DB3702/T90—2006PAGE2PAGE1青島市質量技術監督局發布2007-01-01實施2006-12-08發布豆芽生產管理技術規范DB3702/T青島市質量技術監督局發布2007-01-01實施2006-12-08發布豆芽生產管理技術規范DB3702/T090—2006DB青島市地方標準PAGE14前言本標準豆芽中4—氯苯氧乙酸鈉、6—芐基腺嘌呤、赤霉素和福美雙殘留的測定，采用北京市地方標準DB11/T379-2006中規定的方法。本標準附錄A、附錄B、附錄C、附錄D為規范性附錄。本標準由青島市經濟貿易委員會提出。本標準起草單位：青島市蔬菜副食品辦公室、青島市菜籃子商品質量監督檢測中心、青島市蔬菜副食品質量檢測行業技術中心、青島市豆制品行業協會、青島福鴻蔬菜食品有限公司。本標準主要起草人：王為、郭健、黃少華、張祖光、謝寒冰、趙慶剛。 豆芽企業生產技術規范范圍本標準規定了豆芽生產管理技術規范的定義、生產環境、生產設備、清潔消毒、人員要求、生產技術、產品采收、檢驗、運輸及生產記錄。本標準適用于青島市行政區域內豆芽生產。規范性引用文件下列文件中的條款通過本標準的引用而成為本標準的條款。凡是注日期的引用文件，其隨后所有的修改單（不包括勘誤的內容）或修訂版均不適用于本標準，然而，鼓勵根據本標準達成協議的各方研究是否可使用這些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本適用于本標準。GB1352大豆GB2760食品添加劑使用衛生標準GB/T4789.4食品衛生微生物學檢驗沙門氏菌檢驗GB/T4789.5食品衛生微生物學檢驗志賀氏菌檢驗GB/T4789.10食品衛生微生物學檢驗金黃色葡萄球菌檢驗GB/T5009.11食品中總砷及無機砷的測定GB/T5009.12食品中鉛的測定GB/T5009.15食品中鎘的測定GB/T5009.17食品中總汞及有機汞的測定GB/T5009.20食品中有機磷農藥殘留量的測定方法GB/T5009.33食品中亞硝酸鹽與硝酸鹽的測定GB/T5009.34食品中亞硫酸鹽的測定GB/T5009.123食品中鉻的測定GB/T5009.175糧食和蔬菜中2，4-滴殘留量的測定GB/T5009.188水果、蔬菜中甲基托布津、多菌靈的測定GB5749生活飲用水衛生標準GB7718預包裝食品標簽通則GB/T10462綠豆GB14876食品中甲胺磷和乙酰甲胺磷農藥殘留量的測定方法GB14881食品企業通用衛生規范GB/T14929.2花生仁、棉籽油、花生油中涕滅威殘留量測定方法GB14930.2食品工具、設備用洗滌消毒劑衛生標準定量包裝商品計量監督管理辦法國家質量監督檢驗檢疫總局令第75號（2005）定義下列術語和定義適用于本標準。豆芽以黃豆或綠豆為原料，以水為培植基礎，利用原料本身的營養成分培育而成的豆芽。豆芽包括子葉、下胚軸、胚芽和尾根。生產環境應符合GB14881要求。選址與布局廠址應選擇交通便利、水源安全充沛，遠離粉塵、煙霧、有害氣體及周圍無污染源的地區，建筑物、設備布局符合工藝流程要求，能夠滿足質量衛生要求；原料與半成品、成品的生產、存放嚴格分開，人流與物流分開，避免交叉污染。生產條件應設置與生產相適應的清洗車間、浸豆車間、培育車間、包裝車間及倉庫。生產車間地面應不滲（吸）水、防滑，具有良好的排水系統；生產車間墻壁、頂棚裝修應使用防水、防霉材料。