不平衡,從而使血紅蛋白生成障礙，并導致無效造血和紅細胞破壞而產生溶血性貧血。分型：根據珠蛋白基因缺失程度的不同，分成4種類型：

HbBart’s胎兒水腫綜合征

HbH病標準型地中海貧血靜止型地中海貧血當前第16頁\共有99頁\編于星期二\20點分子生物學特征

珠蛋白基因位于16號染色體上。每條16號染色體上有2個珠蛋白基因，一對16號染色體上有4個珠蛋白基因。0地貧：一條染色體上2個基因都缺失。+地貧：一條染色體上只1個基因缺失，另1個正常。當前第17頁\共有99頁\編于星期二\20點-地中海貧血基因型鏈基因示意基因型基因型描述疾病狀態

/0/0地中海貧血純合子HbBart’s胎兒水腫

/

0地貧/+地貧雜合子HbH病

/0地中海貧血雜合子標準型地中海貧血

/+地中海貧血純合子標準型地中海貧血

/+

地中海貧血雜合子

靜止型地中海貧血

/正常無

當前第18頁\共有99頁\編于星期二\20點-地貧病理生理珠蛋白基因缺陷珠蛋白肽鏈合成減少或缺如胎兒期：肽鏈相對過多HbBarts(4)與非肽鏈合成之間的平衡異常，過剩的非肽鏈形成異常Hb正常Hb生物合成降低HbH沉積于RBC形成包涵體溶血生后：鏈相對過多HbH（4）宮內缺氧、水腫、死胎造血代償性增強，肝脾腫大、骨骼病變

貧血腸道鐵吸收增加，輸血--繼發性鐵負荷增多癥當前第19頁\共有99頁\編于星期二\20點靜止型α地貧基因（α地貧2）發病機理

只缺乏1個肽鏈基因,鏈合成輕微受影響。

基因型：αα/-α、αα/ααT缺失一個基因，包括－

3.7缺失和－

4.2缺失或1個α基因突變臨床表現無任何癥狀，與正常人無異。患者無任何癥狀，血象正常，MCV、MCH正常紅細胞內無包涵體出生時臍血HbBart’s可達1-2%，但3個月后消失檢測紅細胞內/鏈合成率亦難以將其與正常人區分可通過DNA檢測其基因型當前第20頁\共有99頁\編于星期二\20點輕型α地貧（α地貧1）發病機理2個肽鏈基因缺失（0地中海貧血雜合子，+地中海貧血純合子），鏈合成仍有相當數量。基因型：--/，為東南亞型,以－－SEA表示或α-/α-、ααT/ααT

、α-/ααT臨床表現臨床無癥狀或癥狀輕微，無或僅有輕度貧血和血常規改變，易誤診為低色素性營養性貧血。實驗室檢查Hb：降低但常在100g/L以上

MCV、MCH：降低紅細胞計數：相對增多臍血Bart’s含量（0.034~0.14))，生后6月時完全消失。

HbA2和HbF正常或稍低

當前第21頁\共有99頁\編于星期二\20點中間型a地貧（HbH病）發病機理3個肽鏈基因缺失或缺陷，僅有少量鏈合成。胎兒期少量鏈與鏈形成HbF(22)，故能存活至出生。出生后隨年齡增長，鏈合成迅速增加，由于鏈合成不足，僅有少量的HbA(22),過剩的鏈聚合成HbH(4).HbH與氧親和力高，失去運氧功能，導致組織缺氧。HbH結構不穩定，易變性形成包涵體，紅細胞變僵硬，變形能力差，不能通過脾竇，致紅細胞壽命縮短，發生溶血性貧血。當前第22頁\共有99頁\編于星期二\20點中間型a地貧：HbH病臨床表現出生時一般無明顯癥狀，肝脾不腫大，但紅細胞形態異常.多在嬰兒期以后出現溶血性貧血，一般為輕~中度貧血，肝、脾腫大，以脾大為主。可出現黃疸，膽結石。繼發感染或服用氧化性藥物可使溶血性貧血加重。年齡較大患者可以出現類似

