1、中國藥典2015年版非無菌藥品微生物限度標準(通則1107) 解析楊曉莉陜西省食品藥品檢驗所2015年08月16日主要內容（一） USP、BP、JP等微生物限度標準的介紹和對比（二） 2015年版 “非無菌藥品微生物限度標準（通則1107）”修訂內容（三）2015年版“純化水” 微生物限度檢查（四）執行及制定藥品微生物限度標準注意事項（一）、USP、BP、JP微生物限度標準的介紹、對比1.美國藥典：Microbiological Attributes of NonsterilePharmaceutical Product 按照給藥途徑制訂微生物限度標準 沒有收載含藥材原粉的口服原料藥，也沒用收

2、載草藥（herbal） 表1可接受的非無菌藥品的微生物限度標準與EP7.0、JPX VI標準一致 表2可接受的非無菌藥用輔料微生物限度標準與EP7.0、JPX VI標準一致 按照膳食補充劑管理，分為含中藥材和不含中藥材兩大類，其中“含中藥材的”微生物標準分7類。美國藥典： Microbiological Attributes ofNonsterile Nutrinal and Dietary Supplements需氧菌總數 霉菌酵母菌總數分類控制菌（cfu/g或cfu/mL) （cfu/g或cfu/mL)耐膽鹽革蘭陰性菌不得過103；1.干燥或粉末藥材105103沙門菌/10g2.代煎煮藥材

3、105104103103大腸埃希菌/10g3.粉末狀植物提取物大腸埃希菌&沙門菌/10g4.含植物藥材的膳食補充劑104104103103大腸埃希菌&沙門菌/10g5.酊劑/6.流浸膏7.合劑104102103101/USP表1 可接受的非無菌藥品的微生物限度標準需氧菌總數 霉菌、酵母菌總數（cfu/g、 cfu/mL) （cfu/g、 cfu/mL)給藥途徑控制菌非液體口服制劑液體口服制劑直腸給藥制劑103102103102101102大腸埃希菌不得檢出(1g或1mL)大腸埃希菌不得檢出(1g或1mL)/金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌不得檢出(1g或1mL ）口腔黏膜給藥制劑齒齦給藥制劑102

4、102101101金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌不得檢出(1g或1mL）金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌不得檢出(1g或1mL）皮膚表面給藥制劑鼻給藥制劑102102102102102101101101101102金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌不得檢出(1g或1mL ）金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌不得檢出(1g或1mL）金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、白色念球菌不得檢出(1g或1mL）金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌不得檢出(1貼)耳給藥制劑陰道給藥制劑貼膏劑（限含粘貼面及其背面的1貼）金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、耐膽鹽革蘭陰性桿菌不得檢出(1g或1mL）吸入用給藥制劑（霧狀液體制劑的特殊要求）10210

5、1USP表2 非無菌藥用輔料微生物質量可接受的標準需氧菌總數（cfu/g或cfu/mL)霉菌和酵母菌總數（cfu/g或cfu/mL)103102藥用輔料2.歐洲藥典8.0版Microbiological Attributes of NonsterilePharmaceutical Product 按照給藥途徑制定微生物限度標準 對不宜進行殺菌的藥材原粉并被認可的設定特殊標準 表5.1.4-1中，除增加了：“EP對不易進行抗微生物處理的藥材原粉（動物、植物或礦物）并得到相關機構認可其TAMC限度可超過103cfu/g或cfu/mL的口服給藥制劑的特別規定。”外，其他與USP36版、 JPX VI

6、相同。 收載了中藥材（飲片）的微生物限度標準3類。EP8.0版5.1.8 草藥口服制劑的微生物限度A.用沸水浸泡和煎煮的含有草藥成分的含或不含有輔料的草藥制品（例如，添加或未添加芳香劑的草藥茶）需氧菌總數TAMC（2.6.12）限度：107CFU/g最大可接受計數結果 50000000CFU/g霉菌和酵母菌總數TYMC 限度：105CFU/g（2.6.12）最大可接受計數結果 500000CFU/g大腸埃希菌（2.6.31）限度：103CFU/g不得檢出（25g）沙門菌（2.6.31）EP8.0版5.1.8 草藥口服制劑的微生物限度B.含有草藥和/或其提取物，含或不含輔料，采用適宜的加工工藝或