裝修材料應無毒無害。應配備相應的冷藏、貯存、防蠅、防塵、防鼠、防蟲、通風、照明設備。附建參觀通道（參觀通道與生產車間應置玻璃隔離）、鍋爐、辦公等輔助用房。車間入口應配備流動水（凈水）裝置，設盥洗、更衣、鞋靴消毒設施。生產廢棄物處理應符合國家有關規定。生產設備與豆芽接觸的設備、容器及其它工具的材質應符合食品衛生安全要求，并保持清潔衛生。清潔消毒企業應建立消毒制度，定期對車間、容器、周轉箱及其他工具進行消毒。消毒劑使用應符合GB14930.2的要求。洗豆與浸豆車間、培育車間、清洗脫殼預冷車間、自動包裝車間、保鮮庫、培育容器及周轉箱等，應設有專人負責殺菌消毒，每次生產前應清洗干凈，地面與墻壁用0.2%漂白粉水溶液（或3.0%石灰水澄清液，或90%的酒精與85%的磷酸按7：3比例混合）進行噴灑,再用潔凈水沖洗干凈，然后用紫外線燈殺菌消毒。應及時清理清洗脫殼預冷車間、自動包裝車間、保鮮庫內豆殼及地面上散落的豆芽，保持地面清潔。人員要求凡患有消化道傳染病、活動性肺結核、化膿性或者滲出性皮膚病未治愈的人員不得直接從事豆芽生產經營。工作人員進入生產區應更換工作服、鞋、帽等，用流動水洗手消毒，不得戴外露飾物。生產技術要求原輔料原輔料應按品種分類、分批貯存，先進先用。黃豆應符合GB1352要求。發芽率不得低于95%，破爛豆不得超過3%。綠豆應符合GB/T10462要求。發芽率不得低于95%，破爛豆不得超過3%。生產用水生產用水應符合GB5749要求。及添加劑添加劑的使用應符合GB2760要求。洗豆與浸豆用清水清洗豆子，剔去蟲蛀、破殘、畸形、霉變、已發芽過的顆粒以及特小或癟粒、未成熟顆粒，淘洗2遍～3遍，洗凈泥沙、去除雜質。清洗后的豆子即可進行浸豆，浸豆用水量至少應達到豆子重量的2倍，黃豆浸豆時，直接用20℃～25℃清水浸泡5h～6h；綠豆浸豆時，先用75℃～80℃熱水燙豆1min～3min并不停攪動，進行熱力殺菌,然后迅速沖入冷水冷卻，用20℃～25℃的清水浸泡3h～4h。結束浸豆時再淘洗豆子2遍～3遍，并輕輕揉搓、沖洗、漂去豆子上的黏液，及時剔除爛豆。培育浸后的豆子運至培育車間裝入容器中進行培育，培育容器的底部應配置疏水層；然后關閉車間大門，采用人工或自動栽培系統，對培育條件進行管理控制，每隔2h～4h噴淋一次，噴淋要均勻，室內溫度保持在20℃～26℃，濕度保持在80%以上。黃豆芽和綠豆芽的一般培育周期約6天～7天。培育人員應每天檢查噴淋是否正常、觀察豆芽生長情況，及時剔除爛豆。產品采收采收豆芽在培育車間生長6天～7天后，黃豆芽下胚軸長8cm～12cm、根須長3cm～5cm，綠豆芽下胚軸長6cm～10cm、根須長4cm～6cm，即可采收。將培育容器移運至清洗脫殼生產線。清洗利用清洗設備清洗脫殼，清洗去除95%以上豆芽種皮和部分根須。預冷清洗完的豆芽應移至預冷線，經0℃的水冷卻3min～4min后取出。包裝包裝材料應整潔、無污染、無異味，無毒無害，并符合食品包裝材料衛生標準的要求。包裝豆芽在包裝生產線上進行定量包裝，逐袋檢查封口是否完好、有無漏氣，然后立即移至保鮮庫。凈含量應符合《定量包裝商品計量監督管理辦法》的要求。預包裝豆芽標簽應符合GB7718的規定要求。散裝豆芽裝入清洗消毒完的周轉箱立即移至保鮮庫。貯存保鮮庫的溫度為2℃～6℃。貯存時應按品種、規格分別堆碼整齊，防止擠壓等損傷。