1、血清學檢驗及血清學檢驗及其新技術其新技術 報告人 ： 王麗麗報告日期：2013-05-Company LogoContents概述概述1臨床生化檢查臨床生化檢查23臨床免疫學及血清學檢查臨床免疫學及血清學檢查血清學新技術血清學新技術Company Logo臨床生化檢查臨床生化檢查l1常用生化分析技術l2參考值、參考區間與醫學決定水平l3蛋白質測定l4糖類及其代謝產物的測定l5脂類與脂蛋白測定l6電解質測定l7非蛋白氮類化合物測定l8酶活力測定l9激素及其代謝產物的測定l10血氣分析Company Logo臨床免疫學及血清學檢查臨床免疫學及血清學檢查l1總補體和單個成分的測定l2免疫球蛋白測定l

2、3免疫復合物的測定l4自身抗體的檢測l5腫瘤免疫學檢查Company LogoHot TiplHow do I incorporate my logo to a slide that will apply to all the other slides? On the View menu, point to Master, and then click Slide Master or Notes Master. Change images to the one you like, then it will apply to all the other slides. 概述概述Company L

3、ogo概述概述Company Logo全血、血清和血漿全血、血清和血漿l一般的，臨床檢驗采用的血液標本分為：全血、血清和血漿l全血：血液經抗凝處理后的全部血液。l血漿：離心除去血細胞后所得到的淡黃色液體。l血清：如血液不經抗凝處理，讓他自行凝固，則在抽血后的一段時間內，血液會自動在一系列凝血因子的作用下發生凝集，血液首先凝固成一個整體，再經過一段時間或用離心機離心，血液中凝固的部分會與一些清澈淡黃色的液體分離開，這些液體稱為血清。 概述概述Company Logo血漿、血清血漿、血清l血漿與血清的區別是血清中不含纖維蛋白原等凝血因子。 l全血-主要用于血細胞成分的檢查l血清和血漿，主要用于大部

4、分臨床化學檢查和免疫學檢查 血清-多用于血液生化、免疫等方面的測定； 血漿多用于凝血等方面的測定。 概述概述Company Logo血清的主要成分血清的主要成分l各種血漿蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生長因子、激素、無機物等l這些物質對促進細胞生長或抑制生長活性是達到生理平衡的。對血清的成分和作用的研究雖有很大進展，但血清的成份可能有幾百種之多，目前對其準確的成份、含量及其作用機制仍不清楚，尤其是對其中一些多肽類生長因子、激素和脂類等尚未充分認識 概述概述Company Logo血清的主要作用血清的主要作用l提供基本營養物質l提供激素和各種生長因子l提供結合蛋白：結合蛋白作用是攜帶重要地低分子

5、量物質，如白蛋白攜帶維生素、脂肪、以及激素等，轉鐵蛋白攜帶鐵。結合蛋白在細胞代謝過程中起重要作用l提供促接觸和伸展因子使細胞貼壁免受機械損傷l對培養中的細胞起到某些保護作用概述概述Company LogoContents概述概述1臨床生化檢查臨床生化檢查2臨床免疫學及血清學檢查臨床免疫學及血清學檢查3血清學新技術血清學新技術Company Logo臨床生化檢查臨床生化檢查l1常用生化分析技術l2參考值、參考區間與醫學決定水平l3蛋白質測定l4糖類及其代謝產物的測定l5脂類與脂蛋白測定l6電解質測定l7非蛋白氮類化合物測定l8酶活力測定l9激素及其代謝產物的測定l10血氣分析臨床生化檢驗臨床生化

6、檢驗Company Logo一、血常規一、血常規l血常規檢查一般取用血常規檢查一般取用末梢血檢查末梢血檢查，如指尖、耳，如指尖、耳垂部位的血。在經過垂部位的血。在經過血液細胞分析儀器血液細胞分析儀器，電腦，電腦報告結果，此項目已成為檢查病畜的一個慣例，報告結果，此項目已成為檢查病畜的一個慣例，所以稱之為血常規。所以稱之為血常規。l將采取的抗凝全血注入將采取的抗凝全血注入5ml5ml的真空采血管，搖勻的真空采血管，搖勻后去掉密封上蓋，將樣本放到采血針下吸樣，后去掉密封上蓋，將樣本放到采血針下吸樣，儀器顯示結果后打印。儀器顯示結果后打印。臨床生化檢驗臨床生化檢驗Company Logo一、血常一、

7、血常規規- -臨床臨床意義意義l血常規檢查在全身體檢中是基本的體檢項目，血常規檢查在全身體檢中是基本的體檢項目，它的意義在于可以發現許多全身性疾病的早期它的意義在于可以發現許多全身性疾病的早期跡象，診斷是否貧血，是否有血液系統疾病，跡象，診斷是否貧血，是否有血液系統疾病，反應骨髓的造血功能等。反應骨髓的造血功能等。l例如：通常感染性疾病會使白細胞的數值和分例如：通常感染性疾病會使白細胞的數值和分類發生變化；貧血時血紅蛋白或紅細胞的檢驗類發生變化；貧血時血紅蛋白或紅細胞的檢驗值會降低；而血小板的減少會導致容易出血或值會降低；而血小板的減少會導致容易出血或出血后不容易止住，而血小板增多會增多血栓出

