1、實驗三 細菌的形態觀察 一、實驗目的學習并掌握細菌的簡單染色、革蘭氏染 色以及芽孢染色法2. 初步認識細菌的形態特征3.鞏固油鏡的使用方法和無菌操作技術二、實驗原理簡單染色原理： 微生物細胞中含有大量的蛋白質等兩性電解質：在酸性溶液中結合質子帶正電；在堿性溶液中給出質子而帶負電。等電點一般在pH=25。所以，在中性、堿性或弱酸性溶液中，微生物細胞通常帶負電荷。堿性染料在電離時，染色部分帶正電荷，容易與帶負電荷的菌體結合使之著色。經染色后的菌體細胞與背景形成鮮明的對比，在顯微鏡下很容易觀察。革蘭氏染色原理丹麥C.Gram創立，用于細菌分類學研究細菌細胞壁的結構 G+的細胞壁主要由肽聚糖形成的網狀

2、結構組成、壁厚、類脂含量低，經乙醇脫色細胞壁脫水、使肽聚糖層的網狀結構孔徑縮小，透性降低，從而使結晶紫-碘復合物不易被洗脫而保留在細胞內，呈初染液結晶紫的紫色。 G細胞壁含肽聚糖層較薄，類脂含量高，乙醇脫色時，類脂被乙醇溶解，細胞壁透性增大，使結晶紫-碘復合物易被洗脫，經番紅復染后，而使細胞染上復染液的紅色。 芽孢染色的原理 細菌的芽孢壁厚、不易著色，用著色力強的染色劑孔雀綠通過加熱或延長染色時間而使菌體和芽孢著色，已著色的菌體水洗后可脫色，已著色的芽孢不易被洗脫，再經番紅復染后，芽孢仍保留初染液的綠色，而菌體和芽孢囊被染成復染液的紅色。四、實驗步驟1.簡單染色（枯草桿菌） 涂片 干燥 固定

3、染色（結晶紫染色1min） 水洗 干燥 鏡檢并繪圖枯草芽孢桿菌 大腸桿菌金黃色葡萄球菌3 枯草桿菌芽孢的觀察六、問題與討論1.要得到正確的革蘭氏染色結果必須注意哪些操作？哪一步是關鍵？為什么?2.你認為制備細菌染色標本時，尤其應該注意哪些環節？ P28，2（1）3.為什么要求制片完全干燥后才能用油鏡觀察？P28，2（2） 4.說明芽孢染色法的原理。用簡單染色法能否觀察到細菌芽孢？P 32，2（1） 預習下次實驗的準備放線菌的插片培養接種位置上次實驗習題解答通過本次實驗，在防止培養基的污染與防止細菌的擴散方面，你學到些什么？有什么體會？(1) 防止培養基的污染 培養基營養豐富，微生物無時不在，無處不有，已滅菌的培養基，要防止試管塞、瓶塞脫落，一旦脫落或松動，都可能導致培養基污染；另外試管塞、瓶塞要用雙層不報紙扎緊，以防脫落；已裂口的試管、三角瓶或其他器皿，不能用作制備培養基的容器。（2）防止細菌的擴散細菌廣泛存在于自然界，生存能力很強。在科學研究和一般性實驗中，若以細菌特別是以病原菌為材料時，要特別小心，在接種和培養的各個環節要防止細菌擴散，接種工具要灼燒徹底，用過的菌種要滅菌后再洗刷，接種完畢操作人員的手要嚴格消毒，必要時，操作人員要戴手套、袖套、口罩乃至采取全身性防護措施。（3）體會微生物實驗不同于其他生物學實驗，無菌操作非常重要，在做微生物實驗的整個過程中，要樹立無菌概念，