7、預處理技術，使微生物含量低于本表中限值的草藥制品。需氧菌總數TAMC（2.6.12）限度：104CFU/g或CFU/mL最大可接受計數結果 50000CFU/g或CFU/mL霉菌和酵母菌總數TYMC 限度：102CFU/g或CFU/mL（2.6.12）最大可接受計數結果 500CFU/g或CFU/mL耐膽鹽革蘭陰性菌（2.6.31）限度：102CFU/g或CFU/mL不得檢出大腸埃希菌（2.6.31）沙門菌（2.6.31）不得檢出（25g或25mL）EP8.0版5.1.8 草藥口服制劑的微生物限度C.含有草藥和/或其提取物，含或不含輔料，經過加工工藝或預處理后，經證明不能有效降低微生物含量低于

8、表B中規定的草藥制品。需氧菌總數TAMC（2.6.12）限度：105CFU/g或CFU/mL最大可接受計數結果 50000CFU/g或CFU/mL限度：104CFU/g或CFU/ml最大可接受計數結果 50000CFU/g或CFU/mL霉菌和酵母菌總數TYMC（2.6.12）耐膽鹽革蘭陰性菌 限度：104CFU/g或CFU/mL（2.6.31）大腸埃希菌（2.6.31）不得檢出不得檢出（25g或25mL）沙門菌（2.6.31）3.JPV 12Microbiological Attributes of NonsterilePharmaceutical Product 按照給藥途徑制定微生物限度標

9、準 藥用輔料限度標準。 兩個限度標準與USP36、EP7.0標準一致 收載了中藥材（飲片）的微生物限度標準（herbal）3.JPV 12表1 藥用原料的微生物限度微生物限度標準（CFU/g或CFU/mL)1000100需氧菌總數（TAMC）霉菌和酵母菌總數（TYMC）3.JPV 12表2 非無菌制劑的微生物限度需氧菌總數 霉菌、酵母菌（CFU/g或 總數（CFU/g或給藥途徑控制菌CFU/ml)CFU/ml)吸入劑（液體）吸入劑（粉末）鼻用制劑2020金黃色葡萄球菌；銅綠假單胞菌金黃色葡萄球菌；銅綠假單胞菌金黃色葡萄球菌；銅綠假單胞菌100100100505050大腸埃希菌；金黃色葡萄球菌；

10、白色念球菌陰道給藥制劑耳用或局部給藥制劑（包括用于表皮的局部給藥制劑）100*50*金黃色葡萄球菌；銅綠假單胞菌直腸給藥制劑10001000100100未規定口服給藥制劑（固體）大腸埃希氏菌口服給藥制劑（液體）10050大腸埃希氏菌備注：“*”表皮局部給藥制劑，限度標準以“CFU/貼”標示。3.JPV 12表3 草藥及其制劑的微生物限度1類（CFU/g或 CFU/ml)2類（CFU/g或 CFU/ml)微生物類別需氧菌總數107104*105103103霉菌和酵母菌總數腸道細菌和其他革蘭陰性細菌大腸埃希菌沙門菌/10g102不得檢出不得檢出不得檢出金黃色葡萄球菌*備注：1、“*”表示限值未作規

11、定；2、第1類包括不需要通過沸水浴提取或者在使用前需要加入沸水的原料藥及輔料；第2類包括不需提取可直接使用的原料藥及輔料（包括原料粉末）。（二）中國藥典2015年版 “非無菌藥品微生物限度標準（通則1107）”修訂內容1、修訂思路2、2015版限度標準的制訂原則及總體結構3、2015版限度標準的各項具體規定1、修訂思路修訂思路（2）（1）將中國藥典2010版一、二、三部微生物限度標準項目進行對比、整合 。參考EP7.0、USP35、JP標準，修訂中國藥典的微生物限度標準。 采用一部的限度標準項目作為合并后限度標準的基礎。 采用清晰直觀的表格形式，按給藥途徑、分液體、固體性狀、列出各類藥品的限度

12、標準。（1）中國藥典2010版一、二、三部微生物限度標準的對比、合并對比：中國藥典2010附錄“藥品微生物限度”項目表“3.5陰道、尿道給藥制劑”需檢梭菌3.3用于表皮或黏膜完整的含藥材原粉2.3含豆豉、神曲等發酵原粉的制劑的局部給藥制劑一部3.2用于表皮或黏膜不完整的含藥材多于二、三部的內容2.2含藥材原粉的制劑原粉的局部給藥制劑一、二、三部微生物限度標準重疊、相同部分（1）中國藥典2010版一、二、三部微生物限度標準對比、合并合并：為了涵蓋中國藥典一、二、三部所有的限度標準規定，起草時采用一部的限度標準作為合并后限度標準的基礎。一部標準合并的標準二部標準三部標準（2）與歐洲藥典8.0、美國

