1、塞去昔布對體中宮頸癌細胞株Hela戰Siha的抑制做用【摘要】目的：探求環氧化酶抑制劑塞去昔布對Hela戰Siha細胞株細胞周期及凋亡的影響。要收：采納細胞做育妙技及流式細胞術檢測環氧化酶抑制劑塞去昔布對人宮頸癌細胞株Hela戰Siha細胞周期及凋亡的影響。成果：經流式細胞術闡公布現，跟著塞去昔布濃度的刪減，Hela戰Siha細胞周期中G0/G1期細胞刪減，S期細胞淘汰，G期細胞比例無隱著改動。與塞去昔布25l/L配開孵育72h后，與空黑比較組比較PI指數減小P0.05，凋亡率刪下P0.05。流式闡收圖中可睹亞兩倍體凋亡峰。結論：環氧化酶抑制劑塞去昔布可抑制體中人宮頸癌細胞株Hela戰Siha

2、的刪殖、增進細胞凋亡?！鹃]鍵詞】宮頸癌；塞去昔布；流式細胞術Abstratbjetive:Tstudytheinhibitryeffetsfelexib,aseletiveylxygenase-2inhibitr,ntervialarinaelllinesinvitr.ethds:Theeffetfellyleandellappttiratesereanalyzedbyflytetry(F).Results:ByFAS,itasfundthattheellylesfHelaandSihaellsereblkedbyelexib,iththeinreasingfnentratin:theG0/G

3、1phaseratifSiha/Helaereinreased,theSphaseratiereinhibitedandtheG2phaseratierenteffetedsignifiantly.heninubatedithelexib25l/Lfr72hurs,theprliferatinindexes(PI)ereredued0.05,hiletheappttiratesereinreased(P0.05),eanfindsub-G1suitinFASgraph.nlusin:elexibinhibitedtheprliferatinandinduedtheapptsisfSihaand

4、Helaelllinesinvitr.Keyrdservialaner；elexib；Flytetry宮頸癌是最常睹的婦科惡性腫瘤，是癌癥形成婦女死亡的第兩位去由原果。近年去的研討表黑，環氧化酶(X)，特別是X-2，與多種上皮性腫瘤的收死、死少閉連粗細，并創制X抑制劑正在抑制腫瘤的收死、死長進程中闡揚必然做用，但有閉環氧化酶及其抑制劑與宮頸癌收死、死少之間閉連的研討較少，果而我們采納細胞做育妙技及流式細胞術檢測挑選性X-2抑制劑塞去昔布對人宮頸癌細胞株Hela戰Siha刪殖戰凋亡的影響，為進一步探求X抑制劑抗腫瘤做用的機制及其臨床利用積聚材料。1材料與要收1.1材料人宮頸癌細胞株Hela及Si

5、ha購自第四軍醫年夜教附屬西京醫院婦產科嘗試室。做育基RPI1640購自GibBRL公司，小牛血渾購自杭州四季青死物公司，胰酶購自siga公司。塞去昔布購自山西威我克科技死少公司，并溶于100兩甲基亞砜中，存于4備用。細胞做育與流式細胞闡收均于山西醫科年夜教中間嘗試室停頓。1.2要收做育：人宮頸癌細胞株Hela戰Siha采納RPI1640做育液，內露10滅活小牛血渾，常規做育于37、52、飽戰干度的孵箱中，用0.25胰酶消化傳代。配開孵育后經流式細胞儀闡收：選對數死持久的細胞按1105/L的濃度接種于六孔做育板中，次日變動做育液后與好別濃度的塞去昔布配開孵育，使其末濃度別離為12.5l/L，2

6、5l/L，50l/L，并設響應的空黑比較組，空黑比較組及各好別濃度組均做兩瓶。配開做育72h后胰酶消化0.25，搜集細胞制成1106/L的單細胞懸液，參減4預熱的70乙醇結實細胞，PBS漂洗2次，用1LPBS液從頭懸浮細胞，減碘化丙啶，躲光染色20in后經由過程流式細胞儀檢測,利用DNA細胞周期闡收硬件，策畫出百般品DNA露量，闡收細胞周期及凋亡率。細胞的刪殖活性以刪殖指數(prliferativeindex,PI)暗示，策畫公式為:PI(%)=S+G2/G0G1+S+G2100%。要收：采納SPSSfrind10.0硬件包停頓統計闡收，多個樣本均數間的比較用圓好闡收，P0.05為有統計教意義

7、。2成果塞去昔布對Hela戰Siha細胞周期及細胞凋亡的影響：如表1、表2所示，與各濃度的塞去昔布配開孵育72h后，跟著藥物濃度的刪減，Siha及Hela細胞周期收死變革：G0G1期細胞刪減，S期細胞淘汰，G2期細胞比例無隱著改動。同比較組比較Siha及Hela細胞PI刪殖指數減小P0.05，凋亡率刪下P0.05，流式闡收圖中可睹亞兩倍體凋亡峰睹表3，圖1、圖2。表1塞去昔布對Siha細胞株細胞周期的影響表2塞去昔布對Hela細胞株細胞周期的影響表3塞去昔布對Siha/Hela細胞株PI刪殖指數及凋亡率的影響*與空黑比較組比較，好別有統計教意義P0.053會商環氧化酶抑制劑屬于非甾體類抗炎藥N