8、血后不容易止住，而血小板增多會增多血栓發生的可能；另外，有些腫瘤、變化反映性疾發生的可能；另外，有些腫瘤、變化反映性疾病也可以引起血常規檢查部分數值的變化。病也可以引起血常規檢查部分數值的變化。臨床生化檢驗臨床生化檢驗Company Logo一、血常一、血常規規- -常規常規參數參數臨床生化檢驗臨床生化檢驗Company Logo一、一、血常規血常規- -常規參數的臨床意義常規參數的臨床意義l 血紅蛋白（Hb） 、 紅細胞（RBC）臨床生化檢驗臨床生化檢驗Company Logo一、血常一、血常規規- -常常規參數的臨床意義規參數的臨床意義l 白細胞（WBC） 、 中性粒細胞臨床生化檢驗臨床生

9、化檢驗Company Logo一、血常一、血常規規- -常常規參數的臨床意義規參數的臨床意義l嗜酸性粒細胞臨床生化檢驗臨床生化檢驗Company Logo一、血一、血常規常規- -常規常規參數的臨床意義參數的臨床意義l 淋巴細胞 、 單核細胞臨床生化檢驗臨床生化檢驗Company Logo一、血常規一、血常規- -常規參數的臨床意義常規參數的臨床意義l血小板（PLT）臨床生化檢驗臨床生化檢驗Company Logo一、血常規一、血常規- -常規參數的臨床意義常規參數的臨床意義l 血沉 、 網織紅細胞計數臨床生化檢驗臨床生化檢驗Company Logo二、血清生化檢驗二、血清生化檢驗- -血液化

10、學檢查血液化學檢查l血清電解質和酸堿平衡檢測：血清鉀、鈉、氯、血清電解質和酸堿平衡檢測：血清鉀、鈉、氯、鈣、無機磷，血氣與酸堿平衡，血液乳酸鈣、無機磷，血氣與酸堿平衡，血液乳酸l血清酶檢測：血清轉氨酶、血清堿性磷酸酶血血清酶檢測：血清轉氨酶、血清堿性磷酸酶血清清-谷氨酰轉移酶、血清肌酸激酶血清乳酸脫谷氨酰轉移酶、血清肌酸激酶血清乳酸脫氫酶、血清淀粉酶、超氧化物歧化酶、谷胱甘氫酶、血清淀粉酶、超氧化物歧化酶、谷胱甘肽過氧化物酶、血清銅氧化酶、血清膽堿酯酶肽過氧化物酶、血清銅氧化酶、血清膽堿酯酶 l血清其他生化指標檢測：血糖、血清蛋白質、血清其他生化指標檢測：血糖、血清蛋白質、血清膽紅素、血清膽固

11、醇、血清甘油三酯血清血清膽紅素、血清膽固醇、血清甘油三酯血清肌酐、血清尿素肌酐、血清尿素 、血清尿酸、維生素、血清尿酸、維生素（A/B/C.A/B/C.）臨床生化檢驗臨床生化檢驗Company Logo二、血清生化檢驗二、血清生化檢驗- -內容內容臨床生化檢驗臨床生化檢驗Company Logo二、血清生化檢驗二、血清生化檢驗- -輔助診斷輔助診斷l尿常規可以輔助診斷泌尿系統及其鄰尿常規可以輔助診斷泌尿系統及其鄰近器官疾病，查不出腎上腺，要查腎近器官疾病，查不出腎上腺，要查腎上腺功能，需要查腎上腺素、去甲腎上腺功能，需要查腎上腺素、去甲腎上腺素、多巴胺、促腎上腺皮質激素上腺素、多巴胺、促腎上腺

12、皮質激素等腎上腺分泌的激素等腎上腺分泌的激素臨床生化檢驗臨床生化檢驗Company Logo二、血清生化檢驗二、血清生化檢驗臨床生化檢驗臨床生化檢驗Company Logo二、血清生化檢驗二、血清生化檢驗l1.血糖 【臨床意義】對于胰島素，糖皮質激素、腎上腺素等分泌不足或過多有鑒別意義，對于糖尿病的診斷和糖尿病的治療效果有一定意義。l2.二氧化碳結合力 【臨床意義】對于判斷代謝性或呼吸性酸中毒、堿中毒有一定意義。臨床生化檢驗臨床生化檢驗Company Logo二、血清生化檢驗二、血清生化檢驗l3.尿素氮（BUN） 【臨床意義】判定腎功能。增高可見于各種原因的腎功能損害；肝功能嚴重損害時減低。l

13、4.肌酐 【臨床意義】對急、慢性腎炎的診斷和預后有重要意義l5.尿酸 【臨床意義】增高：臨床多見于痛風、急性及慢性腎炎、白血病、多發性骨髓瘤等臨床生化檢驗臨床生化檢驗Company Logo二、血清生化檢驗二、血清生化檢驗l6.鉀、鈉、氯 【臨床意義】判定電解質及酸堿平衡情況l7.鈣 【臨床意義】判定甲狀旁腺機能，維生素缺乏癥，骨腫瘤，多發骨髓瘤有意義。 l8.蛋白：總蛋白 、白蛋白 【臨床意義】可了解體內蛋白質代謝的一般情況：對肝腎損害，多發性骨髓瘤等有一定診斷、鑒別診斷意義臨床生化檢驗臨床生化檢驗Company Logo二、血清生化檢驗二、血清生化檢驗l9.血清膽紅素：血清總膽紅素、血清直

