實驗室生物安全

LaboratoryBiosafety4/8/20231目錄一、實驗室生物安全概念二、實驗室生物安全級別三、實驗室生物安全設(shè)備四、實驗室生物安全管理4/8/20232實驗室生物安全事件2003年以來，新加坡、臺灣和北京相繼發(fā)生實驗室人員SARS病毒感染傳播事件。4/8/20233職業(yè)HIV感染OccupationallyacquiredAIDScasesorHIVinfectionsreportedinCDCthrough1992

OccupationNo.(%)ofoccupationaltransmissions

Laboratorytechnician25(24.8)Nurse26(25.7)Physician13(12.8)Medicaltechnician/paramedic7(6.9)Dentist/dentaltechnician6(5.9)Healthaide/attendant6(5.9)Housekeeper/maintenanceworker6(5.9)Morguetechnician3(3.0)Technician/therapist3(3.0)Respiratorytherapist2(2.0)Surgicaltechnician2(2.0)OtherHCW2(2.0)Total100

AdaptedfromD.L.Sewell,Clinicalmicrobiologyreviews,1995,389-4054/8/20235實驗室生物安全事件布氏桿菌引起的實驗室感染（北京，杭州）腎病綜合癥出血熱的實驗室感染世界范圍內(nèi)共有126例感染。（自1985年）中國數(shù)次感染，導(dǎo)致曾經(jīng)一段時間的實驗動物荒。4/8/20236實驗室感染概況80%是不明原因的感染。20%感染的原因是明確的。80%是由工作人員操作失誤引起的；20%是由設(shè)備故障引起的。導(dǎo)致感染最多的4種實驗室事故溢出和潑灑針頭和注射器銳器、碎玻璃動物或動物體外寄生蟲的咬傷或抓傷4/8/20237Bioterrorismisterrorismbyintentionalreleaseordisseminationofbiologicalagents(bacteria,viruses,ortoxins);thesemaybeinanaturally-occurringorinahuman-modifiedform.Biologicalwarfare(BW),alsoknownasgermwarfare,istheuseofpathogens(bacteria,viruses,orotherdisease-causingagents)asbiologicalweapons(orbioweapons).4/8/20239實驗室生物危害實驗室生物危害：指在微生物和生物醫(yī)學(xué)實驗室研究過程中對人、環(huán)境、生態(tài)和社會造成的危害和對環(huán)境造成的污染。4/8/202310生物安全的概念實驗室生物安全概念：避免危險生物因子造成實驗室人員暴露，向?qū)嶒炇彝鈹U(kuò)散并導(dǎo)致危害的綜合措施。生物安全三個方面：

人類的健康安全；人類賴以生存的農(nóng)業(yè)生物安全；與人類生存有關(guān)的環(huán)境生物安全。生物安全涉及到多個學(xué)科和領(lǐng)域：預(yù)防醫(yī)學(xué)、環(huán)境保護(hù)、植物保護(hù)、野生動物保護(hù)、生態(tài)、農(nóng)藥、林業(yè)等。4/8/202311二、實驗室生物安全級別4/8/202313感染性微生物的危險度等級分類4/8/202314BSC：生物安全柜；GMT：微生物學(xué)操作技術(shù)規(guī)范。BSL-4BSL-3BSL-2BSL-14/8/202315一級生物安全防護(hù)實驗室

BSL-1

實驗室結(jié)構(gòu)和設(shè)施、安全操作規(guī)程、安全設(shè)備適用于對健康成年人已知無致病作用的微生物，如用于教學(xué)的普通微生物實驗室等。

E.coli4/8/202317BSL-1實驗室1)普通建筑物，防節(jié)肢動物和嚙齒動物。2)每個實驗室設(shè)洗手池，宜靠近出口處。3)實驗室門口設(shè)掛衣裝置，個人便裝與工作服分開。4)實驗室各表面平整、易清潔、不滲水、耐腐蝕。5)實驗臺面防水，耐腐蝕、耐熱。6)櫥柜和實驗臺牢固，保持一定距離以便于清潔。7)如有可開啟的窗戶，應(yīng)設(shè)置紗窗。8)保證工作照明，避免不必要的反光和強(qiáng)光。9)有適當(dāng)?shù)南驹O(shè)備。4/8/202318典型的一級生物安全水平實驗室不需要特殊的一級和二級屏障、除需要洗手池外，依靠標(biāo)準(zhǔn)的微生物操作即可獲得基本的防護(hù)水平。4/8/202319BSL-2實驗室1)滿足BSL-1的要求。2)實驗室門帶鎖并可自動關(guān)閉，門應(yīng)有可視窗。3)應(yīng)有足夠的存儲空間擺放物品以方便使用。在實驗室工作區(qū)域外還應(yīng)當(dāng)有供長期使用的存儲空間。4)在實驗室內(nèi)使用專門的工作服，戴乳膠手套。5)在實驗室工作區(qū)域外有存放個人衣物的條件。4/8/202321BSL-2實驗室6)建筑內(nèi)應(yīng)配備高壓蒸汽滅菌器。7)在實驗室內(nèi)配備生物安全柜。8)設(shè)洗眼設(shè)施，必要時應(yīng)有應(yīng)急噴淋裝置。9)通風(fēng)，如使用窗戶自然通風(fēng)應(yīng)有防蟲紗窗。10)有可靠的電力和應(yīng)急照明，必要時設(shè)備用電源。11)實驗室出口有在黑暗中可明確辨認(rèn)的標(biāo)識。4/8/202322BSL-2實驗室在處理危險度2級或更高危險度級別的微生物時，在實驗室門上應(yīng)標(biāo)有國際通用的生物危害警告標(biāo)志。4/8/202323三級生物安全防護(hù)實驗室BSL-3

