中華人民共和國國家標準

犌犅５４１３．１４—２０１０

食品安全國家標準

嬰幼兒食品和乳品中維生素犅１２的測定

犖犪狋犻狅狀犪犾犳狅狅犱狊犪犳犲狋狔狊狋犪狀犱犪狉犱

犇犲狋犲狉犿犻狀犪狋犻狅狀狅犳狏犻狋犪犿犻狀犅１２犻狀犳狅狅犱狊犳狅狉犻狀犳犪狀狋狊犪狀犱狔狅狌狀犵犮犺犻犾犱狉犲狀，

犿犻犾犽犪狀犱犿犻犾犽狆狉狅犱狌犮狋狊

２０１００３２６發布２０１００６０１實施

中華人民共和國衛生部發布

書

犌犅５４１３．１４—２０１０

前言

本標準代替ＧＢ／Ｔ５４１３．１４—１９９７《嬰幼兒食品和乳粉維生素Ｂ１２的測定》。

本標準與ＧＢ／Ｔ５４１３．１４—１９９７相比，主要變化如下：

———標準名稱改為《嬰幼兒食品和乳品中維生素Ｂ１２的測定》。

本標準的附錄Ａ為規范性附錄。

本標準所代替標準的歷次版本發布情況為：

———ＧＢ５４１３—１９８５、ＧＢ／Ｔ５４１３．１４—１９９７。

Ⅰ

書

犌犅５４１３．１４—２０１０

食品安全國家標準

嬰幼兒食品和乳品中維生素犅１２的測定

１范圍

本標準規定了嬰幼兒食品和乳品中維生素Ｂ１２的測定方法。

本標準適用于嬰幼兒食品和乳品中維生素Ｂ１２的測定。

２規范性引用文件

本標準中引用的文件對于本標準的應用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版

本適用于本標準。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本標準。

３原理

利用萊士曼氏乳酸桿菌（犔犪犮狋狅犫犪犮犻犾犾狌狊犾犲犻犮犺犿犪狀狀犻犻）對維生素Ｂ１２的特異性和靈敏性，定量測定出

試樣中維生素Ｂ１２的含量。在測定用培養基中供給除維生素Ｂ１２以外的所有營養成分，這樣微生物生長

產生的透光率就會同標準曲線工作液及未知待測溶液中維生素Ｂ１２的含量相對應。以不同濃度標準溶

液的透光率相對于各濃度水平標準物質的濃度繪制標準曲線，根據標準曲線即可計算出試樣中維生素

Ｂ１２的含量。

４試劑和材料

除非另有規定，本方法所用試劑均為分析純，水為ＧＢ／Ｔ６６８２規定的二級水。

４．１菌株：萊士曼氏乳酸桿菌（犔犪犮狋狅犫犪犮犻犾犾狌狊犾犲犻犮犺犿犪狀狀犻犻）ＡＴＣＣ７８３０。

４．２維生素Ｂ１２（ＶｉｔａｍｉｎＢ１２或Ｃｙａｎｏｃｏｂａｌａｍｉｎ）標準品：分子式Ｃ６３Ｈ８８ＣｏＮ１４Ｏ１４Ｐ，純度≥９９％。

４．３培養基。

４．３．１乳酸桿菌瓊脂培養基：見附錄Ａ。

４．３．２乳酸桿菌肉湯培養基：見附錄Ａ。

４．３．３維生素Ｂ１２測定用培養基：見附錄Ａ。

注：一些商品化合成培養基效果良好，商品化合成培養基按標簽說明進行配制。

４．４９ｇ／Ｌ氯化鈉溶液（生理鹽水）：稱取９．０ｇ氯化鈉溶解于１０００ｍＬ水中，分裝于具塞試管，每管

１０ｍＬ。１２１℃滅菌１５ｍｉｎ。

４．５乙醇溶液：體積分數為２５％。

４．６無水磷酸氫二鈉（Ｎａ２ＨＰＯ４）。

４．７無水偏重亞硫酸鈉（Ｎａ２Ｓ２Ｏ５）。

４．８檸檬酸（含一個結晶水）（Ｃ６Ｈ８Ｏ７·Ｈ２Ｏ）。

４．９標準溶液的制備。

４．９．１維生素Ｂ１２貯備液（１０μｇ／ｍＬ）：精確稱取維生素Ｂ１２標準品（４．２），用乙醇溶液（４．５）定容至維生

素Ｂ１２濃度為１０μｇ／ｍＬ。

４．９．２維生素Ｂ１２中間液（１００ｎｇ／ｍＬ）：用乙醇溶液（４．５）將５