14、接膽紅素 【臨床意義】診斷、鑒別診斷黃疸類型有重要意義。心血管疾病、中毒時升高l10.谷丙轉氨酶（ALT） 【臨床意義】對肝膽疾病的診斷及病情變的觀察有重要意義。l11.谷草轉氨酶（AST） 【臨床意義】急性心肌梗塞時升高，肝病及其它臟器炎癥時也常增高臨床生化檢驗臨床生化檢驗Company Logo二、血清生化檢驗二、血清生化檢驗l12.r-谷氨酰轉移酶或轉酞酶（r-GT） 【臨床意義】肝膽系統病變特別是肝癌時明顯增高。l13.肌酸磷酸激酶（CK） 【臨床意義】骨胳肌疾病、甲狀腺功能減退、急性心肌梗塞時顯著升高。l14.乳酸脫氫酶（LDH） 【臨床意義】心、肝、肺等組織急性損害時明顯增高 臨床

15、生化檢驗臨床生化檢驗Company Logo二、血清生化檢驗二、血清生化檢驗l15.堿性磷酸酶（AKP）l【臨床意義】阻塞性黃疸、肝炎、肝硬化、肺癌、骨肉瘤、腫瘤骨轉移等明顯升高。l16.膽堿酯酶（CHE）l【臨床意義】有機磷中毒，嚴重而廣泛的肝實質性損害時減低。 l17. 淀粉酶（AMS） l【臨床意義】診斷胰腺炎、胰腺癌的主要指標之一。流行性腮腺炎甲期，胰腺附近的胃穿孔，也常增高。臨床生化檢驗臨床生化檢驗Company Logo二、血清生化檢驗二、血清生化檢驗l18.總膽固醇、甘油三脂 【臨床意義】了解體內脂代謝情況，對冠心病、動脈粥樣硬化、高血壓、甲狀腺機能減退等診斷有意義。 臨床生化檢

16、驗臨床生化檢驗Company Logo三、血清蛋白檢驗三、血清蛋白檢驗l免疫化學法特異定量個別蛋白質 常規：免疫濁度法、免疫擴散法，免疫電泳 法， 微量：放射免疫測定（RIA），酶免疫測定法 （ELA/ELISA）l電泳測定：電泳 組成圖譜 半定量 定量l定量化學測定TPr，Alb 染料結合法，UV法，折光法等臨床生化檢驗臨床生化檢驗Company Logo三、血清蛋白檢驗三、血清蛋白檢驗- -總蛋白測定總蛋白測定l1.凱氏定氮法參考方法 l2.雙縮脲法(推薦) l3.酚試劑法 l4.散射比濁法l5.染料結合法l6. UV 法l7.折光測定法臨床生化檢驗臨床生化檢驗Company Logo三、

17、血清蛋白檢驗三、血清蛋白檢驗- -總蛋白測定總蛋白測定1.1.凱氏定氮法參考方法凱氏定氮法參考方法l優點：準確度高，精密度高，靈敏度高，是公認的參考方法。l缺點：操作復雜，費時，不適合常規檢測，血清各蛋白含氮量會有所變化尤其是疾病時。l應用：標準蛋白的標定及校正其它常規方法臨床生化檢驗臨床生化檢驗Company Logo三、血清蛋白檢驗三、血清蛋白檢驗- -總蛋白測定總蛋白測定2.雙縮脲法l優點：簡便，準確，重復性好，10g-120g/L線性好，特異性與精密度好，批內CV%2%，顯色穩定。l缺點：靈敏度較差，對蛋白質含量低的體液標本不適合。l應用：常規推薦方法。手工或上機使用。臨床生化檢驗臨床

18、生化檢驗Company Logo三、血清蛋白檢驗三、血清蛋白檢驗- -總蛋白測定總蛋白測定l3.酚試劑法(Folin試劑法）lLowry改良法：在酚試劑中加入Cu2+，提高了呈色的靈敏度，為雙縮脲法的100倍左右。吸收峰為745-750nm。l優點：操作簡單，改良法靈敏度高（10g-60g），適合測定蛋白含量少的標本。l缺點：各種蛋白質酪氨酸和色氨酸比例不同，只適合測定單一蛋白質。受一些藥物干擾。臨床生化檢驗臨床生化檢驗Company Logo三、血清蛋白檢驗三、血清蛋白檢驗- -總蛋白測定總蛋白測定4.比濁法l優點：簡便不需特殊儀器。l缺點：濁度形成的干擾因素多（加試劑方法，反應溫度，蛋白絮