在冷鏈條件（2℃～6℃）下，保質期為3天；在無冷鏈條件下，保質期為1天。檢驗企業應設立產品質量檢測機構，配備必要的檢驗設備和專業人員，對原料、輔料、產品等進行檢測，并登記備案。原輔料檢驗每批次大豆、綠豆、添加劑等原輔料及消毒劑、包裝材料等應進行檢驗或建立合格證明索證登記制度，合格后方可投入生產。產品檢驗感官要求黃豆芽為乳黃色，綠豆芽為純白色；稍彎曲狀、飽滿、健壯、無變色、無雜質、無萎縮或腐爛；具有豆香味、無不良異味。綠豆芽應口感清爽。有毒有害物質豆芽中有毒有害物質限量及檢驗依據應符合表1規定。表1項目指標（mg/kg）檢驗依據汞（以Hg計）≤0.01GB/T5009.17砷（以As計）≤0.5GB/T5009.11鉛（以Pb計）≤0.2GB/T5009.12表1（完）項目指標（mg/kg）檢驗依據鎘（以Cd計）≤0.05GB/T5009.15鉻（以Cr計）≤0.5GB/T14962亞硝酸鹽（以NaN02計）≤4.0GB/T5009.33亞硫酸鹽（以SO2計）≤15GB/T5009.34馬拉硫磷不得檢出GB/T5009.20對硫磷不得檢出甲拌磷不得檢出氧化樂果不得檢出久效磷不得檢出甲胺磷不得檢出GB14876涕滅威不得檢出GB/T14929.22,4—滴（2，4—D）≤0.1GB/T5009.175多菌靈≤0.1GB/T5009.188甲基托布津≤0.14—氯苯氧乙酸鈉≤1.0本標準附錄A6—芐基腺嘌呤≤0.2本標準附錄B赤霉素≤0.5本標準附錄C福美雙≤0.06本標準附錄D沙門氏菌不得檢出GB/T4789.4志賀氏菌不得檢出GB/T4789.5金黃色葡萄球菌不得檢出GB/T4789.10注：其他有毒有害物質的指標應符合國家有關法律、法規、行政規章和強制性標準的規定。運輸運輸工具應清潔衛生、無污染，符合衛生要求，車輛裝運前應清洗、消毒、晾干、預冷，同時配備防雨、防塵、保鮮、保溫等設施。運輸作業應輕裝、輕卸，避免強烈震蕩、撞擊，防止機械損傷；不與有毒、有害物品混裝、混運；車輛運輸途中停放時遠離污染物和污染源。生產記錄建立生產記錄，對生產環境、生產技術、投入品的名稱、來源、使用量、日期、采收、檢驗等進行記錄。生產記錄至少應當保存一年。

（規范性附錄）

豆芽中4-氯苯氧乙酸鈉殘留量的測定原理試樣中的4—氯苯氧乙酸鈉用稀堿提取后，在酸性條件下用固相萃取柱將樣品中的4—氯苯氧乙酸鈉吸附，使其與基體干擾物分離，再用甲醇洗脫，并用高效液相色譜法測定，以保留時間定性，外標法峰面積定量。試劑與材料氫氧化鈉（AR）。鹽酸（AR）。磷酸(AR)。冰醋酸(AR)。甲醇（HPLC）。氫氧化鈉溶液（0.01moL/L）：稱取0.40g氫氧化鈉，溶于水并稀釋至1000mL。亞鐵氰化鉀溶液：稱取10.6g亞鐵氰化鉀[K4Fe(CN)6.3H20]溶于少量水中，并用水稀釋至100mL。乙酸鋅溶液：稱取22.0g乙酸鋅[Zn(CH3C00)2]溶于少量水中，然后加入3mL冰醋酸并加水稀釋至100mL。磷酸鹽緩沖液（0.01moL/L）：稱取1.56g的磷酸二氫鈉（NaH2P04.2H20）加水溶解，并定容至1000mL，用50%的H3P04溶液調節pH至4.0。4—氯苯氧乙酸標準溶液：精密稱取4—氯苯氧乙酸（含量≥99.0%）0.1g(精確到0.0001g)，用甲醇溶解并移入100mL容量瓶中，稀釋至刻度。此溶液每毫升相當于1.00mg4—氯苯氧乙酸。