13、藥典36版和日本藥局方比較，修訂中國藥典的微生物限度標準。 修訂菌數標準表述方式：指數形式10n，最大可接受限度值遵守2倍規則：-101CFU：最大可接受限度為20；-102CFU：最大可接受限度為200；-依此類推。（日局方X V無相應內容） 修訂檢查項目：-“需氧菌總數（TAMC）”替代“細菌數”-“耐膽鹽革蘭陰性菌”替代“大腸菌群”2、2015版限度標準的制定特點及總體結構 總體結構：前言+ 按給藥途徑分類標準+ 后語2、2015版限度標準的制定特點及總體結構 增訂檢查制劑類型：基于藥品的給藥途徑及對患者的潛在危害劃分風險等級來制定標準。-齒齦、皮膚制劑、呼吸道制劑；-增加原輔料、中藥提

14、取物、中藥飲片的控制。 兼顧國產藥品的特點，保留中國藥典對中藥制劑分類特點：-是否含藥材原粉，是否含豆豉、神曲；-是否接觸完整皮膚黏膜。 貼劑：-國外：貼劑規格統一，以“貼”為單位控制限度。-國內：貼膏劑(分貼劑、橡膠膏劑、凝膠膏劑)規格各異，以“10cm2”為單位控制限度。2015版限度標準的總體結構按給藥途徑分類給出標準：1.制劑通則、品種項下要求無菌的制劑及標示無菌的制劑和原輔料應符合無菌檢查法規定微生物限度標準2.3.4.用于手術、燒傷或嚴重創傷的局部給藥制劑應符合無菌檢查法規定非無菌化學藥品制劑、生物制品制劑、不含藥材原粉的中藥制劑1.口服給藥制劑（固體、液體）2.口腔黏膜給藥制劑、

15、齒齦給藥制劑、鼻用制劑3.耳用、皮膚給藥制劑4.呼吸道吸入給藥制劑5.陰道、尿道給藥制劑非無菌含藥材原粉的中藥制劑5.6.6.直腸給藥制劑（固體、液體）7.其他局部給藥制劑非無菌的藥用原料及輔料中藥提取物及中藥飲片有兼用途徑的制劑應符合各給藥途徑的標準1.固體口服給藥制劑（含/不含豆豉、神曲等發酵原粉）2.液體口服給藥制劑（含/不含豆豉、神曲等發酵原粉）3.固體局部給藥制劑（用于表皮或粘膜完整/不完整）7.4.固體局部給藥制劑（用于表皮或粘膜完整/不完整）3.2015版各項標準具體規定1. 制劑通則、品種項下要求無菌的制劑及標示無菌的制劑和原輔料，應符合無菌檢查法規定。2.用于手術、燒傷或嚴重

16、創傷的局部給藥制劑應符合無菌檢查法規定。例如：制劑通則中：【無菌】：注射劑、眼用制劑*、植入劑、沖洗劑【無菌】或【微生物限度】：散劑、凝膠劑、軟膏劑*、搽劑、洗劑、涂膜劑、鼻用制劑、氣霧劑、噴霧劑。品種正文項下：【無菌】受熱不穩定、制劑不能進行最終滅菌的無菌工藝產品。如：抗生素原料藥、抗生素粉針劑等。3.2015版各項標準具體規定例如：0105 眼用制劑 定義：眼用制劑系指直接用于眼部發揮治療作用的。 分類：眼用制劑可分為眼用液體制劑（滴眼劑、洗眼劑、眼內注射溶液等）、眼用半固體制劑（眼膏劑、眼用乳膏劑、眼用凝膠劑）、眼用固體制劑（眼膜劑、眼丸劑、眼內插入劑等）。眼用制劑也可以固態形式包裝，另

17、備溶劑，在臨用前配成溶液或混懸液。 檢查項： 【無菌】除另有規定外，照無菌檢查法（通則 1101）檢查，應符合規定。3.2015版各項標準具體規定例如：0109 軟膏劑 乳膏劑 定義：軟膏劑 系指原料藥物與油脂性基質混合物制成的均勻半固體制劑。乳膏劑 系指原料藥物溶解或分散于乳狀液基質中形成的均勻半固體制劑。 檢查項：【粒度】、【裝量】、【無菌】、【微生物限度】 【無菌】用于燒傷（除輕度燒傷或淺外）或嚴重創傷的軟膏劑與乳膏劑，照無菌檢查法（通則 1101）檢查，應符合規定。 【微生物限度】除另有規定外，照非無菌產品微生物限度檢查：微生物計數法（通則 1105）和控制菌（通則 1106）及非無菌