實驗室結(jié)構(gòu)和設(shè)施、安全操作規(guī)程、安全設(shè)備適用于主要通過呼吸途徑使人傳染上嚴(yán)重的甚至是致死疾病的致病微生物及其毒素，通常已有預(yù)防傳染的疫苗。

anthrax;WestNilevirus;Easternequineencephalitis;SARS;tuberculosis;RockyMountainspottedfever;andyellowfever.

4/8/202325BSL-3實驗室在建筑物中自成隔離區(qū)或為獨立建筑物。由清潔區(qū)、半污染區(qū)和污染區(qū)組成。污染區(qū)和半污染區(qū)之間應(yīng)設(shè)緩沖間。污染區(qū)與半污染區(qū)之間、半污染區(qū)和清潔區(qū)之間應(yīng)設(shè)置傳遞窗。我國的第一個P3實驗室建于1987年，當(dāng)時主要用于艾滋病研究。4/8/202326BSL-3實驗室送排風(fēng)系統(tǒng)獨立的送排風(fēng)系統(tǒng)以控制氣流方向和壓力梯度。送風(fēng)口和排風(fēng)口的布置對面分布，上送下排。送排風(fēng)系統(tǒng)應(yīng)為直排式，不得采用回風(fēng)系統(tǒng)。應(yīng)安裝風(fēng)機(jī)和生物安全柜啟動自動聯(lián)鎖裝置。4/8/202329BSL-3實驗室環(huán)境參數(shù)相對室外大氣壓，污染區(qū)為-40Pa，并與生物安全柜等裝置內(nèi)氣壓保持安全合理壓差。4/8/202330BSL-3實驗室其他實驗室所需壓力設(shè)備不應(yīng)影響室內(nèi)負(fù)壓梯度。實驗室應(yīng)設(shè)置通訊系統(tǒng)。實驗記錄等資料應(yīng)通過計算機(jī)等發(fā)送至實驗室外。清潔區(qū)設(shè)置淋浴裝置。4/8/202331典型的三級生物安全水平實驗室4/8/202332四級生物安全防護(hù)實驗室BSL-4

實驗室結(jié)構(gòu)和設(shè)施、安全操作規(guī)程、安全設(shè)備適用于對人體具有高度的危險性，通過氣溶膠途徑傳播或傳播途徑不明，目前尚無有效的疫苗或治療方法的致病微生物及其毒素。

BolivianandArgentinehemorrhagicfevers,Marburgvirus;Ebolavirus;Lassafever;Crimean-Congohemorrhagicfever,andothervarioushemorrhagicdiseases.4/8/202333BSL-4實驗室P4實驗室是指生物安全四級實驗室，專門用于開展烈性傳染病的研究，是全球生物安全最高級別的實驗室，目前國內(nèi)尚無一家。P4實驗室的安全措施比P3實驗室更嚴(yán)格，研究人員入內(nèi)不僅要穿全封閉的防護(hù)服，還要攜帶氧氣瓶。中國軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院在建準(zhǔn)P4實驗室。中科院武漢病毒所P4實驗室2010年完成。4/8/202334與外界溝通4/8/202335動物實驗室的生物安全參照BSL1-4實驗室的要求，還應(yīng)考慮動物實驗過程產(chǎn)生的潛在生物危害的防護(hù)。應(yīng)根據(jù)動物的種類、身體大小、生活習(xí)性、實驗?zāi)康牡冗x擇專用于動物的生物安全柜、動物飼養(yǎng)設(shè)施、動物實驗設(shè)施、消毒設(shè)施和清洗設(shè)施等。