臨用時用甲醇稀釋至每毫升相當于0.10mg4—氯苯氧乙酸。固相萃取小柱（3mL/500mg）：ODS-C18小柱，用時先經10mL甲醇洗脫活化，再用10mL水洗去殘留甲醇，保持萃取柱濕潤狀態待用。本標準所用水為經純水制備系統制備后的水。儀器與設備高效液相色譜儀（帶紫外檢測器或DAD二極管陣列檢測器，配ZORBAXSBC18色譜柱）。超聲波儀。酸度計。組織搗碎機。MiLLi-Q純水制備系統。分析步驟試樣制備稱取搗碎混勻的豆芽樣品20g（精確至0.1g）于100mL容量瓶中，加入40mL輕氧化鈉溶液振搖，然后分別加入亞鐵氰化鉀溶液和乙酸鋅溶液各5mL，混勻，超聲30min，用輕氧化鈉溶液稀釋至刻度。過濾，取50mL濾液用濃磷酸調pH至2.5，然后以3ml/min的流速通過活化的ODS-C18小柱。先用3.0mL水洗去水溶性雜質后，再用甲醇洗脫并定溶至3.0Ml，過0.45μm濾膜后，供液相色譜分析。標準曲線的制備準確吸取每毫升相當于0.10mg的4—氯苯氧乙酸0.20mL、0.50mL、1.00mL、2.00mL、4.00mL于100mL容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度。制成濃度依次為0.20mg/L、0.50mg/L、1.00mg/L、2.00mg/L、4.00mg/L的標準使用液，供液相色譜分析。色譜條件色譜柱：ZORBAXSBC18柱（4.6mm×250mm×5um）或相當型號色譜柱。檢測波長：228nm。。流動相：甲醇＋0.01moL/L磷酸鹽緩沖液（50＋50）。流速：1.0mL/min。柱溫：30℃。測定吸取10.0uL標準使用液和試樣液分別注入液相色譜儀，按照A.4.3項條件進行檢測，以保留時間定性，標準曲線法定量。計算按外標法計算試樣中4—氯苯氧乙酸鈉的含量。見下式：A×f×1000X=——————×1.12M×1000式中：X—試樣中4—氯苯氧乙酸鈉的含量，單位為毫克每千克（mg/kg）；A—從標準曲線上求出的試樣液中4—氯苯氧乙酸的質量，單位為微克（μg）；f—試樣的稀釋倍數；M—試樣的取樣量，單位為克（g）；1.12—4—氯苯氧乙酸轉換為4—氯苯氧乙酸鈉的系數；計算結果保留兩位有效數字。精密度在重復性條件下獲得的兩次獨立測定結果的絕對差值不得超過算術平均值的10%。檢出限在本試驗條件下，豆芽中4—氯苯氧乙酸鈉的定量檢測限為0.10mg/kg。（規范性附錄）

豆芽中6-芐基腺嘌呤殘留量的測定原理豆芽中殘留的6—芐基腺嘌呤經酸化甲醇提出后，高效液相色譜法測定，以保留時間定性，外標法峰面積定量。試劑與材料乙酸(AR)。1%乙酸溶液。乙腈（HPLC）。甲醇（HPLC）。酸化甲醇溶液：每100mL甲醇+水（60+40）（v/v）中加入乙酸50μL,混勻。6—芐基腺嘌呤標準溶液：精密稱取6—芐基腺嘌呤（含量≥99.0%）0.1g（精確到0.0001g）于100mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度。此溶液每毫升相當于1.00mg6—芐基腺嘌呤。臨用時用甲醇稀釋濃度為每毫升相當于0.010mg的6—芐基腺嘌呤。固相萃取小柱（3mL/500g）：ODS-C18小柱，用時先經10ml甲醇洗脫活化，再用10mL水洗去殘留甲醇，保持萃取柱濕潤狀態待用。