-地貧的特殊面容。當前第23頁\共有99頁\編于星期二\20點中間型a地貧：HbH病實驗室檢查血象：Hb：低于100g/LMCV、MCH：降低,小細胞低色素貧血，網織紅細胞升高骨髓象：增生性貧血骨髓象紅細胞滲透脆性降低Heinz小體（變性珠蛋白小體）（+）異丙醇試驗（+）。Hb電泳：有HbH區帶初生：HbBart’s約25%，HbH很少隨年齡增長：HbBart’s，HbH。年長兒：HbBart’s微量，HbH0.024~0.44當前第24頁\共有99頁\編于星期二\20點重型α地貧（HbBart’s胎兒水腫綜合征）發病機理缺失4個肽鏈基因，鏈完全不能合成。胎兒期合成的鏈因缺乏鏈，不能形成HbF(22)，大量的鏈聚合成HbBart’s(4)。HbBart’s與氧親和力高，造成胎兒組織嚴重缺氧。HbBart’s結構不穩定，以致紅細胞壽命縮短，發生溶血性貧血，胎兒發育不良。當前第25頁\共有99頁\編于星期二\20點重型α地貧臨床表現胎兒在宮內死亡或早產后數小時內死亡。嚴重貧血，胎兒蒼白、皮膚剝脫、可有黃疸，肝、脾腫大。心臟擴大，水腫、胸腔、心包、腹腔積液、巨大胎盤。低體重、發育不良。孕婦可有妊娠高血壓綜合征實驗室檢查嚴重貧血，小細胞低色素貧血，有核紅細胞和網織紅細胞明顯升高紅細胞滲透脆性明顯降低Hb電泳：80%--90%為HbBart’s（γ4），不等量的HbPotland(22)(10-29%)及微量HbH（β4），沒有HbA（2β2）、HbA2(22）及HbF（2γ2）當前第26頁\共有99頁\編于星期二\20點HbBart`s含量HbBart’s檢出的百分率與地貧基因型的關系

HbBart’s%基因型

2~3地貧24~20地貧1雜合子或地貧2純合子20~25HbH病50~90HbBart’s水腫胎當前第27頁\共有99頁\編于星期二\20點α地貧遺傳風險一、夫婦雙方是靜止型α地貧，每一次懷孕，有25%的機率是正常，50%的機率是無癥狀基因攜帶者，25%的機率是α地貧基因攜帶者當前第28頁\共有99頁\編于星期二\20點α地貧遺傳風險二、夫婦為輕型α地貧，但是基因缺陷在不同染色體上,每一次懷孕，100%機率是α地貧基因攜帶者當前第29頁\共有99頁\編于星期二\20點α地貧遺傳風險三、夫婦為輕型α地貧，基因缺陷在同一條染色體上,每一次懷孕，有25%的機率是正常，50%的機率是α地貧基因攜帶者,25%是重型α地貧當前第30頁\共有99頁\編于星期二\20點α地貧遺傳風險四、夫婦一方為輕型α地貧，基因缺陷而且在同一條染色體上，而另一方為靜止型地貧,每一次懷孕，有25%的機率是正常，50%的機率是無癥狀的基因攜帶者,25%是HbH病,當前第31頁\共有99頁\編于星期二\20點α地貧遺傳風險五、夫婦一方為靜止型α地貧，而另一方為HbH病,每一次懷孕，有25%的機率是無癥狀的基因攜帶者,25%是HbH患者，50%的機率是基因攜帶者

當前第32頁\共有99頁\編于星期二\20點α地貧遺傳風險六、夫婦一方為輕型α地貧，但是基因缺陷在同一條染色體上，而另一方是HbH病,每一次懷孕，有25%的機率是無癥狀的基因攜帶者,25%的機率是基因攜帶者，25%的機率是HbH病，25%是重型α地貧當前第33頁\共有99頁\編于星期二\20點α地貧遺傳風險七、夫婦一方為輕型α地貧，基因缺陷在不同的染色體上，而另一方為HbH病，每一次懷孕，有50%的機率是地貧基因攜帶者,50%的機率是HbH病當前第34頁\共有99頁\編于星期二\20點地中海貧血

