高效液相色譜法高效液相色譜法1第一節(jié)概述回高效液相色譜法(HPLC)是60年代末以經典液相色譜法為基礎,引入了氣相色譜的理論與實驗方法,流動相用高壓泵輸送采用高效固定相和在線檢測等手段發(fā)展而成的分離分析方法。回與氣相色譜法相比具有:適用范圍廣,樣品預處理簡單,分離效率高,流動相選擇范圍廣,檢測方法多為非破壞性的,流出組分可回收等優(yōu)點。第一節(jié)概述2液-固吸附液一液分配「正相色譜般反相色譜反相色譜離子對色譜離子抑制色譜般離子交換色譜離子交換色譜離子色譜HPLC氨基酸分析凝膠滲透色譜空間排斥色譜凝膠過濾色譜膠束色譜假相色譜環(huán)糊精色譜親合色譜,手性色譜,毛細管電泳液-固吸附3正相色譜(normalphase)流動相極性小于固定相極性的分配色譜法稱為正相分配色譜。常用的分析柱有:氨基柱、氰基柱、硅膠柱。常用流動相為極性小的有機溶劑反相色譜(reversedphase)流動相極性大于固定相極性的分配色譜法稱為反相分配色譜法。常用的分析柱有ODS(C18),C8,C2o常用流動相為甲醇-水,乙腈-水。正相色譜(normalphase)4離子抑制色譜(Ionsuppressionchromatography)-—調節(jié)流動相的pH值,抑制組分的解離,增加組分在固定相中的溶解度,改善峰形,以達到分離有機弱酸和弱堿的目的。離子對色譜(ionpairchromatography)將反離子加入流動相中,與呈解離狀態(tài)的被測物作用,生成脂溶性的中性離子對絡合物從而増加了被測物在非極性固定相中的溶解度,改善分離效果,達到分離目的。常用反離子有:季銨鹽用于酸類烷基磺酸鹽——用于堿類離子抑制色譜(Ionsuppression5回離子色譜法(ionchromatography)離子色譜是由經典的離子交換色譜發(fā)展起來的一種液相色譜技術,利用物質在離子交換柱上遷移的差異而達到分離,用于親水性陰陽離子的測定。根據是否采用抑制柱,可分為抑制型離子色譜和非抑制型離子色譜。回離子色譜法(ionchromatography)6空間排斥色譜(stericexclusion~)也稱凝膠色譜,依據被分離組分分子尺寸與凝膠空徑大小之間的相對關系而分離類似于分子篩作用。在一定分子線團尺寸內,分子越大,保留時間越短。凝膠滲透—一以有機溶劑為流動相凝膠過濾——以水溶液為流動相對于相同化學組成的高分子化合物,其分子尺寸大小與分子量成正比,因此凝膠色譜可以研究高分子化合物的分子量分布。空間排斥色譜(stericexclusion~)7膠束色譜(micellarchromatography)回表面活性劑在水中超過某一濃度(臨界濃度)時,多余的表面活性劑不再溶解,聚集而成膠束(膠粒)。回以膠束分散體系為流動相的色譜法稱為膠束色譜法。它的流動相為膠束多相分散體系,不是真溶液;流動相中不含有機溶劑回因膠束色譜法的流動相是多相分散體系,在整個色譜體系中又增加了一相,故也被稱為假相色譜(pseudophasechromatography)膠束色譜(micellarchromatography)8手性色譜(chiralchromatography)用于分離手性藥物對映體的一種有效技術,可分為直接法和間接法兩類直接法n手性固定相法(chiralstationaryphase;CSP手性流動相法(chiralmobilephaseadditive;CMPA間接法一手性試劑衍生化法chiralderivatizationreagent,CDR)手性色譜(chiralchromatography)9第二節(jié)高效液相色譜儀流動相高壓泵脫氣裝置進樣閥色譜柱檢測器第二節(jié)高效液相色譜儀10高效液相色譜法培訓課件11高效液相色譜法培訓課件12高效液相色譜法培訓課件13高效液相色譜法培訓課件14高效液相色譜法培訓課件15高效液相色譜法培訓課件16高效液相色譜法培訓課件17高效液相色譜法培訓課件18高效液相色譜法培訓課件19高效液相色譜法培訓課件20