19、狀沉淀等）5.染料結合法l優點：操作簡便，重復性好，靈敏度高，且干擾因素少。l缺點：特異性不高；不同蛋白質和染料的結合力不一致，標準物不易確定。臨床生化檢驗臨床生化檢驗Company Logo三、血清蛋白檢驗三、血清蛋白檢驗- -總蛋白測定總蛋白測定6.紫外分光光度法l優點：敏感而簡便，可保留蛋白生物活性，常用與較純的酶和免疫球蛋白。需紫外分光光度計及石英比色皿。l缺點：各種蛋白質中芳香族氨基酸含量和比例不同；在280nm測定易受游離色aa和酪aa以及尿酸和膽紅素的干擾；核酸在206nm有最大吸收，在280nm有較大吸收，導致準確性和特異性受影響。l措施：在220-225nm波長區域，用0.1

20、5mol/l的NaCl稀釋1000-2000倍可消除干擾。5.染料結合法臨床生化檢驗臨床生化檢驗Company Logo三、血清蛋白檢驗三、血清蛋白檢驗- -總蛋白測定總蛋白測定7.折光測定法l優點：簡便、快速，易掌握，重復性較好，適合臨床急診，體檢篩查和胸腹水蛋白質測定。l缺點：準確性較差，易受高血脂癥，高膽紅素血癥以及溶血等因素影響，會由于A/G比值變化而產生誤差。 臨床生化檢驗臨床生化檢驗Company Logo三、血清蛋白檢驗三、血清蛋白檢驗- -總蛋白測定總蛋白測定臨床意義：l總蛋白升高： 真性升高：MM、巨球蛋白血癥、自身免疫性疾病等 假性升高：機體明顯失水，總蛋白含量相對升高，A

21、/G幾乎不變l總蛋白降低：丟失過多 消耗增加 白蛋白合成減少 水腫臨床生化檢驗臨床生化檢驗Company Logo三、血清蛋白檢驗三、血清蛋白檢驗- -白蛋白測定白蛋白測定l1.染料結合法( 推薦) l2.鹽析法l3.電泳法l4.免疫化學法臨床生化檢驗臨床生化檢驗Company LogoContents概述概述1臨床生化檢查臨床生化檢查2臨床免疫學及血清學檢查臨床免疫學及血清學檢查3血清學新技術血清學新技術Company Logo免疫血清學技術免疫血清學技術臨床免疫學檢驗臨床免疫學檢驗 用于檢測抗原或抗體的體外免疫反應技術或稱免疫檢測技術，這一類技術因一般都需用血清進行試驗，通常稱為免疫血清學

22、反應或免疫血清學技術 。Company Logo免疫血清學實驗免疫血清學實驗臨床免疫學檢驗臨床免疫學檢驗一、凝聚性試驗l凝集試驗：由顆粒性抗原參與l沉淀試驗：由可溶性抗原參與二、標記抗體技術 l熒光抗體標記技術 l酶標抗體技術l同位素標記技術 三、中和試驗 l終點法中和試驗l空斑減少試驗Company Logo免疫血清學實驗免疫血清學實驗- -凝集試驗凝集試驗臨床免疫學檢驗臨床免疫學檢驗l參與凝集試驗的抗體主要為IgG、IgM。l凝集試驗可用于檢測抗原或抗體。l凝集試驗可根據抗原的性質、反應的方式分為直接凝集試驗（簡稱凝集試驗）和間接凝集試驗。 Company Logo免疫血清學實驗免疫血清學

23、實驗- -凝集試驗凝集試驗臨床免疫學檢驗臨床免疫學檢驗直接凝集試驗 l顆粒性抗原與凝集素直接結合并出現凝集現象的試驗稱作直接凝集試驗(direct agglutination test) l玻片法：定性試驗，適用于新分離細菌的鑒定或分型 l試管法：定量試驗，檢測待測血清中是否存在相應抗體和測定抗體含量 Company Logo免疫血清學實驗免疫血清學實驗- -凝集試驗凝集試驗臨床免疫學檢驗臨床免疫學檢驗間接凝集試l將可溶性抗原(或抗體)先吸附于一種與免疫無關的，一定大小的不溶性顆粒(統稱為載體顆粒)的表面，然后與相應抗體(或抗原)作用，在有電解質存在的適宜條件下，所出現的特異性凝集反應稱為間接

24、凝集反應。l敏感性高，但特異性較差 Company Logo免疫血清學實驗免疫血清學實驗- -凝集試驗凝集試驗臨床免疫學檢驗臨床免疫學檢驗間接血凝試驗l將抗原致敏于紅細胞表面，用以檢測相應抗體，在與相應抗體反應時出現肉眼可見凝集，稱為間接血凝試驗(passive heamagglutination assay, PHA) l將抗體致敏于紅細胞表面，用以檢測檢樣本中相應抗原，致敏紅細胞在與相應抗原反應時發生凝集，稱為反向間接血凝試驗(reverse passive heamagglutination assay, RPHA)。Company Logo免疫血清學實驗免疫血清學實驗- -凝集試驗凝集