β地貧主要是由于11號染色體上β珠蛋白結構基因突變，導致β珠蛋白鏈合成障礙。1、主要分兩種類型，即β0地貧和β+地貧。

β0地貧—β鏈完全不能合成，

β+地貧—β鏈合成量減少所致。2、一些大片斷基因缺失致：δβ地貧、遺傳性持續性胎兒血紅蛋白綜合癥（HPFH）。當前第35頁\共有99頁\編于星期二\20點地中海貧血基因型基因的突變已發現有100多種，國內已報道28種，常見有6種：41-42（-TCTT）：占45%，缺失4個鹼基，造成框架突變，使終止密碼提前出現，幾乎無-鏈合成（0地貧）IVS-II654（CT）：約占24%，內含子II中654位點CT鹼基替換，導致潛在拼接位點活化，mRNA加工異常，不能翻譯成正常的鏈（0地貧）。17（AT）：約占14%，導致終止密碼TAG形成，鏈不能合成（0地貧）。當前第36頁\共有99頁\編于星期二\20點地中海貧血基因型TATA盒-28（AT）：約9%，突變位于起始位點上游的啟動子TATA盒，使轉錄效率降低，mRNA生成量減少（β+地貧）。71-72（+A）：約2%，在71和72位插入1個鹼基A，造成閱讀框架改變，mRNA不能翻譯為正常鏈（0地貧）。26（GA）：占2%，鏈26密碼子由G變A（HbE），影響了mRNA加工，EmRNA合成減少，鏈減少（β+地貧）。當前第37頁\共有99頁\編于星期二\20點地中海貧血基因型基因型基因型描述疾病0/00地貧純合子重型地貧0/+0地貧和+地貧雙重雜合子重型地貧+/++地貧純合子中間型地貧0/0地貧雜合子輕型地貧+/+地貧雜合子輕型地貧/正常正常人當前第38頁\共有99頁\編于星期二\20點地貧發病機理珠蛋白基因缺陷，鏈合成減少或不能合成，、鏈合成代償性增加，HbF(22)、HbA2（22)升高。過剩的鏈在紅細胞內沉淀形成包涵體，使幼紅細胞膜受損而在骨髓內破壞，產生無效紅細胞生成（原位溶血）。含有包涵體的紅細胞進入血液循環，在脾臟破壞,產生溶血性貧血。溶血和貧血引起骨髓造血和髓外造血亢進，骨骼改變和肝、脾腫大。溶血和反復輸血導致含鐵血黃素沉著癥。當前第39頁\共有99頁\編于星期二\20點

-地貧病理生理

-珠蛋白基因缺陷珠蛋白肽鏈合成減少或缺如HbF比例顯著增高,HbA2增高珠蛋白肽鏈合成間的平衡異常正常HbA生物合成降低溶血(原位、外周）多余的鏈形成包涵體沉積于RBC缺氧骨髓造血和髓外造血代償性增強--骨骼病變、肝脾腫大

貧血腸道鐵吸收增加，反復輸血--繼發性鐵負荷增多癥當前第40頁\共有99頁\編于星期二\20點輕型β-地中海貧血（

thalassemiaminor）0地貧雜合子（0/）、+地貧雜合子（+/）臨床表現無癥狀或僅有輕度貧血，可有輕度脾大。多在家系調查時發現。實驗室檢查紅細胞形態正常或輕度改變，Hb：降低，但在100g/L以上，MCV、MCH：降低紅細胞計數：相對增多，紅細胞脆性正常或降低HbA2升高（0.04~0.09)，HbF（0.01~0.05）。預后壽命與正常人相似。當前第41頁\共有99頁\編于星期二\20點

中間型地中海貧血（Thalassemiaintermedia)

+地貧純合子臨床表現介于輕型和重型之間，中度貧血，肝、脾輕~中度腫大，可有黃疸，骨骼改變輕。實驗室檢查血象：小細胞低色素貧血。Hb：降低，在60-100g/L之間。MCV，MCH：降低骨髓象：增生性貧血骨髓象紅細胞脆性降低