高效液相色譜法培訓課件21高效液相色譜法培訓課件22高效液相色譜法培訓課件23高效液相色譜法培訓課件24高效液相色譜法培訓課件25高效液相色譜法培訓課件26高效液相色譜法培訓課件27高效液相色譜法培訓課件28高效液相色譜法培訓課件29高效液相色譜法培訓課件30高效液相色譜法培訓課件31高效液相色譜法培訓課件32高效液相色譜法培訓課件33高效液相色譜法培訓課件34高效液相色譜法培訓課件35高效液相色譜法培訓課件36高效液相色譜法培訓課件37高效液相色譜法培訓課件38高效液相色譜法培訓課件39高效液相色譜法培訓課件40高效液相色譜法培訓課件41高效液相色譜法培訓課件42高效液相色譜法培訓課件43高效液相色譜法培訓課件44高效液相色譜法培訓課件45高效液相色譜法培訓課件46高效液相色譜法培訓課件47高效液相色譜法培訓課件48高效液相色譜法培訓課件49高效液相色譜法培訓課件50高效液相色譜法培訓課件51高效液相色譜法培訓課件52高效液相色譜法培訓課件53高效液相色譜法培訓課件54高效液相色譜法培訓課件55高效液相色譜法培訓課件56高效液相色譜法培訓課件57高效液相色譜法培訓課件58高效液相色譜法培訓課件59高效液相色譜法培訓課件60高效液相色譜法培訓課件61高效液相色譜法培訓課件62高效液相色譜法培訓課件63高效液相色譜法培訓課件64高效液相色譜法培訓課件65高效液相色譜法培訓課件66高效液相色譜法培訓課件67高效液相色譜法培訓課件68高效液相色譜法培訓課件69高效液相色譜法培訓課件70高效液相色譜法培訓課件71高效液相色譜法培訓課件72高效液相色譜法培訓課件73高效液相色譜法培訓課件74高效液相色譜法培訓課件75高效液相色譜法培訓課件76高效液相色譜法培訓課件77高效液相色譜法培訓課件78高效液相色譜法培訓課件79高效液相色譜法培訓課件80高效液相色譜法培訓課件81高效液相色譜法培訓課件82高效液相色譜法培訓課件83高效液相色譜法培訓課件84高效液相色譜法培訓課件85高效液相色譜法培訓課件86高效液相色譜法培訓課件87高效液相色譜法培訓課件88高效液相色譜法培訓課件89高效液相色譜法培訓課件90高效液相色譜法培訓課件91高效液相色譜法培訓課件92高效液相色譜法培訓課件93高效液相色譜法培訓課件94高效液相色譜法培訓課件95高效液相色譜法培訓課件96高效液相色譜法培訓課件97高效液相色譜法培訓課件98高效液相色譜法培訓課件99高效液相色譜法培訓課件100高效液相色譜法培訓課件101高效液相色譜法培訓課件102高效液相色譜法高效液相色譜法103第一節(jié)概述回高效液相色譜法(HPLC)是60年代末以經典液相色譜法為基礎,引入了氣相色譜的理論與實驗方法,流動相用高壓泵輸送采用高效固定相和在線檢測等手段發(fā)展而成的分離分析方法。回與氣相色譜法相比具有:適用范圍廣,樣品預處理簡單,分離效率高,流動相選擇范圍廣,檢測方法多為非破壞性的,流出組分可回收等優(yōu)點。第一節(jié)概述104液-固吸附液一液分配「正相色譜般反相色譜反相色譜離子對色譜離子抑制色譜般離子交換色譜離子交換色譜離子色譜HPLC氨基酸分析凝膠滲透色譜空間排斥色譜凝膠過濾色譜膠束色譜假相色譜環(huán)糊精色譜親合色譜,手性色譜,毛細管電泳液-固吸附105正相色譜(normalphase)流動相極性小于固定相極性的分配色譜法稱為正相分配色譜。常用的分析柱有:氨基柱、氰基柱、硅膠柱。常用流動相為極性小的有機溶劑反相色譜(reversedphase)流動相極性大于固定相極性的分配色譜法稱為反相分配色譜法。常用的分析柱有ODS(C18),C8,C2o常用流動相為甲醇-水,乙腈-水。正相色譜(normalphase)106離子抑制色譜(Ionsuppressionchromatography)-—調節(jié)流動相的pH值,抑制組分的解離,增加組分在固定相中的溶解度,改善峰形,以達到分離有機弱酸和弱堿的目的。