4/8/202336生物安全設(shè)備分類1.超凈臺2.通風(fēng)櫥3.生物安全柜

4/8/202337

超凈臺正壓柜氣流從頂部或底部經(jīng)過過濾器后從操作區(qū)正面流向工作臺面，被樣品污染的氣流排出柜外，沒有循環(huán)氣流。超凈臺保護(hù)樣品不受污染，適用于普通實驗室或1級生物安全水平中對人員和環(huán)境無保護(hù)要求的實驗。

4/8/202338通風(fēng)櫥是實驗室，特別是化學(xué)實驗室的一種大型設(shè)備。用途是減少實驗者和有害氣體的接觸。通風(fēng)櫥是保護(hù)人員防止有毒化學(xué)煙氣危害的一級屏障。它可以作為作為重要的安全后援設(shè)備，像在化學(xué)實驗過程失敗，化學(xué)煙霧、塵埃和有毒氣體產(chǎn)生時有效排出有害氣體，保護(hù)工作人員和實驗室環(huán)境。

4/8/202339生物安全柜BiologicalSafetyCabinets生物安全柜的要求:顆粒經(jīng)HEPA過濾去除氣流為層流氣流有方向HEPA(HighefficiencyparticulateairFilter)，高效空氣過濾器，達(dá)到HEPA標(biāo)準(zhǔn)的過濾網(wǎng)，對于0.1um和0.3um的有效率達(dá)到99.998%，HEPA網(wǎng)的特點是空氣可以通過，但細(xì)小的微粒卻無法通過。4/8/202340ClassI生物安全柜可開啟前窗在負(fù)壓下操作表面風(fēng)速在0.36m/s，排出的氣體經(jīng)HEPA過濾保護(hù)操作人員和環(huán)境適用于要求生物安全等級1、2、3的工作適用于樣品不需保護(hù)的實驗工作4/8/202341ClassII生物安全柜4/8/202342所有的二級生物安全柜同一級生物安全柜一樣，能夠保護(hù)操作人員和實驗室環(huán)境免受危害。二級安全柜也能夠保護(hù)產(chǎn)品樣本在微生物操作過程中免受污染。二級生物安全柜可以在一、二、三級生物安全水平的生物因子操作中使用。4/8/202343ClassII生物安全柜的分類4/8/202344ClassII生物安全柜空氣流向4/8/202345

CLASSIII生物安全柜(手套柜）

全封閉的、氣密結(jié)構(gòu)的通風(fēng)柜；通過橡膠手套進(jìn)行操作；柜內(nèi)保持至少120Pa的負(fù)壓；供氣通過HEPA抽入內(nèi)；外排的氣流經(jīng)過雙層HEPA過濾或經(jīng)HEPA后再經(jīng)燃燒處理。

CLASSIII型BSC適用于BSL3、BSL4的生物實驗。

4/8/202346生物安全柜放置五個遠(yuǎn)離點（氣流）門風(fēng)扇空調(diào)開著的窗戶人員活動頻繁的區(qū)域擺放要求穩(wěn)固的平臺或支架兩側(cè)、后面和上端留30cmAirRegister設(shè)備首選位置候選位置工作臺設(shè)備4/8/202347反面教材4/8/202348生物安全柜的使用操作者在移動雙臂進(jìn)出安全柜時，應(yīng)該垂直地緩慢進(jìn)出前面的開口。Ⅱ級生物安全柜前面的進(jìn)氣格柵不能被阻擋。放入柜內(nèi)的物品應(yīng)采用70%酒精來清除表面污染。4/8/202349生物安全柜的使用所有物品應(yīng)盡可能地放在工作臺后部靠近工作臺后緣的位置，并使其在操作中不會阻擋后部格柵。可產(chǎn)生氣溶膠的設(shè)備（例如混勻器、離心機(jī)等）應(yīng)靠近安全柜的后部放置。廢棄物袋、盛放廢棄吸管的盤子以及吸濾瓶等體積較大的物品，應(yīng)該放在安全柜內(nèi)的某一側(cè)。4/8/202350生物安全柜的使用干凈的物品理想的工作臺擺放被污染的區(qū)域廢棄物托盤垃圾袋4/8/202351生物安全柜內(nèi)接種針的滅菌紅外電熱接種環(huán)滅菌器4/8/202352生物安全柜的使用在每次使用前后，要清除生物安全柜內(nèi)表面的污染。工作臺面和內(nèi)壁要用消毒劑進(jìn)行擦拭，所用的消毒劑要能夠殺死安全柜里任何微生物。在使用生物安全柜時應(yīng)穿著個體防護(hù)服。在進(jìn)行一級和二級生物安全水平的操作時，可穿著普通實驗服。4/8/202353高效空氣過濾工作人員安全無渦流單向流空氣實驗對象不受污染手套箱式操作口通風(fēng)櫥無是是否否I級有是否否否II級有是是是否III級有是是是是生物安全裝置異同4/8/202354對各級生物安全水平實驗室的要求生物安全柜生物安全級別一級二級三級四級Ⅰ級不需要隨意需要不需要Ⅱ級不需要最好有需要需要，在防護(hù)服實驗室中使用Ⅲ級不需要不需要最好有需要，在安全柜室使用4/8/202355個人防護(hù)裝備實驗室防護(hù)服面部及身體保護(hù)手套鞋呼吸防護(hù)4/8/202356個體防護(hù)裝備