HbF升高（0.4~0.8)，HbA2正常或升高預后可能需要輸血，病人可活至成年甚至老年。當前第42頁\共有99頁\編于星期二\20點重型地中海貧血（

Thalassemiamajor)β0純合子或β0β+雙重雜合子。臨床表現：出生時正常，半歲左右（3~12月）發病慢性進行性貧血：蒼白、輕度黃染、生長發育遲緩。肝脾進行性腫大。特殊外貌：1歲后顱骨改變明顯，表示為頭顱變大，額部隆起，顴高、鼻梁塌陷，兩眼距增寬，形成地中海貧血特殊面容。當前第43頁\共有99頁\編于星期二\20點重型地中海貧血（

Thalassemiamajor)實驗室檢查血象：Hb<60g/L，MCV，MCH：降低，小細胞低色素貧血，易見靶形紅細胞骨髓象：增生性貧血骨髓象紅細胞脆性降低HbF升高（0.8~1），如是β地貧復合血紅蛋白E則HbA2增多預后需要終生輸血，如不治療，多于5歲前死亡。當前第44頁\共有99頁\編于星期二\20點β地貧遺傳風險一、夫婦一方是輕型β地貧，一方正常，50%生出輕型β地貧的孩子，50%是正常。當前第45頁\共有99頁\編于星期二\20點β地貧遺傳風險二、夫婦雙方都是輕型β地貧，25%機率生出正常的孩子，50%生出輕型β地貧的孩子，25%生出重型β地貧孩子。當前第46頁\共有99頁\編于星期二\20點β地貧遺傳風險三、夫婦一方是HbE另一方是輕型，25%機率生出正常的孩子，25%生出輕型β地貧的孩子，25%是HbE，25%生出同時有β地貧和HbE孩子。

當前第47頁\共有99頁\編于星期二\20點地中海貧血的治療一般性治療輕型者一般不需治療可適當補充葉酸，VitC等忌用鐵劑（常誤診為缺鐵性貧血）避免用氧化性藥物當前第48頁\共有99頁\編于星期二\20點地中海貧血的治療常規治療輸血除鐵當前第49頁\共有99頁\編于星期二\20點其他的治療方法－脾切除和脾栓塞消除和減少脾組織，減少紅細胞的髓外破壞，達到緩解癥狀的目的適用于血紅蛋白H病，重型地中海貧血合并脾臟功能亢進當前第50頁\共有99頁\編于星期二\20點預防措施加大宣傳力度，讓準父母們意識到地貧的危害性。全民教育，有效篩查策略，嚴格產前檢查要更多的人參與進行宣傳教育做好產前檢查如果父母雙方均患小細胞低色素性貧血，立即做地貧基因檢查。如果父母雙方被證實為地貧同種基因攜帶者，應及早進行產前診斷，如果查出為地貧純合子，立即中止妊娠。任重而道遠！當前第51頁\共有99頁\編于星期二\20點地中海貧血的篩查地中海貧血和異常血紅蛋白癥很難治愈長期、昂貴的治療家庭沉重的精神負擔預防是最好的措施篩查地貧攜帶者成為關鍵當前第52頁\共有99頁\編于星期二\20點按國家分類：I類：地中海國家很早就建立了完善的預防體系80-100%得到有效的預防提供高質量的治療當前第53頁\共有99頁\編于星期二\20點成功的例子:塞浦路斯1974年:每年出生重型B-地貧患兒大約53個1981年:當年出生重型B-地貧患兒10個(當年出生嬰兒10780個)從1986~現在每年平均只有1個重型B-地貧患兒出生Lancet1990,336:1119-1120當前第54頁\共有99頁\編于星期二\20點按國家分類：II類：發達的工業化國家(歐洲,美國，澳大利亞)人口遷移使地貧發病率上升能提供有效的控制手段由于不同的文化背景，部分移民很難接受地貧篩查當前第55頁\共有99頁\編于星期二\20點按國家分類：III類：亞洲國家發病率高不能提供有效的控制手段困境：經濟困難,優先解決的醫療問題(降低新生兒死亡率,控制傳染性疾病),宗教/文化的束縛。當前第56頁\共有99頁\編于星期二\20點中國的現狀：世界上地貧人口最多的國家參加地貧篩查的人數很少

