標準解讀
《GB/T 25887-2010 奶牛脊椎畸形綜合征檢測 PCR-RFLP法》是一項國家標準，專門用于指導通過PCR-RFLP（聚合酶鏈反應-限制性片段長度多態性）技術來檢測奶牛是否攜帶脊椎畸形綜合征相關的遺傳變異。該標準詳細規定了從樣本采集到結果分析的一系列步驟和技術要求，確保檢測過程的準確性和可靠性。
首先，在樣品采集方面，標準明確了采集對象應為待測奶牛的血液或組織樣本，并且對樣本保存條件提出了具體要求，以保證DNA的質量和完整性，這對于后續的PCR擴增至關重要。
接著是DNA提取環節，標準推薦使用酚/氯仿抽提法或其他有效方法從生物材料中提取基因組DNA。得到的DNA需經過定量測定后稀釋至適當濃度，以便于進行下一步的PCR擴增實驗。
對于PCR反應體系構建及條件設置，本標準提供了詳細的指南，包括引物設計原則、退火溫度選擇等關鍵參數，這些都是為了能夠特異性地擴增出與脊椎畸形綜合征相關聯的目標片段。
完成PCR擴增之后，將產物進行RFLP分析。這一步驟涉及到使用特定的限制性內切酶切割PCR產物，然后通過凝膠電泳分離不同大小的DNA片段。根據酶切圖譜可以判斷個體是否存在導致脊椎畸形綜合征的突變位點。
最后，在結果判讀階段，標準給出了陽性、陰性以及雜合子狀態的具體定義，并強調了重復實驗的重要性，以提高檢測結果的準確性。
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- 現行
- 正在執行有效
- 2011-01-10 頒布
- 2011-06-01 實施
文檔簡介
ICS6502030
B43..
中華人民共和國國家標準
GB/T25887—2010
奶牛脊椎畸形綜合征檢測PCR-RFLP法
MethodofPCR-RFLPfordetectingcomplexvertebralmalformationindairycattle
2011-01-10發布2011-06-01實施
中華人民共和國國家質量監督檢驗檢疫總局發布
中國國家標準化管理委員會
GB/T25887—2010
前言
本標準的附錄為規范性附錄附錄附錄為資料性附錄
B,A、C。
本標準由中華人民共和國農業部提出
。
本標準由全國畜牧業標準化技術委員會歸口
。
本標準起草單位華中農業大學
:。
本標準主要起草人張淑君楊利國李翔胡修忠劉文舉宋利軍
:、、、、、。
Ⅰ
GB/T25887—2010
奶牛脊椎畸形綜合征檢測PCR-RFLP法
1范圍
本標準規定了奶牛脊椎畸形綜合征的檢測技術
PCR-RFLP。
本標準適用于奶牛脊椎畸形綜合征的檢測與診斷
。
2規范性引用文件
下列文件中的條款通過本標準的引用而成為本標準的條款凡是注日期的引用文件其隨后所有
。,
的修改單不包括勘誤的內容或修訂版均不適用于本標準然而鼓勵根據本標準達成協議的各方研究
(),,
是否可使用這些文件的最新版本凡是不注日期的引用文件其最新版本適用于本標準
。,。
分析實驗室用水規格和試驗方法
GB/T6682
3術語和定義
下列術語和定義適用于本標準
。
31
.
奶牛脊椎畸形綜合征complexvertebralmalformationindairycattleCVM
;
奶牛的一種常染色體隱性遺傳病主要表現為母牛流產胎兒早期死亡出生后不久死亡患病犢牛
,、、,
主要癥狀表現為頸短脊椎畸形心臟畸形腿部畸形系部呈現對稱的內向僵直等
:、、、、。
32
.
SLC35A3基因SLC35A3gene
定位于牛第號染色體上在基因序列數據庫中的登錄號為全長
3,(GenBank)AY160683,14901bp,
為由個外顯子和個內含子組成該基因編碼核糖轉運蛋白與脊柱發育有關是奶牛
mRNA981bp,76,,,
脊椎畸形綜合征的致病基因
。
33
.
限制性片段長度多態性restrictionfragmentlengthpolymorphismRFLP
,
檢測用限制性內切酶酶切后形成的特定片段的大小因此凡是可以引起酶切位點變
DNADNA。
異的突變如點突變新產生和去除酶切位點和一段的重新組織如插入和缺失造成酶切位點間
()DNA(
的長度發生變化等均可導致的產生
)RFLP。
4原理
基因第四外顯子中第位堿基由突變為時其對應編碼的氨基酸由纈氨酸改變
SLC35A3559GT,
為苯丙氨酸導致奶牛脊椎畸形綜合征的發生采用技術檢測牛樣本基因組變異即
,。PCR-RFLPDNA,
采用技術擴增基因片段限制性內切酶消化擴增產物電泳檢測酶切產物對
PCRSLC35A3,PCR,,
基因進行分型根據基因型判定奶牛是否攜帶脊椎畸形綜合征的致病基因
SLC35A3,。
5擴增SLC35A3基因片段的引入酶切位
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