1、人教版 選修1課題1 DNA的粗提取與鑒定專題 5DNA和蛋白質(zhì)技術(shù)課題1DNA的粗提取和鑒定一、基礎(chǔ)知識1、提取DNA的方法（1）DNA的溶解性DNA和蛋白質(zhì)等其他成分在不同濃度的NaCl溶液中溶解度不同，利用這一特點，選擇適當?shù)柠}溶液就能使DNA充分溶解，而使雜質(zhì)沉淀，或者相反，以達到分離目的。DNA不溶于酒精溶液，但是細胞中的某些蛋白質(zhì)則溶于酒精。利用這一原理，可以將DNA與蛋白質(zhì)進一步分離。（2）DNA對酶、高溫和洗滌劑的耐受性蛋白酶能水解蛋白質(zhì)，但是對DNA沒有影響。大多數(shù)蛋白質(zhì)不能忍受6080的高溫，而DNA在80 以上才會變性。洗滌劑能夠瓦解細胞膜，但對DNA沒有影響。在沸水浴的

2、條件下，DNA遇二苯胺會被染成藍色。因此，二苯胺可以作為鑒定DNA的試劑。DNA+冰醋酸、少量濃硫酸+二苯胺 藍色物2、DNA的鑒定100在沸水浴的條件下，DNA遇二苯胺會被染成藍色。因此，二苯胺可以作為鑒定DNA的試劑。DNA+冰醋酸、少量濃硫酸+二苯胺 藍色物100二、實驗設(shè)計（一）實驗材料的選取1、材料：魚卵、豬肝、菜花、香蕉、雞血、哺乳動物的紅細胞、獼猴桃、洋蔥、豌豆、菠菜、在液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)的大腸桿菌。（從中選取23種實驗材料）2、原則：凡是含有DNA的生物材料都可以考慮，但選用DNA含量相對較高的生物組織，成功的可能性更大（二）破碎細胞，獲取含DNA的濾液1、動物細胞的破碎：以雞血

3、為例，在雞血細胞液中加入一定量的蒸餾水，同時用玻璃棒攪拌，過濾后收集濾液即可。2、植物細胞的破碎：提取洋蔥DNA時，在切碎的洋蔥中加入一定的洗滌劑和食鹽，進行充分的攪拌和研磨，過濾后收集研磨液。（三）去除濾液中的雜質(zhì)方案一：在濾液中加入NaCl，使NaCl溶液濃度為2mol/L，過濾除去不溶的雜質(zhì)，再調(diào)節(jié)NaCl溶液濃度為0.14mol/L，析出DNA，過濾去除溶液中的雜質(zhì)，再用2mol/L的NaCl溶解DNA。方案二：直接在濾液中加入嫩肉粉，反應(yīng)1015min，嫩肉中的木瓜蛋白酶能夠分解蛋白質(zhì)。方案三：將濾液放在6075的恒溫水浴中保溫1015，注意嚴格控制溫度范圍。（四） DNA的析出與鑒

4、定1、DNA的析出：將處理后的溶液過濾，加入與濾液體積相等的、冷卻的酒精溶液（體積分數(shù)為95%），靜置23min，溶液中會出現(xiàn)白色絲狀物，這就是粗提取的DNA。用玻璃棒沿一個方向攪拌，卷起絲狀物，并用濾紙吸去上面的水分。2、DNA的鑒定：取兩支20mL的試管，各加入物質(zhì)的量濃度為2mol/L的NaCl溶液5mL，將絲狀物放入其中一支試管中，用玻璃棒攪拌，使絲狀物溶解。然后，向兩支試管中各加入4mL的二苯胺試劑?；旌暇鶆蚝?，將試管置于沸水中加熱5min，待試管冷卻后，比較兩支試管中溶液顏色的變化，看看溶解有DNA的溶液是否變藍。三、操作提示1、以雞血為實驗材料時，每100mL血液中需要加入3g檸

5、檬酸鈉，防止血液凝固。2、加入洗滌劑后，動作要輕緩、柔和，否則容易產(chǎn)生大量的泡沫，不利于后續(xù)步驟的操作。加入酒精和用玻璃棒攪拌時，動作要輕緩，以免加劇DNA分子的斷裂，導(dǎo)致DNA分子不能形成絮狀沉淀。3、二苯胺試劑要現(xiàn)配現(xiàn)用，否則會影響鑒定的效果。雞血細胞液中DNA的粗提取實驗流程圖2mol/L雞血細胞液中DNA的粗提取實驗流程圖過濾取紗布上的濾物紗布過濾再次溶解DNA2mol/LNaCl溶液取濾物雞血細胞液中DNA的粗提取實驗流程圖加冷酒精使DNA析出（純化）冷酒精雞血細胞液中DNA的粗提取實驗流程圖DNA的鑒定DNA的粗提取與鑒定實驗原理DNA在不同濃度NaCl溶液中溶解度不同DNA與其他

6、細胞成分在酒精中溶解度不同DNA和蛋白質(zhì)對酶、高溫和洗滌劑耐受性不同DNA與二苯胺呈現(xiàn)藍色反應(yīng)DNA粗提取選擇適宜材料破碎細胞DNA的溶解和析出DNA的純化鑒定DNA與二苯胺混合，沸水浴，呈現(xiàn)藍色反應(yīng)總結(jié)：1. 下列關(guān)于DNA粗提取與鑒定的說法正確的是 A氯化鈉的濃度越低，對DNA的溶解度越大 B人血也可代替雞血進行實驗 C檸檬酸鈉的主要作用是加速血細胞破裂 DDNA不能溶于酒精2. 在破碎雞血細胞時，要先加入20ml的蒸餾水，其作用是A. DNA溶解于水 B 血細胞破裂，DNA釋放C稀釋血液，防止凝固 D 有利于攪拌3. 若選擇的實驗材料為植物細胞，破碎細胞時要加入一定量的洗滌劑和食鹽，加入食鹽的目的是A. 利于DNA的溶解 B. 分離DNA和蛋白質(zhì)