婚育男女對篩查沒有正確的認識公眾的教育/意識獨生子女政策使優生更顯重要當前第57頁\共有99頁\編于星期二\20點地貧篩查目的查出重型、中間型、輕型β地貧和靜止型β地貧基因攜帶者查出部分標準型和靜止型α地貧，中間型α地貧（血紅蛋白H病）查出其它異常血紅蛋白當前第58頁\共有99頁\編于星期二\20點當前第59頁\共有99頁\編于星期二\20點常見的篩查方法：低

高電泳(ELP)Bio-RadHPLC紅細胞脆性實驗血常規分析當前第60頁\共有99頁\編于星期二\20點血常規指標：地中海貧血的重要特征之一是小細胞低色素性貧血，如MCV<80fl，MCH<27Pg，則可疑為地中海貧血患者或基因攜帶者。國際地貧協會認為最廣泛使用的地貧判斷值：MCV<80fl，MCH<27pg即MCV<80fL、MCH<27pg為地貧表型陽性（廣西標準為MCV<82fL）β地貧、中間型α地貧(血紅蛋白H病)、輕型α地貧基因攜帶者均為地貧表型陽性當前第61頁\共有99頁\編于星期二\20點MCV篩查地貧準確嗎？靜止型α地貧基因攜帶者（α地貧2），MCV，MCH為正常表型。缺鐵性貧血也會出現MCV偏低情況，所以MCV偏低只能表示患者存在小細胞低色素，須同時測定血清鐵和鐵蛋白，以排除缺鐵性貧血。

所以MCV不是一個明確的標準，只能是初步篩選當前第62頁\共有99頁\編于星期二\20點紅細胞脆性試驗原理：其原理是地中海貧血紅細胞膜表面粗糙、凹陷、折疊和漿膜擴展，膜與內容物之比增大，對滲透溶解的抗性增加，在0．32％(或0．36％)NaC1中溶解度降低(脆性降低)。而正常RBC的抗性小，溶解度大（脆性增高）正常范圍：紅色澄清臨床意義：地貧患者為混濁陽性結果局限：缺鐵性貧血也呈陽性；HbE和HbS呈弱陽性紅細胞脆性試驗在基層單位可用，但在有血細胞分析儀的單位就不應該單用于地貧篩查，此項檢測誤漏診率高，且英美地貧篩查指南中均沒有此項目。當前第63頁\共有99頁\編于星期二\20點電泳法：原理:根據不同Hb自帶電荷的不同、分子量大小的不同、結構和等電點的不同,在一定pH值的緩沖液中朝特定方向泳動，在一定的電壓下經一定時間，因遷移速率不同可分離出各自的區帶。主要類別:醋酸纖維素膜電泳法瓊脂凝膠電泳法HbA2含量測定:洗脫法掃描法當前第64頁\共有99頁\編于星期二\20點全自動Hb電泳儀目前國內使用的主要有美國的Helena電泳儀、掃描儀和分析系統（也有毛細管電泳）。法國的Sebia電泳儀、掃描儀和分析系統。（也有毛細管電泳）國產的金桑特電泳儀、掃描儀和分析系統。1.通過掃描定量給出HbA、HbA2和HbF值。2.異常區帶通過查表確定。當前第65頁\共有99頁\編于星期二\20點電泳用于篩查的不足之處：

主觀血紅蛋白條帶的錯判樣品處理依賴于檢驗人員的經驗：人工洗滌紅細胞、溶血、抽提、離心，工作量大自動化程度低耗費人力/時間很難做質量控制，不能保證系統穩定性進樣方式：手工加樣，通常要成批做電泳，不能使用原始管重復性差，精確性差醋纖膜血紅蛋白電泳（20%假陽性）微柱法（20%假陽性）涉及到安全因素:有害物質的處理通風設備RoyalCollegeofPathologistsofAustralasia,1997InformationprovidedbyProf.Elizabeth