18、藥品微生物限度標準（通則 1107）檢查，應符合規定。3.2015版各項標準具體規定3.非無菌化學藥品制劑、生物制品制劑、不含藥材原粉的中藥制劑化學藥品制劑和生物制品制劑若含有未經提取的動植物來源的成份及礦物質還不得檢出沙門菌（10g或10ml）。3.2015版各項標準具體規定4.非無菌含藥材原粉的中藥制劑3.2015版各項標準具體規定5.非無菌的藥用原料及輔料6.中藥提取物及中藥飲片中藥研粉口服用貴細飲片、直接服用口服及泡服飲片3.2015版各項標準具體規定7.有兼用途徑的制劑8.霉變、長螨者應符合各給藥途徑的標準。以 不 合 格 論。（三）2015年版 純化水微生物限度檢查純化水檢測方法比

19、較 中國藥典2010年版（Ch.P 2010) 是將營養瓊脂(nutrientagar medium，NA)培養基和玫瑰紅鈉瓊脂(rose bengalagar medium，RA)培養基上的培養結果進行合并計數作為最終的報告值。純化水檢測方法比較國外藥典（EP 7.0 版、USP35 版）是采用一種培養基上的培養結果進行計數。在培養體系的選擇上，歐洲藥典與美國藥典也存在差異。歐洲藥典明確規定了一種培養基為R2A 瓊脂培養基，而美國藥典首先對所采用的方法不做強制性規定，即便是在推薦的方法中也不明確規定某一種培養基。純化水檢測方法存在問題 現行ChP 營養瓊脂培養基和玫瑰紅鈉瓊脂培養基的培養結果

20、合并計數的方式會帶來以下幾方面的問題: ( 1) 操作煩瑣 實驗人員檢測1 水樣需平行制備2 濾膜，分別貼至NA平板和A 平板，30 35 和23 28 分別培養。與EP7. 0 和USP35 只需制備1 張濾膜，貼至1 塊平板相比，增加了工作量和檢測費用。 ( 2) 計數結果不準確 由于最終結果是以2 種培養基上的菌落數合并計數進行結果報告，在這個過程中可能會有2 種計數結果的不準確。一是容易將A 平板上生長的細菌與NA 平板上的細菌重復計數造成最終計數結果偏高，也可能由于實驗人員誤將A 平板上生長的真菌當成細菌棄去不進行合并造成數據偏低。 ( 3) 國際交流不便 由于ChP 制藥用水微生物

21、檢查方法采用的是藥品微生物限度檢查法的培養基體系和培養條件，與國外藥典采用一種培養基進行測定有很大的差異，不利于企業的對外交流。三國藥典制藥用水計數方法比較標準純化水100cfu/mL，注射用水10cfu/100mL制藥用水微生物限度檢查新方法的研究，李玨，洪利婭，王知堅等；藥物分析雜志2014，34( 2)：376-379制藥用水檢測方法比較USP 在附錄1231制藥用水中對制藥用水制備過程中微生物的控制、數據的監測以及微生物計數方法給出的是推薦的計數方法，對用戶最終采用的檢驗方法并不做強制性的規定，建議用戶應結合自身水系統的穩態適時進行驗證，根據驗證結果確定適合該水系統的方法。USP不明確

22、，國內制藥企業數量眾多，對標準的理解能力和執行能力參差不齊，執行難。EP方法優越性較ChP2010如何？最大差異：培養基處方、時間檢測方法：平皿法&薄膜過濾法制藥用水微生物檢驗方法修訂標準提高研究工作第一階段參與單位：中國食品藥品監督檢驗研究院、黑龍江省食品藥品檢驗檢測所、深圳市藥品檢驗所第二階段參與單位：浙江省食品藥品檢驗研究院、陜西省食品藥品檢驗所、天津市食品藥品檢驗所制藥用水檢測方法課題研究課題方案：比較三個藥典檢測系統檢測結果。多個省份，不同類型企業，19家純水系統。5個實驗室，5000余數據。 方法：A：TSA，3035，48 120hr，薄膜過濾法B：TSA，3035，48 120

23、hr，平皿法E：R2A，3035，48 120hr，薄膜過濾法G：R2A，3035，48 120hr，平皿法I ：中國藥典2010年版結論：R2A靈敏度高，檢出率高。薄膜過濾法制藥用水檢測方法修訂 純化水微生物限度檢查方法【微生物限度】 取本品不少于1 ml，經薄膜過濾法處理，采用2A 瓊脂培養基，30 35 培養不少于5天，依法檢查（通則1105），1ml供試品中需氧菌總數不得過100 cfu。2A 瓊脂培養基處方及制備酵母浸出粉蛋白胨0.5g0.5g0.5g0.5g.0.5g0.3g0.024g0.3g15g酪蛋白水解物葡萄糖可溶性淀粉磷酸氫二鉀無水硫酸鎂丙酮酸鈉瓊脂純化水1000ml 純