25、試驗臨床免疫學檢驗臨床免疫學檢驗乳膠凝集試驗l聚苯乙烯乳膠是利用化工原料聚苯乙稀經過乳液聚合得到的高分子乳膠液，乳膠微球直徑約0.8m。l對蛋白質、核酸等高分子物質具有良好的吸附性能。l利用聚苯乙烯乳膠的微球作載體，以吸附某些抗原(或抗體)，即能用以檢測相應的抗體(或抗原)，稱為乳膠凝集反應。(latex agglutination test)Company Logo免疫血清學實驗免疫血清學實驗- -凝集試驗凝集試驗臨床免疫學檢驗臨床免疫學檢驗協同凝集試驗l葡萄球菌A蛋白(staphylococal protein A，簡稱SPA)是大多數金黃色葡萄球菌的特異性表面抗原，能與多種哺乳動物IgG

26、分子的Fc片結合。lSPA與IgG結合后，其Fab片暴露于外，并保持其抗體活性。l當此被覆著特異性抗體的葡萄球菌與相應的抗原結合時，就可互相連結引起協同凝集反應，簡稱COAG。 Company Logo免疫血清學實驗免疫血清學實驗- -沉淀試驗沉淀試驗臨床免疫學檢驗臨床免疫學檢驗 可溶性抗原(如細菌的外毒素、內毒素、菌體裂解液，病毒的可溶性抗原、血清、組織浸出液等)與相應抗體結合，在適量電解質存在下，形成肉眼可見的白色沉淀，稱為沉淀試驗(precipitation test)。 Company Logo免疫血清學實驗免疫血清學實驗- -沉淀試驗沉淀試驗臨床免疫學檢驗臨床免疫學檢驗環狀沉淀試驗l

27、在小口徑試管內先加入已知抗血清，然后小心沿管壁加入待檢抗原于血清表面，使之成為分界清晰的兩層l數分鐘后，兩層液面交界處出現白色環狀沉淀，即為陽性反應。l本法主要用于抗原的定性試驗，如炭疽病的診斷(Ascoli試驗)。試驗時出現白色沉淀帶的最高抗原稀釋倍數，即為血清的沉淀價。 Company Logo免疫血清學實驗免疫血清學實驗- -沉淀試驗沉淀試驗臨床免疫學檢驗臨床免疫學檢驗瓊脂免疫擴散試驗l抗原抗體在瓊脂凝膠中擴散，當二者在比例適當處相遇，即發生沉淀反應，形成肉眼可見的沉淀帶，此種反應稱為瓊脂免疫擴散，又簡稱瓊脂擴散和免疫擴散。l單向單擴散 單向雙擴散l雙向單擴散 雙向雙擴散Company

28、Logo免疫血清學實驗免疫血清學實驗- -酶標抗體技術酶標抗體技術臨床免疫學檢驗臨床免疫學檢驗l根據抗原抗體反應的特異性和酶催化反應的高敏感性而建立起來的免疫檢測技術。l基本程序：標記抗原抗體復合物底物l根據底物溶液的顏色反應來判定有無相應的免疫反應。顏色反應的深淺與標本中相應抗體或抗原的量呈正比。 Company Logo免疫血清學實驗免疫血清學實驗- -酶標抗體技術酶標抗體技術臨床免疫學檢驗臨床免疫學檢驗酶聯免疫吸附試驗(ELISA)lELISA是當前應用最廣、發展最快的一項新技術。其基本過程是將抗原(或抗體)吸附于固相載體，在載體上進行免疫酶染色反應，底物顯色后用肉眼或分光光度計判定結果

29、。 Company Logo免疫血清學實驗免疫血清學實驗- -酶標抗體技術酶標抗體技術臨床免疫學檢驗臨床免疫學檢驗免疫組化染色技術l標本制備和處理：組織切片、壓片、涂片、細胞蓋片；消除內源性過氧化酶l染色：間接法、直接法l顯色l觀察Company Logo免疫血清學實驗免疫血清學實驗- -放射免疫測定（放射免疫測定（RIARIA）臨床免疫學檢驗臨床免疫學檢驗l將同位素測量的高度敏感性和抗原抗體反應的高度特異性結合起來而建立的免疫分析技術l可定量分析，也可定性分析l特異性強、靈敏度高、準確性和精密度好Company Logo免疫血清學實驗免疫血清學實驗- -中和試驗中和試驗 臨床免疫學檢驗臨床免

30、疫學檢驗l抗體能否中和病毒的感染性而建立的免疫學試驗稱為中和試驗。l主要用于病毒感染的血清學診斷、病毒分離株的鑒定、不同病毒株的抗原關系研究、疫苗免疫原性的評價、免疫血清的質量評價和檢測動物血清中的抗體等。 Company Logo免疫血清學實驗免疫血清學實驗- -中和試驗中和試驗 臨床免疫學檢驗臨床免疫學檢驗終點法中和試驗(endpoint neutralization test) l固定病毒稀釋血清法：測定病毒毒價；固定病毒稀釋血清接種細胞或動物，計算中和價 l固定血清稀釋病毒法：固定血清稀釋病毒接種細胞或動物，計算LD50，然后計算中和指數（中和組LD50/對照組LD50） Compan