本標準所用水為經純水制備系統制備后的水。儀器與設備高效液相色譜儀（帶紫外檢測器或DAD二極管陣列檢測器，配ZORBAXSBC18色譜柱）。離心機（4500r/min）組織搗碎機。攪拌器。Milli-Q純水制備系統。旋轉蒸發儀。分析步驟試樣制備稱取搗碎混勻的豆芽樣品10g（精確至0.1g）于50mL聚丙烯離心管中，加入15mL酸化甲醇，用攪拌器混勻3min，然后以4500r/min離心10min，上清夜轉入100mL梨形瓶中，樣品再用15mL酸化甲醇溶液提取，再次離心，合并上清夜。上清液用旋轉蒸發儀蒸發，以去除甲醇，剩余水相以3ml/min的流速通過活化的ODS-C18小柱，先用3.0ml水洗去水溶性雜質后，再用甲醇洗脫并定溶至5.0ml，過0.2μm有機濾膜后，供液相色譜分析。標準溶液系列的配制準確吸取每毫升相當于0.010mg的6—芐基腺嘌呤0mL、0.20mL、0.40mL、0.80mL、1.0mL、2.0mL、5.0mL于25mL容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度。配制成濃度依次為0mg/L、0.08mg/L、0.16mg/L、0.32mg/L、0.40mg/L、0.80mg/L、2.00mg/L的標準溶液系列，供液相色譜分析。色譜條件色譜柱：ZORBAXSBC18柱（4.6mm×250mm×5um）或相當型號色譜柱；檢測波長：267nm；流動相：甲醇＋乙腈+1%乙酸溶液（60+5+35）（v/v）；流速：1.0mL/min；柱溫：30℃。測定準確吸取10.0uL標準系列溶液和試樣溶液注入液相色譜儀中，按照本標準B.4.3條件進行檢測，以保留時間定性，峰面積外標法定量。計算按外標法計算試樣中6—芐基腺嘌呤的含量。見下式：A×f×1000X=———————m×1000式中：X—試樣中6—芐基腺嘌呤的含量，單位為毫克每千克（mg/kg）;A—從標準曲線上求出的試樣溶液中6—芐基腺嘌呤的質量，單位為微克（μg）；f—試樣的稀釋倍數；m—試樣的取樣量，單位為克（g）；計算結果保留兩位有效數字。精密度在重復性條件下獲得的兩次獨立測定結果的絕對差值不得超過算術平均值的10%。檢出限在本試驗條件下，豆芽中6—芐基腺嘌呤的定量檢測下限為0.02mg/kg。（規范性附錄）

豆芽中赤霉素殘留量的測定原理豆芽中赤霉素經提取后，先經乙酸乙酯液液萃取初步凈化，再利用凝膠滲透色譜（GPC）使目標化合物與機體干擾物分離，達到分離和凈化的目的。用反相高效液相色譜法-DAD檢測器進行色譜分析，采用標準物質的保留時間、輔助峰掃描光譜純度對照兩種方式對樣品峰進行定性，采用外標法以峰面積計算定量。試劑與材料甲醇（AR）。丙酮（AR）乙酸乙酯(AR)。50%硫酸溶液（V/V）。pH2.5的酸性水溶液：用50%稀硫酸調節水的pH為2.5。無水硫酸鈉（AR）冰醋酸（AR）。固相萃取小柱：WatersSEP-PAK，用時先經10ml甲醇洗脫活化，再用10mL水洗去殘留甲醇，保持萃取柱濕潤狀態待用。赤霉素標準溶液：精密稱取赤霉素（含量≥99.0%）0.1g（精確到0.0001g），用甲醇溶解并定容至100mL。此溶液每毫升相當于1.00mg赤霉素。本標準所用水除另有規定外，均為蒸餾水。儀器與設備高效液相色譜儀（配DAD檢測器、ZORBAXSBC18色譜柱）。