離子對色譜(ionpairchromatography)將反離子加入流動相中,與呈解離狀態(tài)的被測物作用,生成脂溶性的中性離子對絡合物從而増加了被測物在非極性固定相中的溶解度,改善分離效果,達到分離目的。常用反離子有:季銨鹽用于酸類烷基磺酸鹽——用于堿類離子抑制色譜(Ionsuppression107回離子色譜法(ionchromatography)離子色譜是由經典的離子交換色譜發(fā)展起來的一種液相色譜技術,利用物質在離子交換柱上遷移的差異而達到分離,用于親水性陰陽離子的測定。根據是否采用抑制柱,可分為抑制型離子色譜和非抑制型離子色譜。回離子色譜法(ionchromatography)108空間排斥色譜(stericexclusion~)也稱凝膠色譜,依據被分離組分分子尺寸與凝膠空徑大小之間的相對關系而分離類似于分子篩作用。在一定分子線團尺寸內,分子越大,保留時間越短。凝膠滲透—一以有機溶劑為流動相凝膠過濾——以水溶液為流動相對于相同化學組成的高分子化合物,其分子尺寸大小與分子量成正比,因此凝膠色譜可以研究高分子化合物的分子量分布。空間排斥色譜(stericexclusion~)109膠束色譜(micellarchromatography)回表面活性劑在水中超過某一濃度(臨界濃度)時,多余的表面活性劑不再溶解,聚集而成膠束(膠粒)。回以膠束分散體系為流動相的色譜法稱為膠束色譜法。它的流動相為膠束多相分散體系,不是真溶液;流動相中不含有機溶劑回因膠束色譜法的流動相是多相分散體系,在整個色譜體系中又增加了一相,故也被稱為假相色譜(pseudophasechromatography)膠束色譜(micellarchromatography)110手性色譜(chiralchromatography)用于分離手性藥物對映體的一種有效技術,可分為直接法和間接法兩類直接法n手性固定相法(chiralstationaryphase;CSP手性流動相法(chiralmobilephaseadditive;CMPA間接法一手性試劑衍生化法chiralderivatizationreagent,CDR)手性色譜(chiralchromatography)111第二節(jié)高效液相色譜儀流動相高壓泵脫氣裝置進樣閥色譜柱檢測器第二節(jié)高效液相色譜儀112高效液相色譜法培訓課件113高效液相色譜法培訓課件114高效液相色譜法培訓課件115高效液相色譜法培訓課件116高效液相色譜法培訓課件117高效液相色譜法培訓課件118高效液相色譜法培訓課件119高效液相色譜法培訓課件120高效液相色譜法培訓課件121高效液相色譜法培訓課件122高效液相色譜法培訓課件123高效液相色譜法培訓課件124高效液相色譜法培訓課件125高效液相色譜法培訓課件126高效液相色譜法培訓課件127高效液相色譜法培訓課件128高效液相色譜法培訓課件129高效液相色譜法培訓課件130高效液相色譜法培訓課件131高效液相色譜法培訓課件132高效液相色譜法培訓課件133高效液相色譜法培訓課件134高效液相色譜法培訓課件135高效液相色譜法培訓課件136高效液相色譜法培訓課件137高效液相色譜法培訓課件138高效液相色譜法培訓課件139高效液相色譜法培訓課件140高效液相色譜法培訓課件141高效液相色譜法培訓課件142高效液相色譜法培訓課件143高效液相色譜法培訓課件144高效液相色譜法培訓課件145高效液相色譜法培訓課件146高效液相色譜法培訓課件147高效液相色譜法培訓課件148高效液相色譜法培訓課件149高效液相色譜法培訓課件150高效液相色譜法培訓課件151高效液相色譜法培訓課件152高效液相色譜法培訓課件153高效液相色譜法培訓課件154高效液相色譜法培訓課件155高效液相色譜法培訓課件156高效液相色譜法培訓課件157高效液相色譜法培訓課件158高效液相色譜法培訓課件159高效液相色譜法培訓課件160高效液相色譜法培訓課件161高效液相色譜法培訓課件162高效液相色譜法培訓課件163高效液相色譜法培訓課件164高效液相色譜法培訓課件165高