31、y Logo免疫血清學實驗免疫血清學實驗- -中和試驗中和試驗 臨床免疫學檢驗臨床免疫學檢驗l空斑減少試驗(plague reduction test)：空斑數減少50的血清量作為中和滴度l病毒稀釋成每一接種劑量含100PFU，加倍比稀釋的血清，37 1hl接種細胞l加入預溫的營養瓊脂l計算空斑數Company Logo免疫血清學實驗免疫血清學實驗- -其他檢測技術其他檢測技術 臨床免疫學檢驗臨床免疫學檢驗l免疫轉印技術（immunoblotting） l免疫沉淀（immunoprecipitation） l化學發光免疫測定（chemiluminescent immunoassay，CLIA）

32、 l膠體金免疫檢測技術 Company Logo免疫血清學實驗免疫血清學實驗- -沉淀試驗沉淀試驗臨床免疫學檢驗臨床免疫學檢驗間接血凝試驗l將抗原致敏于紅細胞表面，用以檢測相應抗體，在與相應抗體反應時出現肉眼可見凝集，稱為間接血凝試驗(passive heamagglutination assay, PHA) l將抗體致敏于紅細胞表面，用以檢測檢樣本中相應抗原，致敏紅細胞在與相應抗原反應時發生凝集，稱為反向間接血凝試驗(reverse passive heamagglutination assay, RPHA)。Company Logo免疫血清學實驗免疫血清學實驗臨床免疫學檢驗臨床免疫學檢驗一

33、、凝聚性試驗l凝集試驗：由顆粒性抗原參與l沉淀試驗：由可溶性抗原參與Company Logo免疫血清學實驗免疫血清學實驗臨床免疫學檢驗臨床免疫學檢驗一、凝聚性試驗l凝集試驗：由顆粒性抗原參與l沉淀試驗：由可溶性抗原參與Company Logo免疫血清學實驗免疫血清學實驗臨床免疫學檢驗臨床免疫學檢驗一、凝聚性試驗l凝集試驗：由顆粒性抗原參與l沉淀試驗：由可溶性抗原參與Company Logo1 1、總補體和單個成分的測定、總補體和單個成分的測定臨床免疫學檢驗臨床免疫學檢驗血清總補體溶血活性（CH50）測定l50溶血法：50100Umll脂質體法：2655 lUmll目視比色法 Company L

34、ogo1 1、總補體和單個成分的測定、總補體和單個成分的測定臨床免疫學檢驗臨床免疫學檢驗臨床意義 補體是機體免疫防御系統的重要組成部分，其主要功能是抗感染，同時也有引起炎癥的作用，參與變態反應。總補體活性測定，主要是反映補體(C1C9)經傳統途徑活化的活性。 等。Company Logo1 1、總補體和單個成分的測定、總補體和單個成分的測定臨床免疫學檢驗臨床免疫學檢驗l總補體活性升高：見于各種急性炎癥、感染、組織損傷、惡性腫瘤等，一些傳染病，如風濕熱、傷寒、結核、麻疹等也可見補體代償性升高l總補體活性降低，可能有以下幾種原因： (1)補體消耗增多：常見于血清病、急性腎小球腎炎、慢性腎炎、SLE

35、活動期、惡性類風濕性關節炎、自身免疫性溶血性貧血等。 (2)補體大量喪失：多見于腎病綜合征乃大面積烙傷等情況；。 (3)補體合成不足：主要見于各種肝病患者，如肝硬化、慢性活動性肝炎及急性重癥肝炎Company Logo1 1、總補體和單個成分的測定、總補體和單個成分的測定臨床免疫學檢驗臨床免疫學檢驗l常作為單個補體成分的檢測指標：C3、C4、C1q、B因子和C1酯酶抑制物等。l測定方法： 免疫溶血法 （檢測單個補體成分的活性） 免疫化學法（檢測單個補體成分的含量） 自動化免疫散射比濁法 Company Logo1 1、總補體和單個成分的測定、總補體和單個成分的測定臨床免疫學檢驗臨床免疫學檢驗免

36、疫溶血法-以“C4活性測定”為例l該方法要用新鮮RBC、溶血素、豚鼠血清、影響因素多。l也可用平皿法： 用EAR4制備瓊脂板、打孔、加樣，以溶血環直徑大小判斷C4活性。l用免疫化學法檢測C4含量，簡單、特異、重復性好，但不能反映其活性。l4.臨床意義：用于檢測先天性補體缺乏； 含量降低：遺傳性血管性水腫、原發性混合性冷球蛋白血癥。Company Logo1 1、總補體和單個成分的測定、總補體和單個成分的測定臨床免疫學檢驗臨床免疫學檢驗免疫化學法分類：1.單向免疫擴散 2.火箭免疫電泳 3.透射比濁法 4.散射比濁法l前兩種方法：手工操作繁瑣、耗時長、影響因素多、結果重復性差，已趨于淘汰。l后兩