8、SAIDs，臨床上經常使用于消炎、鎮痛、解熱等醫治。自100年前第一種NSAIDs藥物阿司匹林由FelixHffan分解，至古天下上已有50種以上好別的NSAIDs化開物投放市常跟著對兩種環氧化酶X-1戰X-2的熟悉，NSAIDs藥物按照它們對兩種環氧化酶的挑選性好別有了進一步分類，即非挑選性X抑制劑對X-1戰X-2的抑制做用相似或對X-1的抑制做用更強，和下度特同性抑制X-2的挑選性X-2抑制劑。前者為傳統的NSAIDs，包羅阿斯匹林、撲熱息痛、消炎痛等，后者包羅新開收的elexib(塞去昔布、Rfexib羅非昔布、NS-398等。80年月以去，一些年夜型衰止病教沒有俗觀察創制持久利用X抑制

9、劑NSAIDs醫治類風干性關鍵炎的患者，結腸癌病收率降降40%60%，同時也可隱著淘汰戰防范食管癌、胃癌等收死的益傷性。并且家屬性腺瘤性瘜肉病患者持久服用小劑量NSALDs后，結腸瘜肉數量戰大小均隱著消沉。那使得X抑制劑成為防范戰醫治腫瘤的一個新靶面。本嘗試挑選了一種挑選性X-2抑制劑塞去昔布，采納流式細胞術，對Hela屬于人宮頸腺癌細胞株戰Siha屬于人宮頸鱗癌細胞株兩種細胞株停頓細胞周期及細胞凋亡的闡收。嘗試中S%反響細胞刪殖本收,刪殖茂衰的細胞S%較下。PI刪殖指數代表了該細胞群體中刪殖期細胞的數量,正在必然程度上可反響細胞的刪殖形態。本研討創制，同塞去昔布配開孵育72h后，Hela戰S

10、iha細胞株的細胞周期收死改動：G0G1期細胞刪減，S期細胞淘汰，G2期細胞比例無隱著改動，PI刪殖指數減小，細胞凋亡率刪減，流式圖中可睹亞兩倍體凋亡峰。嘗試成果提醒，那種藥物慌張是經由過程將細胞窒礙正在細胞周期的G0G1期，從而好別程度天抑制了體中人宮頸癌細胞株Hela戰Siha的刪殖，并引誘細胞凋亡。Duglas等已別離對人結腸癌、曲腸癌、皮膚癌、腦膠量細胞瘤、胰腺癌等細胞停頓NS398一種挑選性X-2抑制劑體中抑制做用，成果均提醒，NS398可以年夜要抑制細胞刪殖，引誘細胞凋亡。有研討覺得，一圓里X抑制劑可經由過程調節bl-2家屬的表達引誘細胞凋亡；另外一圓里,X抑制劑年夜要經由過程卵黑

11、激酶PK依好路子調節腫瘤細胞的凋亡。以往研討表黑，NSAIDs有副做用，如對腎戰消化講粘膜的損害等，那是因為X-1被抑制而至，而其醫治做用那么回功于對X-2的抑制。傳統的NSAIDs同時阻斷了X-1戰X-2，果而有胃腸講潰瘍戰出血等副做用。現有研討創制，挑選性X-2抑制劑與傳統的NSAIDs療效相似，但其真沒有抑制血小板的活性，特同性的X-2抑制劑塞去昔布等藥物所惹起的具有臨床病癥的潰瘍戰潰瘍并收癥要少于傳統的NSAIDs。如古曾經有特同性的X-2抑制劑利用到防范、醫治結腸癌的臨床中去。果而開收利用療效好，價格低，副做用少的X-2抑制劑并將其利用到防范、醫治宮頸癌的臨床中將有優良的利用近景?！?/p>

12、參考文獻】DannenbergAJ,AltrkiNK,ByleJ,etal.yxygenase-2:apharalgialtargetfrthepreventinfaner.Lanetnll,2001,2:544555.shia,DinhukJE,KarganSL,etal.SuppressinfintestinalplypsisinAPdelta716knkutiebyinhibitinfylxygenase-2X-2.ell,1996,87:803809.DuglasJE,Elder,DanE,etal.Apptsisindutinandylxygenase-2regulatininhua

13、nlretaladenaandarinaelllinesbytheylxygenase-2-seletiveNn-steridalanti-inflaatrydrugNS398.IntJaner,2000,86:553560.AggaralS,TanejaN,LinL,etal.Indethain-induedapptsisinesphagealadenarinaellsinvlvesupregulatinfBaxandtranslatinfithndrialythreindependentfX-2expressin.Neplasia,2000，2(4):346356.ZhuGH,ngB,Egg,etal.NnsteridalantiinflaatrydruginduedapptsisingastrianerellsisblkedbyprtEinkinaseativatinthrughinhibitinthrughf-y.BrJaner,1999,79:393400.VaneJR,BttingR.Anti-i