24、化水微生物限度檢查方法（續）除葡萄糖、瓊脂外，取上述成分，混合，微溫溶解，調節pH值使加熱后在25的pH值為7.20.2，加入瓊脂，加熱溶化后，再加入葡萄糖，搖勻，分裝，滅菌。2A 瓊脂培養基適用性檢查試驗照非無菌產品微生物限度檢查：微生物計數法（通則1105）中“計數培養基適用性檢查”的胰酪大豆胨瓊脂培養基的適用性檢查方法進行，試驗菌株為銅綠假單胞菌和枯草芽孢桿菌，應符合規定。R2A適用性檢查試驗：測試菌株：銅綠假單胞菌、金黃色葡萄球菌接種量：不大于100cfu培養條件：3035培養不超過3天實際檢測：培養不少于5天，長時間培養，培養基水分散失較多執行中可能遇到的問題 擬修訂方法的實驗操作細

25、節實驗過程中發現，部分水樣在R2A培養基上培養至72h、96h，菌體個頭仍很小，難準確計數，如不在傘棚燈下觀察，極易漏檢。這種情況甚至會出現在培養的第5天，需延長培養時間至第7天才可準確計數。（四）、執行及制定藥品微生物限度標準意事項（四）、執行及制定藥品微生物限度標準注意事項1、執行范圍：-生產、貯存、銷售過程中的藥品-藥用原料、輔料-中藥提取物、中藥飲片-新藥標準-進口藥品標準復核-藥品質量考察及仲裁- （四）、執行及制定藥品微生物限度標準注意事項2、執行標準中注意事項：2.1 藥典標準出處-品種正文項下（微生物限度）要求，-附錄制劑通則下（微生物限度）要求，-附錄微生物限度檢查法中標準規

26、定。（四）、執行及制定藥品微生物限度標準注意事項2、執行標準中注意事項：2.2 無菌要求-正文或制劑通則要求無菌及標示無菌的制劑；-用于手術、燒傷及嚴重創傷的局部給藥制劑；-創傷程度難以判斷的局部給藥制劑，有安全性風險。（四）、執行及制定藥品微生物限度標準注意事項2.3 有兼用途徑的制劑應兼顧雙方標準并按照嚴 格的標準 執行。2.4 沙門菌檢查：-檢查對象：口服制劑-特點1：含臟器提取物（不區分是否為中藥制劑）；-特點2 ：含藥材原粉（之前為含動物藥材原粉，不再界定是否為動物藥材）-表1規定化學藥品制劑和生物制品制劑若含有未經提取的動物來源成分及礦物質還不得檢出沙門菌（10g或10ml）。（四

27、）、執行及制定藥品微生物限度標準注意事項2、執行標準中注意事項：2.5 限度標準之外的控制要求:-標準未能涵蓋所有制劑，對某些制劑可能不全面-彌補標準空白：根據原輔料及制劑的性質、生產工藝特點及使用途徑，對其他可能具有潛質危害的微生物增加控制項。（四）、執行及制定藥品微生物限度標準注意事項3、制定產品的微生物限度標準時應注意的事項3.1制定新藥的微生物限度標準時-102 cfu 100 cfu，最大可接受限度為200；基于數據分析和風險評估制定標準。-原輔料、給藥途徑及對患者的潛在危害綜合考慮到控制菌標準；產品特性：是否適合微生物生長？是否有抑制微生物生長的能力？用藥對象：新生兒、嬰兒、體弱者、病患傷殘（四）、執行及制定藥品微生物限度標準注意事項3、制定產品的微生物限度標準時應注意的事項3.2 特殊給藥途徑產品的標準限度-嚴格控制潛在致病菌，從安全性角度考慮是否需無菌控制。3.3 原輔料、中藥提取物及中藥飲片-參考制劑的要求及生產工藝特點設置控制菌檢查要求。（四）、執行及制定藥品微生物限度標準示例例1、加強染菌量的控制維生素A醋酸酯粉（制劑中間體）-丹麥產惠氏制藥有限公司【微生物限度】細菌數+霉菌及酵母菌總數 應20cfu/g例2、加強控制菌檢查短桿菌肽（原料藥） -匈牙利產中美上海施貴寶【微生物限度】細菌數應100cfu/g大腸埃希菌、