37、種方法：通過儀器對補體的C3、C4、B因子等單個成分進行自動化測定 。Company Logo2 2、免疫球蛋白測定、免疫球蛋白測定臨床免疫學檢驗臨床免疫學檢驗l免疫球蛋白G（IgG）l免疫球蛋白A（IgA）l免疫球蛋白M（IgM）l免疫球蛋白D（IgD）l免疫球蛋白E（IgE）l心肌肌鈣蛋白T（cTnT）l肌紅蛋白（Mb）l類風濕因子（RF）Company Logo2 2、免疫球蛋白測定、免疫球蛋白測定臨床免疫學檢驗臨床免疫學檢驗l1.低Ig血癥（1）先天性低Ig血癥 （2）獲得性低Ig血癥l2.高Ig血癥（1）非特異型多克隆免疫球蛋白增高癥 （2）特異型單克隆免疫球蛋白增殖癥Company

38、 Logo2 2、免疫球蛋白測定、免疫球蛋白測定臨床免疫學檢驗臨床免疫學檢驗l（一）血清蛋白區帶電泳 M區帶的出現l（二）免疫球蛋白定量 某一類免疫球蛋白的顯著增高l（三）輕鏈片段定量測定 單向免疫擴散法或ELISAl（四）免疫電泳或免疫固定電泳Company Logo2 2、免疫球蛋白測定、免疫球蛋白測定臨床免疫學檢驗臨床免疫學檢驗免疫球蛋白G（IgG）l增高： IgG、IgA、IgM在機體的防御中發揮重要作用。若IgG、IgA、IgM幾種不同的免疫球蛋白均增高稱之為多克隆性增高，常見于各種感染，特別是慢性感染、自身免疫性疾病如系統性紅斑狼瘡（SLE）、淋巴瘤、肺結核、肝臟疾病和寄生蟲病等；

39、 單一的免疫球蛋白增高，又稱單克隆性增高，主要見于免疫增殖性疾病，如多發性骨髓瘤等。lIgG降低： 可見于各種先天性或獲得性體液免疫缺陷病、聯合免疫缺陷病等。Company Logo2 2、免疫球蛋白測定、免疫球蛋白測定臨床免疫學檢驗臨床免疫學檢驗免疫球蛋白A（IgA）l增高： 見于IgA型分泌型多發性骨髓瘤（MM）、系統性紅斑狼瘡、類風濕關節炎、肝硬化和腎臟疾病等。l降低： 多見于反復呼吸道感染、原發性和繼發性免疫缺陷病及自身免疫性疾病等。Company Logo2 2、免疫球蛋白測定、免疫球蛋白測定臨床免疫學檢驗臨床免疫學檢驗免疫球蛋白M（IgM）l增高： 見于病毒性肝炎初期、系統性紅斑狼

40、瘡、類風濕關節炎、肝硬化等。l降低： 可見于IgA型多發性骨髓瘤、先天性免疫缺陷病、免疫抑制療法后、淋巴系統疾病和腎病綜合征等。Company Logo2 2、免疫球蛋白測定、免疫球蛋白測定臨床免疫學檢驗臨床免疫學檢驗免疫球蛋白D（IgD）l升高：多發性高IgD血癥：慢性感染性疾病（結核、麻風、骨髓炎、化膿性皮膚病）、惡性營養不良、特異反應性疾病、部分原發性免疫缺陷癥（高IgM血癥、伴免疫球蛋白缺乏癥、IgA單獨缺乏癥）、周期性發熱（2-12年）等；單純性高IgD血癥：IgD骨髓瘤、良性單純性免疫球蛋白血癥很少、IgD型多發性骨髓瘤等。 l降低：IgD缺乏的家族（常染色體異常）、IgD、IgA

41、、IgM免疫球蛋白減少為原發性免疫功能缺陷癥（幼畜的一過性低-球蛋白血癥、重癥復合性免疫功能缺陷癥（SCID）、Good綜合征，IgD顯著減少甚至消失：類肉瘤病、IgD單獨缺乏有易感的傾向等。 Company Logo2 2、免疫球蛋白測定、免疫球蛋白測定臨床免疫學檢驗臨床免疫學檢驗免疫球蛋白E（IgE）l升高： 見于變態反應性疾病、寄生蟲感染、急慢性肝炎、系統性紅斑狼瘡、類風濕性關節炎等。特別是IgE型多發性骨髓瘤病病畜，IgE增高可作為臨床確診依據。l降低： 多見于先天性或獲得性丙種球蛋白缺乏癥、惡性腫瘤、長期使用免疫抑制劑等。Company Logo2 2、免疫球蛋白測定、免疫球蛋白測定

42、臨床免疫學檢驗臨床免疫學檢驗心肌肌鈣蛋白T（cTnT）l肌鈣蛋白為近年來發現的心肌蛋白標志物，具有高度心肌特異性。主要用于診斷心肌缺血性損傷，包括心絞痛、可逆性心肌組織損傷、不穩定性心絞痛、心肌梗死等。 Company Logo2 2、免疫球蛋白測定、免疫球蛋白測定臨床免疫學檢驗臨床免疫學檢驗肌紅蛋白（Mb）l肌紅蛋白是一項出現早、敏感性高而非特異性的診斷指標，對急性心肌梗死（AMI）早期診斷有一定價值。它存在于心肌和骨骼肌中，在急性心肌梗死時釋放入血，癥狀出現后13小時升高，412小時達到高峰，故在診斷急性心肌梗死和判斷急性心肌梗死病情方面具有主要一定的價值。l（1） 骨骼肌損傷： 急性肌肉