George當前第66頁\共有99頁\編于星期二\20點CAP的立場：從2004年起，堿性電泳和等電聚焦電泳均不能用于HbA2的定量測定。精確度差：CV>35%變異系數CV比別的方法高2到6倍。篩查B—地貧需要一個準確和精確的方法測定HbA2,基于這個目的，HPLC是可信賴的方法。CAPSurveys2003,HG-CHemoglobinopathy,p.11當前第67頁\共有99頁\編于星期二\20點離子交換HPLC法原理原理：是利用能交換離子的材料為固定相來分離離子型化合物的方法。基于不同種類血紅蛋白理化性質的差異所導致不同血紅蛋白在相應色譜柱中保留時間不同，使各組分按順序被洗脫出來，根據冼脫時間進行血紅蛋白種類定性，以及特定組洗脫峰面積進行定量。當前第68頁\共有99頁\編于星期二\20點高效液相色譜法血紅蛋白分析操作靜脈血2ml，EDTA-K2抗凝經定標、質控，標本直接上機，通過電腦操作，便能實現紅細胞內Hb溶解釋放、梯度洗脫、定性、定量的全過程。當前第69頁\共有99頁\編于星期二\20點HPLC優點快速高效：6min樣品處理：自動化程度高，原始采血管直接上機，無需前處理，無需開蓋，無污染進樣方式：連續自動進樣，帶條碼閱讀器。單個樣本檢測檢測波長雙波長：415nm690nm，減少背景干擾分析檢測管路：1根分析柱，無系統誤差，重復性好儀器校正：每套試劑盒標配校正液，保證結果的準確性和重復性。每次只需做一個校正分離效果：自動準確定量A2、F及異常Hb質控：每批次做一次質控,保證儀器系統狀態穩定結果判讀：軟件自動判讀，客觀的結果，不需人工編輯圖譜方法權威性：世界地貧協會推薦，A2定量金標準HPLC特異性99%,靈敏度99.9%當前第70頁\共有99頁\編于星期二\20點結果可報告準則可報告范圍:HbA2:1–13%；HbF:1–40%HbA2

和HbF峰均出現如果HbA2

和HbF值小于可報告范圍:可報告為<1.0%校準應該通過：HbA2或HbF的反應因子需在0.7—1.3之間的范圍內。校準品HbA2的最佳保留時間是3.65±0.05

如變化幅度超過0.05分鐘，建議進行溫度調節。

若滯留時間變化幅度超過0.20分鐘，注意泵的流率和壓力指數。并向技術中心尋求支持可接受TotalArea總面積:100萬to300萬如果低于100萬，10ul樣本+1ml稀釋液如果高于300萬，5ul樣本+2ml稀釋液當前第71頁\共有99頁\編于星期二\20點結果判讀正常人范圍:說明書：HbA2:1.75–3.25%；HbF:<1%中國VariantII客戶：A2（2.5%~3.5%）;F（0~2.6%）?-Thal:HbA2:4.0–9.0%(雜合子)HbA2>10%則可能為HbEHbF:1–5%(雜合子)HbF:80–100%(純合子)血紅蛋白D和E也可與HbA2一同被洗脫。樣本中HbA2大于10%時應檢測是否有其它類型血紅蛋白干擾的可能。當前第72頁\共有99頁\編于星期二\20點各種Hb出峰時間、峰寬、范圍當前第73頁\共有99頁\編于星期二\20點總面積校準因子HbFHbA2校準報告圖當前第74頁\共有99頁\編于星期二\20點正常成人樣本當前第75頁\共有99頁\編于星期二\20點

?-地中海貧血（輕型）

當前第76頁\共有99頁\編于星期二\20點輕型-地貧(/,0/N)

HematologicalDataHb(g/dl)12.5MCV(fl)62.7MCH(pg)20.2MCHC(g/dl)32.3RDW(%)15.6HemoglobinTypingHbtypeA2AHbA2(E)5.4%HbF1.0%HbA82.3%當前第77頁\共有99頁\編于星期二\20點重型-地貧(/,0/0)HematologicalDataHb(g/dl)4.9MCV(fl)65.5MCH(pg)24.2MCHC(g/dl)26.3RDW(%)31.3HemoglobinTypingHbtypeA2FHbA2(E)4.5%HbF95.4%HbA0.2%當前第78頁\共有99頁\編于星期二\20點中間型-地貧(/,0/+)HbF55.4%HbA28.0%當前第79頁\共有99頁\編于星期二\20點靜止型-地貧