旋轉蒸發儀。組織搗碎機。電動振蕩器凝膠滲透色譜（GPC）MiLLi-Q純水制備系統。分析步驟試樣制備稱取搗碎混勻的豆芽樣品50g（精確至0.1g）于錐形瓶中，加20mL蒸餾水和100mL丙酮，震蕩提取30min。混合物經布氏漏斗抽濾，殘渣放回錐形瓶中，再用100mL丙酮震蕩提取15min，用布氏漏斗抽濾，之后分別兩次用50mL丙酮洗滌錐形瓶并倒在濾渣上，抽濾。將上訴多次提取的丙酮-水提取液收集于1000mL圓底燒瓶中，在30℃水浴上，用旋轉蒸發器減壓蒸發除去丙酮。剩下的試樣水溶液用濾紙過濾，用50mL蒸餾水洗滌燒瓶并通過同一濾器過濾，用20mL蒸餾水分別兩次洗滌濾紙。將濾液轉入燒杯中，用50%的硫酸調節pH為2.5±0.2。將樣液轉入250mL分液漏斗中，以少量蒸餾水洗滌燒杯。然后用150mL乙酸乙酯分三次提取樣液，收集乙酸乙酯提取液，并通過約15g無水硫酸鈉濾入250mL圓底燒瓶中，于30℃水浴中旋轉蒸發至干。用15mL環己烷+乙酸乙酯（1：1）（v/v）混合液充分溶解，準備待分析樣品溶液10mL,進入滲透色譜柱分離，作用時間13min，流速4.7mL/min。收集6min～13min的流出液。收集凝膠滲透色譜（GPC）流出液，于30℃水浴中旋轉蒸發至干，再用2mL甲醇溶解；用0.45μm有機膜過濾后，供液相色譜分析。標準溶液系列的配制準確吸取標準儲備液0mL、0.50mL、1.00mL、1.50mL、2.00mL、5.00mL于100mL容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度。配制成濃度依次為0μg/mL、50μg/mL、100μg/mL、150μg/mL、200μg/mL、500μg/mL的標準溶液系列，供液相色譜分析。色譜條件色譜柱：ZORBAXSBC18柱（4.6mm×250mm×5um）或相當型號色譜柱。檢測波長：206nm。流動相：甲醇＋水（55+45）（v/v）（溶液用冰醋酸調節pH3.6）。流速：0.6mL/min；柱溫：40℃。測定分別吸取5.0uL標準使用液和試樣液注入液相色譜儀中，按照本標準C.4.3條件進行檢測，采用標準物質的保留時間、輔助峰掃描光譜純度對照兩種方式對樣品峰進行定性，采用外標法以峰面積計算定量。計算按外標法計算試樣中赤霉素的含量。見下式：C×1000×FX=———————m×1000式中：X—試樣中赤霉素的含量，單位為毫克每千克（mg/kg）；C—樣品測定液中赤霉素的含量，單位為微克每毫升（μg/ml）F—稀釋倍數；m—試樣的取樣量，單位為克（g）；計算結果保留兩位有效數字。精密度在重復性條件下獲得的兩次獨立測定結果的絕對差值不得超過算術平均值的10%。檢出限在本試驗條件下，豆芽中赤霉素的定量檢測下限為0.20mg/kg。（規范性附錄）

豆芽中福美雙殘留量的測定原理豆芽中殘留的福美雙與鹽酸-氯化亞錫在密封反應瓶中供熱放出二硫化碳，用氣相色譜法（FPD）測定，以保留時間定性，外標法峰面積定量。試劑與材料鹽酸(AR)。5mol/L鹽酸溶液：量取42mL鹽酸定容至100mL。氯化亞錫(AR)。二硫化碳(AR)。二氯甲烷(AR)。鹽酸-氯化亞錫溶液：稱取2gSnCl2·2H2O溶于100mL5moL/L鹽酸溶液中。處理水：經純水制備系統制備的去離子水煮沸數分鐘，冷卻后代用。福美雙標準溶液：精