43、損傷和肌病。l（2） 休克。l（3） 急性或慢性腎衰竭。Company Logo3 3、免疫復合物的測定、免疫復合物的測定臨床免疫學檢驗臨床免疫學檢驗免疫復合物：l抗原特異性循環免疫復合物l非抗原特異性循環免疫復合物Company Logo3 3、免疫復合物的測定、免疫復合物的測定臨床免疫學檢驗臨床免疫學檢驗一、PEG 比濁法lPEG 用于沉淀蛋白質，沉淀具有可選性，對蛋白質生物活性無影響。在pH、離子強度等條件固定時，蛋白質分子量越大，用以沉淀的 PEG 濃度越小。分離血清免疫復合物一般采用最終濃度為 34PEG(分子量 6000)，對蛋白質沉淀具有良好的選擇性。其濁度與血清中免疫復合物含量

44、相關，用分光光度計測定其 A 值，以每批試驗熱聚人 IgG(heat agglutionafionhuman IgG，HAHG)制備出標準曲線，可得免疫復合物相對含量。Company Logo3 3、免疫復合物的測定、免疫復合物的測定臨床免疫學檢驗臨床免疫學檢驗二、C1q 固相法l利用循環免疫復合物具有與 C1q 結合的特性，包被 Clq 于微量反應板，加入待測血清，免疫復合物與 C1q 結合，再用標記抗人 IgG 檢測免疫復合物中 IgG，加底物顯色，根據顏色深淺判斷免疫復合物含量。反應層次為C1q-免疫復合物一酶標記抗人 IgG 底物。Company Logo3 3、免疫復合物的測定、免疫

45、復合物的測定臨床免疫學檢驗臨床免疫學檢驗三、抗 C3 一 CICELISAl將抗 C3 抗體包被，循環免疫復合物在體內已結合了 C3，通過 C3 介導CIC 與固相抗 C3 連接，加酶標記抗人 IgG 檢測復合物中 IgG，加底物顯色，根據顏色深淺判斷免疫復合物含量，反應層次為抗 c3 抗體一免疫復合物一酶標記抗人 IgG 抗體一底物。Company Logo3 3、免疫復合物的測定、免疫復合物的測定臨床免疫學檢驗臨床免疫學檢驗Raji 細胞法：lRaji 細胞是由 Burkitt 淋巴瘤患者分離建立的 B 細胞株，可在體外長期傳代。其表面有大量 C3b、C1q 和 C3d 受體，無 mIg，

46、利用這些受體與結合補體的循環免疫復合物結合，加入同位素標記的抗人 IgG，反應層次為 Raji 細胞一循環免疫復合物一同位素標記抗人 IgG 復合物。本方法敏感性較高，實用性強。但需培養 Raji 細胞及同位素標記抗 IgG，操作繁瑣，不易長期保持實驗結果的穩定。Company Logo3 3、免疫復合物的測定、免疫復合物的測定臨床免疫學檢驗臨床免疫學檢驗評價：高度敏感性；簡便可作常規應用；相對特異性，能檢出各種抗體類型和分子大小的循環免疫復合物；重復性好；試驗前不需對標本進行滅活或特殊處理。檢測循環免疫復合物的方法雖有幾十種，但仍沒有一種能具備上述所有特點。所以各種方法只能檢測某一類或某個范

47、圍的免疫復合物；不同方法檢測循環免疫復合物原理各異。Company Logo4 4、自身抗體的檢測、自身抗體的檢測臨床免疫學檢驗臨床免疫學檢驗l（一）抗核抗體 （antinuclear antibody，ANAl（二）抗ENA抗體譜l（三）類風濕因子（rheumatoid factor，RF） l（四）其他自身抗體Company Logo4 4、自身抗體的檢測、自身抗體的檢測臨床免疫學檢驗臨床免疫學檢驗（一）ANA的檢測方法l間接免疫熒光法l用小鼠肝切片或印片作為細胞核基質，還可用核質豐富的培養細胞如Hep-2，作為抗原。l用熒光顯微鏡觀察ANA熒光著染強度和免疫熒光圖形。l稀釋待檢血清可檢測

48、ANA效價。Company Logo4 4、自身抗體的檢測、自身抗體的檢測臨床免疫學檢驗臨床免疫學檢驗（二）抗ENA抗體譜的檢測方法l雙向免疫擴散l對流免疫電泳l斑點酶免疫技術l免疫印跡技術Company Logo4 4、自身抗體的檢測、自身抗體的檢測臨床免疫學檢驗臨床免疫學檢驗（三）類風濕因的檢測方法lRF的檢測最常用IgG致敏的膠乳顆粒凝集試驗，或速度散射比濁法，但只能檢測IgM類的RF。IgG類，IgA類和IgE類RF需ELISA等方法檢測Company Logo5 5、腫瘤免疫學檢查、腫瘤免疫學檢查臨床免疫學檢驗臨床免疫學檢驗腫瘤標志物檢測l放射免疫測定法（RIA）l酶免疫測定法（EIA）l熒光免疫測定法 （FEIA）l時間分辨熒光分析法l化學發光