(-/,N/N)HematologicalDataHb(g/dl)11.8MCV(fl)77.3MCH(pg)27.3MCHC(g/dl)34.4RDW(%)12.6HemoglobinTypingHbtypeA2AHbA2(E)3.4%HbF0.7%HbA86.5%Normalhemoglobintype;Not-ruleout-Thalassemia2trait當前第80頁\共有99頁\編于星期二\20點HemoglobinTypingHbtypeA2AHbA22.6%HbF0.2%HbA87.9%HematologicalDataHb(g/dl)12.1MCV(fl)68.9MCH(pg)21.4MCHC(g/dl)31.1RDW(%)14.9標準型-地貧

(--/,N/N)Not-ruleout-Thalassemia1trait當前第81頁\共有99頁\編于星期二\20點缺失型HbH病(HbH出峰時間0.47分鐘，峰值13.5%。HbF出峰時間1.08分鐘，峰值0.3%。HbA出峰時間2.54分鐘，峰值81.9%。HbA2出峰時間3.60分鐘，峰值1.8%。)當前第82頁\共有99頁\編于星期二\20點HbH病(--/-,N/N)HemoglobinTypingHbtypeA2ABart’sHHbA21.6%HbF0.5%HbA91.8%HematologicalDataHb(g/dl)7.7MCV(fl)72.9MCH(pg)18.2MCHC(g/dl)25.0RDW(%)24.2Bart’sH當前第83頁\共有99頁\編于星期二\20點HemoglobinTypingHbtypeHbBart’sHbA2(E)-HbF-HbA-HbBart’s100HematologicalDataHb(g/dl)7.6MCV(fl)107.4MCH(pg)26.3MCHC(g/dl)24.5RDW(%)22.2HbBart’s胎兒水腫綜合征

(--/--,N/N)HbBart’s當前第84頁\共有99頁\編于星期二\20點HbCS雜合子

(CS/,N/N)HemoglobinTypingHbtypeA2AHbA22.6%HbF1.9%HbA85.9%HematologicalDataHb(g/dl)11.5MCV(fl)76.6MCH(pg)24.3MCHC(g/dl)31.7RDW(%)13.6Normalhemoglobintype;Not-ruleout-Thalassemia2trait當前第85頁\共有99頁\編于星期二\20點HbCS純合子

(CS/CS,N/N)HemoglobinTypingHbtypeCSA2AHbCS1.9%HbA20.7%HbF0.9%HbA88.7%HematologicalDataHb(g/dl)8.1MCV(fl)90.4MCH(pg)26.1MCHC(g/dl)28.8RDW(%)18.5Notrule-outHbCShomozygoteGenotyping當前第86頁\共有99頁\編于星期二\20點

HbCS復合HbH病

(HbH出峰時間0.47分鐘，峰值13.5%。HbF出峰時間1.12分鐘，峰值1.4%。HbA出峰時間2.48分鐘，峰值82.1%.HbA2出峰時間3.61分鐘，峰值0.9%。HbCS出峰時間5.03分鐘，峰值0.9%。)

當前第87頁\共有99頁\編于星期二\20點HbH-CS病

(--/CS,N/N)HemoglobinTypingHbtypeCSA2ABart’sHHbCS0.9%HbA20.9%HbF0.3%HbA90.3%HematologicalDataHb(g/dl)8.1MCV(fl)81.5MCH(pg)20.8MCHC(g/dl)25.6RDW(%)21.2當前第88頁\共有99頁\編于星期二\20點HbE雜合子

(/,E/N)HematologicalDataHb(g/dl)13.0MCV(fl)89.9MCH(pg)29.3MCHC(g/dl)32.6RDW(%)13.0HemoglobinTypingHbtypeEAHbA2(E)27.9%