裝備避免的危害安全性特征實驗服、隔離衣、連體衣污染衣服·背面開口·罩在日常服裝外塑料圍裙污染衣服·防水鞋襪碰撞和噴濺·不露腳趾護(hù)目鏡碰撞和噴濺·防碰撞鏡片（必須有視力校正或外戴視力校正眼鏡）·側(cè)面有護(hù)罩安全眼鏡碰撞·防碰撞鏡片（必須有視力校正）·側(cè)面有護(hù)罩面罩碰撞和噴濺·罩住整個面部·發(fā)生意外時易于取下4/8/202357個體防護(hù)裝備裝備避免的危害安全性特征防毒面具吸入氣溶膠·在設(shè)計上包括一次性使用的、整個面部或一半面部空氣凈化的、整個面部或加罩的動力空氣凈化（poweredairpurifying，PAPR）的以及供氣的防毒面具手套直接接觸微生物·得到微生物學(xué)認(rèn)可的一次性乳劃破膠、乙烯樹脂或聚腈類材料·保護(hù)手·網(wǎng)孔結(jié)構(gòu)

4/8/202358四、實驗室生物安全管理實驗室及其人員生物安全管理，按國務(wù)院令(第424號)《病原微生物實驗室生物安全管理條例》于2004年11月起施行。4/8/202359管理制度實驗室內(nèi)設(shè)置和準(zhǔn)入在主實驗室內(nèi)應(yīng)合理設(shè)置清潔區(qū)、半污染區(qū)和污染區(qū)。非實驗有關(guān)人員和物品不得進(jìn)入實驗室。實驗室工作人員、外來合作者、進(jìn)修和學(xué)習(xí)人員在進(jìn)入實驗室及其崗位之前必須經(jīng)過實驗室主任的批準(zhǔn)。4/8/202360實驗室工作人員資格和培訓(xùn)實驗室的工作人員必須是受過專業(yè)教育的技術(shù)人員。在獨立工作前須在中高級實驗技術(shù)人員指導(dǎo)下進(jìn)行上崗培訓(xùn)，達(dá)到合格標(biāo)準(zhǔn)，方可開始工作實驗室的工作人員必須被告知實驗室工作的潛在危險并接受實驗室安全教育，自愿從事實驗室工作實驗室的工作人員必須遵守實驗室的所有制度、規(guī)定和操作規(guī)程4/8/202361實驗室特殊管理對可能的危險因素，制定保證安全的工作程序。事前進(jìn)行有效的培訓(xùn)和模擬訓(xùn)練。對于意外事故要能夠提供包括緊急救助或?qū)I(yè)性保健治療的措施，足以應(yīng)付緊急情況。實驗室事故處理及上報。4/8/202362實驗室生物安全管理制度實驗室內(nèi)務(wù)管理制度尖銳器具安全使用制度實驗室消毒防護(hù)制度標(biāo)本采集運輸制度廢棄物處理制度工作人員防護(hù)制度差錯事故處理制度4/8/202363什么是醫(yī)療廢物？醫(yī)療廢物：醫(yī)療衛(wèi)生機(jī)構(gòu)在醫(yī)療、預(yù)防、保健以及其他相關(guān)活動中產(chǎn)生的具有直接或者間接感染性、毒性以及其他危害性的廢物。4/8/202364醫(yī)療廢物分類感染性廢物病理性廢物損傷性廢物藥物性廢物化學(xué)性廢物4/8/202365處置要點醫(yī)療廢物集中處置包裝物要防滲漏、防銳器穿透，明顯標(biāo)識和警示說明醫(yī)療廢物儲存設(shè)備定期消毒醫(yī)療廢物制病原體的培養(yǎng)基、標(biāo)本和菌種、毒種保存液等高危險廢物，在交醫(yī)療廢物集中處置前應(yīng)就地消毒4/8/202366差錯事故、感染事故1、一般差錯：生物安全柜內(nèi)灑溢，沒有嚴(yán)重后果